原發性干燥綜合征B 細胞亞群與疾病活動性的相關性分析

楊 靜，鄧代華，鄒晉梅，張 羽，田 嵐，李思吟

(四川省綿陽市中心醫院風濕科，四川 綿陽621000)

干燥綜合征Sj?gren's syndrome 是一種破壞外分泌腺體，以累及唾液腺及淚腺為主的慢性自身免疫性疾病，可分為原發性及繼發性，也可與其他結締組織病相重疊。研究發現，原發性干燥綜合征(primary Sj?gren's syndrome，PSS)患者外周血B 細胞亞群與健康人存在明顯差異，CD19+IgD+B 細胞比例明顯增多，并且明顯高于類風濕關節炎、系統性紅斑狼瘡及系統性硬化癥患者，而CD19+CD38+B 細胞比例明顯減少［1］。本研究對我科住院治療的PSS 患者進行CD19+IgD+B 細胞亞群分析，探討其對評價PSS疾病活動性的意義。

1 對象與方法

1.1 研究對象 2013 年1 月至2014 年1 月四川省綿陽市中心醫院住院的原發性PSS 患者68 例，診斷均符合2012 年美國風濕病學會干燥綜合征分類(診斷)標準［2］，均為初次診斷，未經過任何激素及免疫抑制劑治療。男8 例，女60 例;年齡(36．84±16．5)歲;病程(13．27±10．2)月。

1.2 方法 ①CDI9+IgD+B 細胞亞群檢測:采用藻紅蛋白花青苷(PECY5)標記的鼠抗人CDl9 單克隆抗體、藻紅蛋白(PE)標記的鼠抗人IgD 單克隆抗體標記患者外周血B 細胞。應用金域檢驗中心Cytomics FC 500 流式細胞儀及其分析軟件對CD19+IgD+B 細胞亞群比例進行分析。②臨床資料收集:收集患者臨床表現、實驗室檢測結果、唇腺病理檢測結果，并根據全身癥狀、淋巴結、腺體、關節、皮膚、肺、腎臟、骨骼肌、周圍神經系統、中樞神經系統、血液系統、血清學變化計算疾病活動指數(ESSDAI)［3］和唇腺浸潤灶指數(FS)［2］。無淋巴細胞聚集灶形成的患者為FS(-)，存在至少1 個淋巴細胞聚集灶的患者為FS(+)。

1.3 統計學方法 采用SPSS 17．0 統計軟件進行數據處理。計量資料以均數±標準差表示，采用獨立樣本t檢驗;兩變量間相關關系采用直線相關分析。P＜0．05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 CD19+IgD+B 細胞亞群比例及ESSDAI 68例原發性PSS 患者ESSDAI 為(21．18±9．56)分，CD19+IgD+B 細胞比例為(3．2306±1．0418)% (圖1)。CD19+IgD+B 細胞比例與ESSDAI 呈正相關(r=0．662，P＜0．05)，見圖2。

圖1 PSS 患者CD19+IgD+B 細胞亞群流式圖

圖2 CD19+IgD+B 細胞比例與ESSDAI 相關分析散點圖

2.2 唇腺病理與CD19+IgD+B 細胞比例分析 FS(+)患者42 例，FS(-)患者26 例。FS(+)患者外周血CD19+IgD+B 細胞比例明顯高于FS(-)患者(P＜0．05);在FS(+)患者中生發中心(+)患者外周血CD19+IgD+B 細胞比例明顯高于生發中心(-)患者(P＜0．05)，見表1。

表1 唇腺病理與CD19+IgD+B 細胞比例分析 (%)

3 討論

PSS 病因和發病機制復雜，傳統的觀點認為在PSS 和其它風濕性疾病中，T 細胞耐受的喪失是導致疾病最主要的因素。但近期研究發現B 淋巴細胞刺激因子(BAFF)的產生與PSS 之間的緊密聯系以及用B 細胞耗竭藥物成功地治療PSS 患者都說明B 細胞在PSS 疾病發生中的中心地位。因此B細胞功能紊亂是PSS 的重要特征，特別是B 細胞增殖異常導致高丙種球蛋白血癥，大量自身抗體(抗RO/SSA 和抗-SSB、組蛋白、單鏈DNA、類風濕因子)及淋巴瘤的產生在PSS 的發病中起了重要作用。B細胞與PSS 的發病密切相關。

目前大多數研究表明，B 淋巴細胞功能的異常在PSS 的發病機制中起著重要的作用。B 淋巴細胞被異?；罨螅a生多種自身抗體、多克隆的免疫球蛋白及免疫復合物，進而激活腺體局部炎癥反應，最終導致涎腺和淚腺遭受破壞［4，5］。在唇腺病理活檢中，可見到大量淋巴細胞浸潤，包括B 淋巴細胞及T淋巴細胞，對唇腺B 淋巴細胞進行分類發現存在不同成熟狀態的B 細胞，其中可見大量的漿細胞浸潤。研究根據B 細胞表面IgD 及CD38 表達的不同及不同的成熟狀態，可分為B1 到B5 不同類型的5種B 細胞亞群，即Bm1、Bm2、Bm3、Bm4、Bm5［6］。這些B 細胞均表達CD19，CD19+IgD+B 細胞在原發性PSS 外周血高表達，提示CD19+IgD+B 細胞與原發性PSS 發病密切相關［7，8］。

Binard 等［1］研究也發現，原發PSS 患者外周血中確實存在不同的B 淋巴細胞亞群，并且這些B 淋巴細胞亞群可作為診斷原發PSS 的一個可靠的免疫學依據。B5 細胞稱為漿細胞，可產生大量的自身抗體，其中在PSS 外周血CD19+IgD+B 細胞比例是明顯增高的。研究發現，原發性PSS 患者外周血CD19+IgD+B 細胞比例明顯高于健康者、類風濕關節炎患者及系統性紅斑狼瘡患者［7～9］。說明B 細胞免疫在原發PSS 免疫紊亂中起著關鍵的作用。

唇腺活檢是診斷PSS 的一個重要標準，淋巴細胞大量浸潤腺體間質并形成浸潤灶是患者腺體的主要病理學特點。國內學者研究發現，FS(+)患者的臨床癥狀較FS(-)患者嚴重，而FS(+)患者中生發中心(+)患者的臨床癥狀尤為嚴重，具有更高的疾病活動度［10］。PSS 患者淋巴細胞浸潤灶及生發中心中存在大量的B 淋巴細胞，因此，B 淋巴細胞浸潤及不同亞群的分布可能反映患者疾病的嚴重程度。本研究發現，FS(+)患者CD19+IgD+B 細胞的比例明顯高于FS(-)患者，同時FS(+)患者具有更嚴重的系統損害及更高的疾病活動度。

2009 年歐洲風濕病聯盟(EULAR)制定了對干燥綜合征病情的ESSDAI，較為系統而全面地對活動指數的評估，具有較為肯定的有效性。ESSDAI 目前廣泛用于臨床疾病狀態的評估，主要評估臨床表現的嚴重程度及對治療的反應性，因PSS 為B 細胞主導的自身免疫性疾病，同時也可能反映患者體內免疫紊亂的狀態，特別是細胞免疫。本研究對患者CD19+IgD+B 細胞比例與患者ESSDAI 進行相關性分析發現，其與ESSDAI 表現出正相關關系，ESSDAI分數越高，患者CD19+IgD+B 細胞比例越高。羥氯喹聯合激素治療PSS 是被證明有效的治療手段［11］。經糖皮質激素及羥氯喹治療3 月后患者ESSDAI 分數明顯下降，同時CD19+IgD+B 細胞比例也明顯下降，與類風濕關節炎和健康對照組無明顯差異。因此，檢測CD19+IgD+B 細胞比例可以反映患者疾病活動程度，同時可作為療效判斷的敏感指標。

原發性PSS 患者B 細胞免疫存在紊亂，表現不同B 細胞亞群比例的失調，CD19+IgD+B 細胞作為原發性PSS 高表達的B 細胞亞群，對評價PSS 病情活動，指導治療，乃至評估預后中有著重要的意義。

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