茯苓皮總三萜物質的提取工藝研究

[摘要] 目的 優選茯苓皮總三萜的最佳提取工藝。 方法 采用紫外分光光度法測定總三萜物質的含量，以茯苓皮總三萜的提取率為指標，正交優選最佳提取工藝。 結果 茯苓皮總三萜最佳提取工藝為6倍量、90%乙醇提取2次、每次1 h。 結論 該工藝操作簡單、穩定、可行，具有良好的應用前景。

[關鍵詞] 茯苓皮；三萜；正交試驗

[中圖分類號] R284.1 [文獻標識碼] B [文章編號] 2095-0616（2013）14-50-02

Study on the extracting technology of total triterpenoids from poria cocos peel

HAN Yuanyuan1 ZHAO Xujie1 YAN Xuesheng2

1.Shandong Univercity of Traditional Chinese Medicine，Jinan 250355，China；2.Shandong Academy of Traditional Chinese Medicine，Jinan 250014，China

[Abstract] Objective To optimize the extraction technology for total triterpenoids from Poria cocos peel. Methods To determine the content of total triterpenoids by UV. The optimum extraction condition was investigated by orthogonal design and the extraction quantity was regarded as the investigated index. Results The optimum extracting condition was adding ten times amount of 90% alcohol and refluxing twice，1 h once. Conclution The optimum technology is stable and feasible and had good application prospect.

[Key words] Poria cocos peel；Triterpenoids；Orthogonal test

茯苓皮為多孔菌科真菌茯苓[poria cocos（schw.）wolf]菌核的干燥外皮，又稱茯靈、茯菟、云苓、松腴、不死面、松薯、松木薯、松苓[1]，性甘淡，味平，歸肺、脾、腎經，具有利水消腫的功效[2]，用于水腫尿少、痰飲眩悸、脾虛食少等證的治療[3-5]，主要含有四環三萜酸（統稱茯苓素）和多糖等成分[6]，茯苓三萜具有抗腫瘤、抗炎、止吐、利尿等作用[7]。本實驗以乙醇為提取溶劑，香草醛-冰醋酸-高氯酸[8]比色方法測定含量，利用單因素考察和正交試驗結合優選出穩定、可行的茯苓皮總三萜提取工藝。

1 儀器與材料

UV-2550紫外分光光度計（日本島津公司）；電熱恒溫水浴鍋（江蘇金壇晶玻實驗儀器廠）；減壓旋轉蒸發儀（鄭州長城科工貿有限公司，上海亞榮生化儀器廠）；取樣槍（德國艾本德公司，1 mL，200μL）。茯苓皮（精華制藥亳州康普有限公司，20121023）；熊果酸（中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，UA，110742-200518。）；所用試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 茯苓皮中總三萜物質的提取

精密稱取10 g藥材，加入100 mL乙醇，水浴提取3次，每次2 h，抽濾，合并3次提取液，減壓濃縮至干。用乙醇50 mL少量多次沖洗瓶壁至無色，樣品溶液置于具塞錐形瓶中，備用。

2.2 總三萜物質的含量測定

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取干燥至恒重的熊果酸對照品適量，用無水乙醇溶解制成100μg/mL的儲備液，備用。

2.2.2 供試品溶液的制備 精密量取樣品溶液0.2 mL于10 mL的容量瓶中，無水乙醇定容至刻度，備用。

2.2.3 標準曲線的制備 分別精密量取0.2、0.4、1.2、1.6、2.0、2.4 mL的UA標準溶液于15 mL的試管中，空白吸取1 mL的無水乙醇，水浴加熱揮干溶劑，加入新配制的0.4 mL的5 %香草醛-冰醋酸溶液及2 mL的高氯酸，60 ℃恒溫水浴加熱10 min，取出立刻用冷水冷卻至室溫，再加入10 mL的冰醋酸，搖勻，于551 nm處測定吸光度（A）值。以A值為縱坐標，濃度（mg/L，UA的檢測濃度C）為橫坐標得線性回歸方程Y=0.04254X-0.04779，r=0.9989，表明三萜物質在1.613～19.356 mg/L線性范圍內關系良好。

2.2.4 總三萜物質的含量測定及計算 精密吸取供試品溶液按照上述方法，于551 nm處測定吸光度（A）值，代入標準曲線計算含量。樣品溶液的濃度C樣=C×12.4×50×10-3（mg/mL）；茯苓皮中總三萜含量=C樣×50/茯苓皮質量（10 g）×100%。

2.3 提取工藝的研究

2.3.1 單因素試驗

2.3.1.1 乙醇濃度的考察 稱取茯苓皮10 g，3份，分別加入10倍量的50%、70%、90%的乙醇，水浴回流提取2次，每次2 h。結果90%乙醇作為提取溶劑時提取率最高，乙醇濃度對茯苓皮中三萜物質提取率的影響見表1。

2.3.1.2 料液比的考察 稱取茯苓皮10 g，3份，分別加入90%的乙醇為5、10、15倍量，水浴回流提取2次，每次2 h。結果10倍量乙醇提取效果最好，料液比對茯苓皮中三萜物質提取率的影響見表2。

2.3.1.3 提取時間的考察 稱取茯苓皮10 g，3份，均加入10倍量90%的乙醇，水浴回流提取2次，分別提取1、2、3 h。結果3 h提取的效果最好，但是與2 h的提取效果相差不大，考慮到效率的影響，選擇提取2 h，時間對茯苓皮中三萜物質提取率的影響見表3。

2.3.2 正交試驗優化結果 在單因素考察的基礎上，以乙醇濃度（A）、料液比（B）、提取時間（C）和提取次數（D）為考察因素，以茯苓皮中總三萜物質的提取率為指標，優選茯苓皮總三萜物質的提取工藝。因素水平見表4，正交試驗結果見表5，方差分析結果見表6。

由R值可知，以總三萜提取率為指標，各因素影響大小為A>D>C>B。通過方差分析可知，四個因素中A因素具有顯著影響，D因素有一定影響，C和B因素影響不明顯。通過直觀分析可以確定最佳工藝A3B3C3D2，結合方差分析結果確定正交優選的最佳工藝為A3B1C1D2，即茯苓皮三萜物質最佳提取工藝為乙醇濃度為90%、料液比1︰6、提取時間1 h、提取次數2次。

2.4 工藝驗證試驗

按照確定的工藝條件提取，平行提取3份，三萜物質提取率分別為3.66%、3.64%、3.79%，平均提取率為3.70%，RSD為2.20%，表明該工藝穩定可行。

3 討論

茯苓皮三萜類化合物具有多種生理作用，有較高的開發價值。目前有關茯苓三萜類化合物提取主要有甲醇超聲[9]、甲醇回流[7]、超臨界CO2萃取（95%乙醇為夾帶劑）[10]等方法，這些提取方法不宜規模化生產，故選用乙醇作為提取溶劑，更安全、價廉。

實驗確定的提取工藝參數穩定、可行，茯苓皮三萜類化合物提取率高，適于大生產，為進一步開發應用茯苓皮三萜類化合物奠定了基礎。

[參考文獻]

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（收稿日期：2013-05-20）