千金文武湯對糖尿病腎病大鼠血糖和腎功能的影響

盧煥俊，金元哲，許青松

(延邊大學(xué)生理學(xué)教研室，吉林延吉133002)

糖尿病腎病(DN)是糖尿病患者的主要死因之一［1］。30% ～50%的1型糖尿病患者及20%的2型糖尿病患者伴隨顯著的腎功能損壞，同時DN也是造成終末期腎病的主要原因之一［2，3］。目前DN的治療只能從某種程度上延緩其發(fā)展。最新研究表明，嚴(yán)格控制血糖能夠降低DN的發(fā)生率，但同時會增加病死率［4］。因此需要尋求更加安全、有效的治療方法。千金文武湯出自《東醫(yī)四象新編》朝藥藥方，具有補肺、斂肺元、養(yǎng)胃生津的功效。2014年2～6月，我們采用千金文武湯對DN大鼠進(jìn)行輔助治療，觀察其對DN引起的糖代謝異常的調(diào)節(jié)和腎功能的改善作用。

1 材料與方法

1.1 材料 清潔級雄性SD大鼠130只，體質(zhì)量250 g左右，由吉林大學(xué)實驗動物中心提供。千金文武湯(山藥 10 g、葛根 10 g、藳本 10 g、黃芪 10 g、五味子5 g、麥冬5 g、桔梗5 g、白芷5 g、升麻5 g)由延吉市中醫(yī)醫(yī)院提供，熬制成濃度為10、5、2.5 g/kg的湯劑。鏈脲佐菌素(STZ)購于美國Sigma公司，鹽酸貝那普利購于北京諾華制藥有限公司。血尿素氮、肌酐試劑盒均購于南京建成科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 DN模型的建立 大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，術(shù)前禁食不禁水12 h，其中120只行左腎切除手術(shù)［5］，10只作為正常對照組，行假手術(shù)，麻醉后暴露左腎，從左背部入口分離左腎，不做任何處理，關(guān)閉切口。1周后禁食不禁水12 h，腎切除大鼠腹腔注射STZ 55 mg/kg，以血糖≥16.7 mmol/L、24 h 尿量≥80 mL、肌酐清除率≥1.5 mL/min為造模成功。

1.2.2 分組及給藥方法 從造模成功中的大鼠中隨機挑選50只，分為陽性對照組、模型組、千金文武湯低劑量(2.5 g/kg)組、千金文武湯中劑量(5 g/kg)組、千金文武湯高劑量(10 g/kg)組各10只，千金文武湯組分別灌胃對應(yīng)劑量湯劑，陽性對照組給予洛丁新10 mg/kg灌胃，正常對照組與模型組給予等量蒸餾水灌胃，1次/d，連續(xù)30 d。

1.2.3 觀察指標(biāo) 灌胃期間觀察各組體毛、呼吸、攝食、飲水、大小便、精神狀態(tài)的變化，每日測量體質(zhì)量。灌胃結(jié)束最后1 d測量給藥組24 h尿量。心臟采血后，用Ultra穩(wěn)豪型血糖儀直接測定空腹血糖，酶聯(lián)免疫法測定血尿素氮(BUN)、尿肌酐(Ucr)和血肌酐(Scr)。肌酐清除率(Ccr)的計算公式:Ccr=Ucr/Scr×每分鐘尿量)。

1.2.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS11.5統(tǒng)計軟件，結(jié)果以±s表示，數(shù)據(jù)的比較采用單因素方差分析以及t檢驗。P≤0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組體質(zhì)量、24 h尿量及一般狀態(tài)比較 模型組體質(zhì)量低于正常組(P＜0.05)，千金文武湯各劑量組體質(zhì)量與陽性對照組和模型組相比無統(tǒng)計學(xué)差異(P均＞0.05);模型組24 h尿量明顯高于千金文武湯各劑量組(P均＜0.05)。見表1。實驗結(jié)束后對各組動物進(jìn)行解剖，肉眼觀察腎、脾、心、胃腸、肝和肺等臟器，未發(fā)現(xiàn)明顯異常。

表1 各組體質(zhì)量和24 h尿量比較(±s)

表1 各組體質(zhì)量和24 h尿量比較(±s)

注:與模型組比較，*P ＜0.05

組別 n 體質(zhì)量(g) 24 h尿量(mL)高劑量組 10 200.34 ±30.82 90.35 ±18.30*中劑量組 10 203.30 ±37.60 95.12 ± 7.55*低劑量組 10 191.55 ±45.50 93.53 ±20.73*模型組 10 180.00 ±33.74 120.85 ±25.88陽性對照組 10 191.50 ±22.50 105.50 ±20.50正常對照組 10 320.45 ±23.85* 18.74 ± 5.46*

2.2 各組血生化指標(biāo)比較 模型組空腹血糖濃度明顯高于千金文武湯各劑量組和陽性對照組(P均＜0.05)，而千金文武湯各劑量組與陽性對照組之間無統(tǒng)計學(xué)差異(P均＞0.05)。千金文武湯各劑量組和陽性對照組的BUN、Scr和Ccr均低于模型組(P＜0.05)，千金文武湯各劑量組與陽性對照組比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。見表2。

表2 各組血糖、尿素氮、血肌酐濃度和肌酐清除率比較(±s)

表2 各組血糖、尿素氮、血肌酐濃度和肌酐清除率比較(±s)

注:與模型組比較，*P ＜0.05

組別 n 血糖(mmol/L) BUN(mmol/L) Scr(μmol/L) Ccr(mL/min)高劑量組 10 19.44 ±1.28* 8.70 ±0.59* 123.42 ± 8.74* 1.28 ±0.18*中劑量組 10 19.94 ±1.13* 8.57 ±1.26* 120.49 ±11.35* 1.32 ±0.15*低劑量組 10 20.22 ±2.49* 11.33 ±1.34* 130.90 ± 7.15* 1.39 ±0.15*模型組 10 27.24 ±0.86 14.47 ±1.44 154.97 ±11.11 3.01 ±0.56陽性對照組 10 22.56 ±1.22* 10.76 ±0.90* 132.48 ± 5.49* 1.51 ±0.33*正常對照組 10 5.39 ±0.18* 6.72 ±0.32* 69.09 ± 3.66* 0.64 ±0.06*

3 討論

高血糖是糖尿病逐漸惡化為DN的前提，本實驗利用STZ誘導(dǎo)大鼠形成DN，造模成功后測得空腹血糖均高于16.7 mmol/L。這種高血糖是DN發(fā)生發(fā)展的重要因素。其可能機制包括:機體大部分組織可以通過減少葡萄糖的輸入來保護(hù)自身免遭高血糖的破壞，而內(nèi)皮細(xì)胞沒有這種葡萄糖誘導(dǎo)的自動調(diào)節(jié)的反應(yīng)功能［4］，導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)葡萄糖與代謝中產(chǎn)物的持續(xù)升高，損傷內(nèi)皮細(xì)胞并加速其凋亡;葡萄糖氧化過程中伴有大量氧自由基，活性氧產(chǎn)生［5］，造成氧化應(yīng)激損傷血管內(nèi)皮，改變腎臟血液流變學(xué)，引起腎單位結(jié)構(gòu)、功能等改變，促使DN發(fā)生發(fā)展。

研究表明，控制血糖水平可以延緩DN的發(fā)展進(jìn)程，減輕腎臟病理損害［6］。千金文武湯由葛根、山藥、藳本、黃芪、麥冬、桔梗等中藥組成，其中葛根含有葛根素、大豆黃酮，具有醛糖還原酶活性，有抑制蛋白非酶糖化的功效，從而發(fā)揮降糖作用［7］。山藥的主要有效成分薯蕷皂甙［8］可刺激或調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)的功能，山藥提取物對禁食大鼠有降血糖作用，能控制四氧嘧啶引起的高血糖［9］，對四氧嘧啶所致的大鼠胰島β細(xì)胞損傷有保護(hù)作用。張忠泉等［10］認(rèn)為，山藥多糖對DM的治療作用可能與增加胰島素分泌、改善受損的胰島β細(xì)胞功能有關(guān)。麥冬的主要化學(xué)成分為各種類型的多聚糖、甾體皂苷、高異黃酮類化合物以及氨基酸等成分［11］。麥冬多糖能明顯降低小鼠的血糖，同時對葡萄糖、腎上腺素及四氧嘧啶所致的小鼠高血糖具有明顯的抑制作用，其作用機制可能為減少四氧嘧啶對胰島β細(xì)胞損傷或?qū)@種損傷具有一定程度的保護(hù)和修復(fù)作用［12］。王丹蕊等［13］報道，麥冬多糖可以降低STZ致DM大鼠的血糖，對DM大鼠血液學(xué)指標(biāo)和激素的調(diào)節(jié)作用顯著。桔梗含有大量三萜皂苷，具有明顯的降糖作用［14］。本實驗結(jié)果表明，模型組血糖持續(xù)升高，而千金文武湯大、中、小劑量組血糖明顯降低，與模型組比較有統(tǒng)計學(xué)差異。表明千金文武湯能夠控制DN大鼠血糖的持續(xù)升高。

BUN、Scr、Ccr是評價DN療效的客觀指標(biāo)。本研究顯示，造模后各組 BUN、Scr、Ccr比較，模型組均明顯高于正常對照組，提示腎臟受到了一定的損害。給藥后陽性對照組與千金文武湯各劑量組的BUN均低于模型組，說明千金文武湯能夠降低DN大鼠升高的BUN;給藥后千金文武湯各劑量組的Scr、Ccr明顯也均低于模型組;故千金文武湯對DN大鼠升高的Scr和Ccr具有一定的調(diào)節(jié)作用。Ccr主要反映的是腎小球的濾過功能，Ccr的高低與尿量呈正比，因此尿量是影響Ccr的直接因素。給藥組尿量明顯低于模型組和陽性對照組也進(jìn)一步證明其具有改善DN大鼠腎臟病理損害的作用，對DN具有一定的輔助治療作用。

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