Hp感染與胃癌患者陰性淋巴結中CK19和CK20表達的相關性研究

魏小果，高 翔，康國蘭，詹 麗

（甘肅省人民醫院，甘肅 蘭州 730000）

幽門螺桿菌（Hp）是胃癌啟動因子，促進胃癌發病及轉移的發生，為胃癌的預后影響因素，區域淋巴結（即陰性淋巴結）轉移直接影響患者長期生存[1-2]。目前對陰性淋巴結微小轉移灶已有研究，但尚無對Hp感染與陰性淋巴結微轉移的相關性報道。本研究采用前瞻性對照研究，分析術前Hp感染與胃癌患者陰性淋巴結CK19、CK20表達的相關性，進一步明確Hp感染與胃癌陰性淋巴結微轉移的關系。

1 資料與方法

1.1 基本資料

收集2011年10月—2012年12月經我院胃鏡及病理確診的胃癌患者64例，其中男性35例，女性29例；年齡34～76歲，平均年齡56.7歲；術前未經放、化療，術后經常規組織病理證實且排除遠處轉移。本研究獲得甘肅省人民醫院倫理委員會批準，同時標本采集得到了患者的知情同意。

1.2 研究方法

1.2.1 Hp 檢測 所有患者均于入院后次日行14C-尿素呼氣試驗（14C-UBT）檢測Hp，操作流程嚴格按說明書進行，以14C-UBT≥100dpm/mmolCO2為陽性判斷值。依照結果將患者分為Hp（+）組和Hp（-）組。

1.2.2 CK19、CK20 檢測 兩組患者術后共切除淋巴結846枚，中位數為12（6～16）枚，所有淋巴結均行常規病理檢查。將陰性淋巴結經常規制備后連續切片（厚度3μm），分別用免疫組化法檢測CK19和CK20，操作流程嚴格按照試劑操作說明進行。標本檢測在24小時內進行。

陽性判斷：定位于細胞胞漿內，如細胞胞漿經免疫組化染色后出現棕黃色顆粒為陽性著色，終止反應，顯微鏡下觀察結果。

1.3 結果判斷標準

胃癌淋巴結微轉移表現為單個散在和（或）數個聚集成小團狀的癌細胞位于淋巴竇內，以邊緣竇為主[3]。個別淋巴結巨噬細胞和漿細胞等內可見AE1交叉反應，結合細胞形態特點、部位及AE1染色特征可以明確區分。

1.4 統計學處理

采用SPSS17.0軟件包統計分析，本研究數據為計數資料，檢驗水準α=0.05，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 Hp（+）組與Hp（-）組胃癌患者分組情況

胃癌患者Hp感染率為54.7%，其中Hp（+）組胃癌患者35例，共檢出陰性淋巴結348枚；Hp（-）組胃癌患者29例，共檢出陰性淋巴結331枚。兩組比較經χ2檢驗，χ2=6.084，P<0.05，差異有統計學意義。

2.2 Hp（+）組與Hp（-）組胃癌患者陰性淋巴結中CK19、CK20的表達

Hp（+）組胃癌患者陰性淋巴結CK19陽性表達率為11.8%（41/348），Hp（-）組CK19的陽性表達率為6.3%（21/331），兩組比較，差異有統計學意義（χ2=6.004，P=0.014）。Hp（+）組胃癌患者陰性淋巴結CK20陽性表達率為9.2%（32/348），Hp（-）組CK20的陽性表達率為4.8%（16/331），兩組比較，差異有統計學意義（χ2=4.912，P=0.027）。具體見表1。

表1 Hp（+）組與Hp（-）組胃癌患者陰性淋巴結中CK19、CK20 的表達

3 討論

3.1 胃癌陰性淋巴結微轉移的發生

胃癌是最常見的惡性腫瘤之一，在甘肅河西走廊地區尤為高發[4]，進展期胃癌根治術術后5年存活率約為40%，直徑<2mm的陰性淋巴結癌轉移灶即微轉移是腫瘤根治術后復發和轉移的重要原因之一[1]，同時微轉移也是臨床的難點[5]。胃癌可通過黏膜下、肌間或漿膜下的淋巴管蔓延、浸潤，因而淋巴轉移發生早[6]。同時，由于淋巴靜脈通路的存在，腫瘤細胞可以很容易地由淋巴系統進入循環系統，反之亦然。所以胃癌患者行手術治療時，淋巴轉移率高達50%～70%。因而在常規病理檢查的基礎上，檢測陰性淋巴結的微轉移對于患者的預后判斷有重要意義。

3.2 CK19、CK20 表達與胃癌微轉移的檢測

CK19、CK20等所屬的細胞角蛋白家族是上皮細胞所特有的一種中間絲，特異性地表達于上皮組織和上皮來源的腫瘤，幾乎不表達于血液、淋巴組織和骨髓組織。因此，淋巴結中細胞角蛋白的表達提示存在癌細胞，即有微轉移的發生。應用CK19、CK20等同步檢測，有助于提高胃癌陰性淋巴結微轉移的檢出率，使胃癌在臨床上得以重新分期，對于判斷預后和指導治療均有一定意義。

3.3 Hp 感染影響胃癌陰性淋巴結微轉移的機制

Hp能引起長期炎癥刺激，導致胃黏膜萎縮—腸化—異型增生的系列演化，是胃癌的主要病因之一[1]，其與胃癌的不良預后相關[7]。本研究提示，CK19、CK20在Hp（+）和Hp（-）的胃癌患者陰性淋巴結中存在不同表達，其中Hp（+）胃癌患者CK表達增高，部分組織學分化較差、術后分期較高的患者CK表達更高，提示Hp感染可能促進腫瘤微轉移的發生，從而使微轉移的指標高表達。Hp促進微轉移的發生是通過促進胃癌細胞之間的分離、增強癌細胞與基質成分的黏附作用、加快細胞外基質的降解及癌細胞的移出等來實現的。分子機制的研究指出，Hp感染直接刺激胃癌細胞釋放巨噬細胞移動抑制因子（MIF），而MIF可能通過上調基質降解酶（MMP）、血管內皮生長因子（VEGF）的表達來促進腫瘤的浸潤和轉移[8-9]。

實際上，少量癌細胞進入淋巴結后，在淋巴結內的轉歸也不盡相同，包括：（1）增生形成大的轉移瘤；（2）被機體免疫系統清除；（3）暫時進入G0期，環境適宜時再增生形成大的轉移瘤[10]。因此，即使是免疫組化證實的微轉移，預后也并非一定不良。胃癌患者早期檢測Hp，術后檢測陰性淋巴結微轉移，對改善患者預后有一定意義。研究者也意識到，由于微轉移的影響因素眾多，同時限于樣本量，Hp與陰性淋巴結微轉移的相關性仍需要在后續工作中繼續研究、證實。

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