熱帶作物木蓮中生物堿含量的測定

柳泰宇　柳希

【摘 要】生物堿類化合物大多數具有生理活性，往往是許多中草藥及藥用植物的有效成分。本文以氯仿為溶劑，索氏法提取木蓮枝和葉中的生物堿。溴甲酚綠為顯色劑，在pH=5.4條件下，采用紫外分光光度法測定其含量。本方法操作簡單，結果準確、可靠，重現性好，研究結果為木蓮的開發利用提供了科學依據。

【關鍵詞】木蓮；生物堿；含量測定

一、前言

生物堿類化合物大多數具有生理活性，往往是許多中草藥及藥用植物的有效成分。生物堿作為有效成分之一，其含量的高低直接與藥材的質量和療效有關。制定科學合理的提取工藝，保證有效成分生物堿的提取效率，從而有效地控制中藥材質量，保證藥效是非常重要的。[1]

木蓮（Manglietia hainanensis Dandy）為木蘭科木蓮屬植物，在我們海南，木蓮被稱為龍楠樹、綠楠、綠蘭等，主要分布于海南定安、保亭、樂東、瓊中、陵水、三亞、東方等市縣，生于海拔300——1200m的溪邊、密林中，是海南特產植物[2，3]，屬國家三級植物保護種；文獻[4]曾報道過對海南木蓮的TLC鑒定研究。木蓮屬植物民間藥用較多，為進一步拓展本屬藥用植物種類，我們對海南木蓮枝和葉中的生物堿含量進行了測定。

從目前的研究來看，對木蓮中的生物堿含量測定未曾見有文獻報道。對于測定生物堿的含量來說，測定方法有紫外分光光度法，兩相滴定法[5]、非水滴定法[6]、HPLC-UV[7]、HPLC-ELSD[8]，GC[9]等。中藥材中生物堿提取方法常用的有冷浸取、回流提取、索氏提取和超聲波震蕩提取等。本實驗采用紫外分光光法，測定方法較為普遍，操作簡單，準確靈敏的，而生物堿的提取，一般采用索氏提取，因為用索氏提取效果比較好，而且溶液澄清，不需要進行抽濾。

首先進行的是氯仿通過索氏提取將木蓮中的生物堿進行提取，配制標準對照品，顯色劑和緩沖溶液，測定最大吸收波長，繪制標準曲線，然后對海南木蓮中的生物堿進行紫外分光光度測定。為了對該方法的準確度進行研究，還進行了加標回收率和穩定性實驗，通過這一部分的實驗，可以確定，使用紫外分光光度法測定海南木蓮中的生物堿，是準確可靠的。

二、實驗部分

（一）儀器、材料與試劑

（1）儀器

PHS-3C型酸度計（上海大普儀器有限公司）；T6紫外可見分光光度計（北京普析儀器廠）； UV757型紫外可見分光光度計（上海分析儀器廠）；FA1604電子天平（上海精科天平）；RE-52A型旋轉蒸發儀（上海亞榮生化儀器廠）；D2F-200 型真空干燥箱（上海浦東榮豐科學儀器有限公司）；微型植物粉碎機和索氏提取器自制。

（2）材料

海南木蓮枝和葉于2009年2月采集于海南省樂東縣尖峰嶺，自然晾干，粉碎備用。

（3）試劑

鹽酸小檗堿（中國藥品生物制品檢定所，純度99.99%），溴甲酚綠（上海試劑三廠），鄰苯二甲酸氫鉀（廣州化學試劑廠），檸檬酸（天津市大茂化學試劑廠），檸檬酸鈉（廣州化學試劑廠），氯仿（天津市富宇精細化工有限公司），濃氨水（廣州市番禺力強化工廠），氫氧化鈉（天津市百世化工有限公司）等，所用試劑均為國產分析純。所用水為蒸餾水。

（二）試驗方法

（1）緩沖溶液及顯色劑的配制

檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖溶液：準確稱量10.507g 檸檬酸，用蒸餾水溶解于500mL的容量瓶中并定容至刻度，得濃度為0.1mol/L的溶液。準確稱量14.705g檸檬酸鈉，用蒸餾水溶解于500mL的容量瓶中并定溶至刻度，得濃度為0.1mol/L的溶液，備用。分別取16 mL 0.1mol/L的檸檬酸溶液和34mL 0.1mol/L的檸檬酸鈉溶液放置于100mL的容量瓶中，用蒸餾水定容至100mL，得pH為5.4的緩沖溶液。

參照文獻[10]配制溴甲酚綠指示液：精密稱取溴甲酚綠0.125g，用0. 1 mol/L的 NaOH 25. 00 mL溶解后，加入鄰苯二甲酸氫鉀2.55 g，用少量蒸餾水溶解后，轉移至250 mL的容量瓶中，加蒸餾水定容至刻度線，搖勻備用。

（2）標準品溶液的配制

在電子天平上精密稱取鹽酸小檗堿10.0mg放入小燒杯中，用少量蒸餾水溶解后，轉移到50mL容量瓶中，用蒸餾水定容至刻度，得到濃度為200μg/mL的標準溶液。

（3）標準曲線的繪制

精密量取濃度為200μg/mL鹽酸小檗堿標準溶液0.1，0.2，0.3，0.5，0.7，0.9mL于分液漏斗中，分別標上序號1，2，3，4，5，6。各加水至1.0 mL，用吸量管加入檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液5.0mL，再依次精密加入溴甲酚綠指示液2.0 mL，氯仿10.0 mL，充分振搖1 min，放置分層，靜置1h，取氯仿層備用。

另精密量取10.0 mL氯仿，以同樣的方法操作制備空白對照液。在波長410 nm處測定氯仿液。以鹽酸小檗堿濃度為橫坐標，吸光值為縱坐標，繪制標準曲線。

（4）木蓮枝和葉生物堿的提取

稱取干燥至恒重的木蓮葉和枝粉末各10.0g，加濃氨水約3 mL浸濕，拌勻，加氯仿200mL，用索氏提取器提取5h。

將提取液用旋轉蒸發儀減壓濃縮，回收部分氯仿后，轉移到100mL容量瓶中，用氯仿定容至刻度，得海南木蓮葉和枝的生物堿氯仿提取液。

（5）樣品中生物堿含量的測定

分別準確量取1.0 mL和0.4mL的枝和葉的提取液置于分液漏斗中，按2.2.3項下的方法操作測其吸光度。根據下述公式進行計算，得木蓮葉和枝中的生物堿含量。

（1—1）

（6）精密度實驗

準確量取0.4mL葉和1.0mL枝于分液漏斗中，按照2.2.3項下的配制方法，平行測定5次，考察測定方法的精密度。

（7）穩定性實驗

精密量取一定體積的標準品溶液，按2.2.3項下的方法制備溶液，在1-90min時間內測定其吸光度變化值，考察標準溶液和樣品溶液的穩定性。

（8）加標回收率試驗

精密量取已知生物堿含量的海南木蓮葉5份，每份0.3 mL，分別準確加入200.0 μg/mL鹽酸小檗堿標準溶液0.3 mL，按2.2.3項下的方法制備樣品供試液和空白對照液，在波長410 nm處測定。

同法，精密量取海南木蓮枝0.5 mL，200.0μg/mL鹽酸小檗堿標準溶液0.2 mL進行測定。根據下述公式進行計算，得木蓮葉和枝的加標回收率。

（1—2）

三、結果與討論

（一）最大吸收波長的選擇

以氯仿為對照，將標準對照品溶液和空白對照液在350-700nm波長范圍內進行掃描。結果顯示在410nm有最大吸收值，而空白對照液在410 nm幾乎沒有吸收，故本實驗選擇410 nm為測定波長。波長掃描曲線見圖1。

（二）工作曲線與回歸方程

按2.2.5項下的方法測定，測定數據見表1，繪制標準曲線見圖2。

表1 標準曲線測定數據

實驗結果表明，標準品鹽酸小檗堿溶液在2.0-18.0μg/mL范圍內呈現良好的線性關系。得回歸方程為：A = 0.03841c - 0.01015； 相關系數r = 0.999 9 （n = 6）。

（三）木蓮中生物堿含量的測定結果

按照2.2.5項下的測定方法，得木蓮不同部位中的生物堿含量，測定結果見表2和表3。

表2 海南木蓮葉中生物堿平均質量分數

表3 木蓮枝中生物堿平均質量分數

從測定結果可知，木蓮葉中的生物堿平均質量分數為0.450%，RSD=0.838%（n=5），枝中的生物堿平均質量分數為0.0896%，RSD=0.41%（n=5）。結果表明，葉中生物堿的含量更高。

（四）木蓮中生物堿含量的測定結果

（1）穩定性實驗

按2.2.5項下方法，測定1-90min之間的吸光度，測定結果見圖3。結果表明，在本實驗的測定時間內，穩定性良好。

表4 穩定性曲線測定數據

（2）加標回收率和精密度實驗

從測定結果可知，木蓮葉的平均回收率為96.4 %，RSD = 1.4 %（n=5）. 木蓮枝的平均回收率為99.6 %，RSD = 0.86 %（n=5）.精密度實驗結果見表5，表6.

表5 葉的平均回收率

表6 枝的平均回收率

（五）討論

木蓮中的生物堿的提取運用索氏提取，因為用索氏提取效果比較好，而且溶液澄清，不需要進行抽濾。以鹽酸小檗堿為標準對照品，溴甲酚綠為顯色劑，在pH=5. 4的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液條件下，與溴甲酚綠顯色，得到海南木蓮不同部位中的生物堿的相對含量。采用紫外分光光法，對木蓮中的生物堿進行測定。實驗采用紫外分光光度法，是因為該法靈敏度高，準確性好，操作簡便，克服了重量法和滴定法均需多次萃取，易造成誤差而導致重現性差的不足。同時，該法適于較少量樣品的檢測。

為了對該方法的準確度進行研究，還進行了加標回收率和穩定性實驗，通過這一部分的實驗，可以確定，使用紫外分光光度法測定海南木蓮中的生物堿，是準確可靠的。

四、結論

本實驗利用紫外-分光光度法，測定木蓮中的生物堿含量的方法，建立一種操作簡單、準確靈敏的生物堿定量分析方法。通過測定，發現木蓮葉中的生物堿含量比枝中的要高，本研究結果為木蓮的開發利用提供了科學依據。

參考文獻：

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[2] 中國科學院中國植物志編輯委員會.中國植物志（第30卷第一分冊）[M].北京：科學出版社，1996.

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