復方局部緩釋藥物治療牙周炎的實驗研究

[摘要]目的：探討復方局部藥物緩釋劑對牙周病治療效果及其臨床耐藥性研究。方法：建立實驗大鼠人工感染牙周炎模型后，將大鼠分A組（實驗組），局部使用復方局部藥物緩釋藥物；B組（對照組）。選擇甲基藍和米諾環素兩種抗菌藥物，通過檢測細菌總數和觀察組織學變化，探討其抑制牙周袋內相關致病菌增殖的方法，了解其治療牙周病的效果。結果：實驗組檢測結果發現總細菌數持續下降，與對照組相比牙周袋內相關致病菌總數明顯減少，在統計學上有顯著差異（P<0.01）；組織學觀察結果顯示，該復方制劑可產生明顯殺菌作用及有效消除炎癥現象。結論：應用甲基藍和米諾環素局部緩釋藥物能有效抑制牙周炎的發生及發展過程。

[關鍵詞]牙周炎；牙周袋；緩釋藥物；甲基藍；米諾環素

[中圖分類號]R783 [文獻標識碼]A [文章編號]1008-6455（2013）10-1058-03

牙周炎是一種發生在牙周支持組織的炎性感染性疾病，菌斑細菌是其啟動因子，齦下的革蘭陰性厭氧菌和牙周病關系非常密切。在牙周病的治療中，抗菌藥物的應用為一種常見的治療手段，由于牙周炎是一種多細菌感染性疾病，而各類抗生素的抗菌譜并不能針對所有的牙周致病菌，因此現在更推崇藥物的聯合應用，以擴大藥物對細菌的作用范圍。由于菌斑生物膜的特殊生態環境，對牙周炎的治療必須首先通過機械方法清除齦下牙石菌斑，傳統方法是機械性齦上下潔刮治術，破壞菌斑生物膜，為藥物治療創造條件，藥物緩釋系統是指活性藥物能緩慢、有控制地從劑型中釋放出來，直接作用于病變組織、使病變局部能較長時間維持有效藥物濃度的特定劑型，牙周病緩釋抗菌藥物是當前牙周臨床上應用抗菌藥物最理想的劑型，是合理的給藥途徑，適宜只在低氧濃度下生長的兼性厭氧菌或專性厭氧菌生存， 它具有用藥劑量小，牙周局部濃度高，維持時間長，療效高，且不易引起耐藥菌株和宿主副效應的特點[2-4]。

1 材料和方法

1.1實驗動物：SD大鼠，清潔級，40只（安徽醫科大學實驗動物中心提供，合格證號：皖醫實動準字第01號），飼養1周。選擇體重相對平均的SD大鼠作為實驗鼠，實驗過程中每周定時過磅，各組大鼠的平均體重相對穩定增加，原則上各組之間體重差距變化不大。

1.2根據實驗的要求，選擇40只飼養1周SD大鼠作為實驗鼠，采用直徑0.2mm的口腔科專用不銹鋼線結扎大鼠的下頜前牙（如圖1）。從牙周炎患者的牙周袋內提取含有厭氧混合菌齦溝液體，作適當培養后將其注入實驗大鼠的下頷前牙結扎區內，1次/天，持續1周后檢查。實驗大鼠的下頷前牙結扎區內產生人工感染牙周炎（如圖2）停止注入，未出現人工感染牙周炎模型再持續注入1周檢查，檢測牙周袋深度及牙周附著等指標來評價其診療后效果，直到人工感染牙周炎模型成功建成并予以確認。

1.3待實驗大鼠人工感染牙周炎模型建成后，將40只實驗大鼠隨機分組。A組（實驗組）：使用復方局部藥物緩釋劑涂布實驗大鼠牙周炎模型區連續3天，每日涂緩釋抗菌藥物一次，使用藥物后禁食、禁水1h左右； B組（對照組）：實驗大鼠形成人工感染牙周炎模型、感染持續，不做進一步處置。

1.4細菌總數檢測：分別于實驗后第0、1、7天采樣，在實驗組及對照組實驗動物下頷前牙結扎區人工感染牙周炎模型區用滅菌紙針進行微生物采樣，進行牙周病原菌培養3天后做細菌總菌數檢測。

1.5組織學觀察：取實驗組及對照組實驗動物，分別于第0、1、7天腹腔內注射麻醉后處死實驗大鼠作組織學觀察，取大鼠的下頷前牙結扎區人工感染牙周炎模型區唇舌向組織切塊，所得標本用10%福爾馬林常規固定24h，然后進行系列脫鈣、脫水、石蠟固定包埋后，連續切片厚4UM，常規HE染色、觀察；同法取未感染大鼠標本。

2 結果

2.1總菌數檢查結果：經過1周的觀察和定期取樣檢測發現：實驗組A組檢測結果發現總細菌數持續下降，結果顯示有統計學意義（P<0.01），對照組B組檢測結果發現總細菌數無顯著性差異（見表1）。

2.2 總菌數觀察結果：為了解本實驗用牙體局部緩釋藥物治療人工感染牙周炎患者的抗菌效果，筆者采用根面平整術，牙周潔治術后再輔以相關藥物局部應用，通過探診檢查出血部位，出血量，發現牙周袋內相關致病菌數明顯減少（見表1）。

2.3 組織學觀察結果：筆者于實驗后第0、3、7周后分別處理實驗組和對照組動物各1只，常規固定、脫水、石蠟包埋切片觀察，發現相關藥物能有效抑制牙周袋中細菌的生長和增殖，可以更有效抑制牙周袋中病原菌的生長，達到牙周病治療的目的[5]（如圖1～6）。

3 討論

牙周病是細菌感染性疾病，其進一步發展易引起牙槽骨吸收和牙周組織破壞進而發展為牙周炎。因此，控制細菌感染是治療牙周病的關鍵。研究發現，靠近齦緣和齦溝內有一薄層（60μm以下）以革蘭陽性球菌占優勢的菌斑。細菌培養研究證明，其優勢菌是以血鏈球菌為主的鏈球菌。此外還有少量的革蘭陰性菌，如Velonella、Campnocytophaga等[6]。因此清除牙菌斑和防止或減緩菌斑的再聚集是治療牙周病、防止其復發的主要途徑[7]，并依靠患者的自我菌斑控制來保持療效減少復發。有研究報道，引發牙周病的細菌總是相關存在[8]，密切相關組成的細菌可能和其在菌斑形成過程中共聚的選擇性有關。為增進療效，近年有向復方藥物緩釋劑型發展的趨勢[9]。復方緩釋劑型可克服以往牙周局部藥物劑型的性能單一、降解過快、持續時間短、需頻繁復診的弊端，并且局部用藥劑量小、有效抑菌濃度高[10]。

本研究將甲基藍聯合米諾環素的復方局部緩釋藥劑放置在齦下牙周患處，直接作用于病變區，可被唾液、血液及齦溝液緩慢的溶解，使藥物呈緩慢釋放，在牙周袋內能維持較長時間的有效濃度，充分發揮其抑菌作用。并以甲基藍（Methylene Blue） 為主要成分，利用其還原作用減緩米諾環素（Minocycline） 被氧化破壞的作用，并且甲基藍本身亦為一有效的殺菌劑對革蘭氏陽性菌具有直接抑和殺菌效果，加上米諾環素（Minocycline）主要是對革蘭氏陰性菌有直接抑菌效果，利用兩種抗菌有效成分的協同作用，可以更有效抑制牙周袋中病原菌的生長，達到牙周病治療的目的[4]。本研究證明，該復方局部藥物緩釋劑對人工感染的牙周炎有明顯的抑菌及有效消除炎癥的作用，但患者仍應定期檢查，且牙周炎的治療首先應包括徹底消除病原刺激物，如潔牙、根面平整等。

總之，基于以上理論及動物實驗研究證明，本研究找出一種新穎且有效的復方局部緩釋配方治療藥物，利用甲基藍的特殊作用起到雙重抑菌的效果并產生對米諾環素的保護作用而延長藥效，此配方可供口腔醫護人員對牙周病有效而準確的治療，降低牙周病患病率，值得臨床借鑒和參考[11]。隨著高分子材料學和藥劑學的發展，新型可生物降解的載體材料也逐漸應用于牙周緩控釋制劑的研究和生產中，從而為牙周病的臨床治療提供安全、有效、順應的新型藥物制劑。

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[收稿日期]2013-02-20 [修回日期]2013-04-20

編輯/何志斌