綿羊肺炎支原體溶血素TlyC基因的克隆及分子特征分析

胡政香，孟慶玲＊，喬 軍，趙海龍，馬 玉，劉田莉，贊哈爾·波拉提，才學鵬，陳創夫

（1.石河子大學動物科技學院，新疆石河子832003；2.中國農業科學院蘭州獸醫研究所，甘肅蘭州730046）

綿羊肺炎支原體（Mycoplasmaovipneumoniae，MO）是引起綿羊傳染性胸膜肺炎（Contagious ovinepleuropneumonia）的一種慢性呼吸道疫病的病原，它不僅能感染綿羊，同時也可感染山羊，主要危害1月齡到3月齡的羔羊，在臨床上以高熱流鼻涕、咳嗽、漸進性消瘦和增生性間質性肺炎為主要特征［1－3］。此外，羊感染MO 后，會出現免疫抑制，引起其他病原繼發感染，導致感染動物死亡［4－5］。

新疆是我國五大牧區之一，綿羊養殖業在畜牧業中占有重要的地位。近幾年，在新疆多個地區種羊場先后疑似綿羊傳染性胸膜肺炎的疾病，發病率可達40～60%，給新疆養羊業造成了很大的經濟損失。因此，開展MO 病原學及致病機制研究對于該病的科學防控具有重要的意義。然而，目前有關MO 研究較少，尤其是對于重要毒力因子缺乏了解，因此對其致病分子機制知之甚少［6］。2013年，有人首次對MO SC01株進行全基因組的測序研究，預測和發現了MO 的一些重要毒力基因［7］。為了研究MO 毒力因子，本試驗對MO 新疆分離株溶血素（hemolysin，TlyC）進行克隆和測序，并對TlyC基因及其編碼氨基酸序列進行分子特征分析，旨在了解MOTlyC生物學功能及其在致病中的作用。

1 材料與方法

1.1 菌株及試劑

綿羊肺炎支原體新疆分離株（MO XJ分離株）分離自新疆某羊場送檢的疑似MO 感染羊的病料。LB培養基由本研究室自配（10g胰蛋白胨，10g氯化鈉，5g酵母提取物，加蒸餾水定容至1L）。……