中醫院校本科分子生物學實驗準備之我見

摘 要：隨著分子生物學技術的日益發展，它與醫學的聯系日益緊密，是醫學院校的重要基礎實驗課程。在中醫院校開設本科生分子生物學實驗也迫在眉睫。本文是根據本科生新開設分子生物學實驗的準備過程談談體會，旨在與廣打同仁共同探討，提高實驗教學效果。

關鍵詞：中醫 分子生物學 實驗準備

中圖分類號：G642 文獻標識碼：A 文章編號：1673-9795（2013）09（a）-0126-01

隨著分子生物學的迅猛發展，該技術已經滲透到基礎醫學和臨床醫學的各個領域，與醫學聯系日益緊密。中醫院校的實驗教學課程大多是實驗性很強的專業課，而醫學分子生物學實驗大多是蛋白質和核酸等的定量實驗，要求更嚴格，操作更復雜，實驗難度更大，要保證實驗課有序高質量完成，實驗準備工作起著關鍵性的作用，環環相扣，不能疏忽大意。

為在中醫院校普及和推廣分子生物學技術，培養學生基本實驗技能和理論聯系實際的能力，我校基礎醫學院實驗教學中心于2012年全面開展分子生物學教學實驗的準備工作，現準備工作已經完成。經歷我校分子生物學教學實驗室從無到有的整體建設，從耗材購置到預實驗進行，結合具體工作，談一談自己的體會。

1 提高自身業務能力

個人認為扎實的業務素質是實驗準備工作必不可少的前提，我校本科分子生物學實驗包括質粒的提取、基因組DNA的提取、PCR、轉化等五個小實驗，這些小實驗之間具有連續性強、時間長等特點，要求實驗準備工作人員必須具有扎實全面的理論基礎和熟練的實驗技能，掌握實驗原理、方法步驟和試劑配制，熟悉掌握設備儀器的操作和注意事項，出現問題能及時解決，對不同實驗結果有合理的解釋。如電泳，膠的濃度很大程度上決定了圖片漂亮與否，任何大小的DNA片段都有一個合適的濃度的膠，做PAGE時膠的濃度更為明顯；這些是實驗準備的重點，那么怎么尋找這些實驗中的重點呢？那就要在預實驗中仔細揣摩實驗原理、步驟；再如轉化會有多次失敗，許多人認為是感受態做的不好或者是抗生素加過量，可是有一次的感受態是“粗放型”做的，最后效果卻很好，這有可能是載體自我環化沒連上，或者是熱激時間過長；對于抗生素用量多的問題，則把平板在恒溫箱里多放置一段時間仍仍然什么都沒有（這時抗生素已經失效），這就不是抗生素的問題了，這些只有實驗之后才能體會；有時候轉化子太多，就不妨把平板室溫下放置數小時，挑大菌落（質粒拷貝數多）去驗證。最后，作為實驗技術人員，要關注國內外實驗技術新動態，改進實驗方法，不斷提高自身業務能力。

2 積極做好預實驗

所謂預實驗是指在進行實驗教學或者是科學研究時，經常需要在正式實驗之前先做一次實驗，簡稱預實驗[1]。它不僅僅是一個簡單的準備過程，而且實驗準備人員能通過這一過程摸索實驗條件，確保實驗順利進行，同時許多新的實驗方法和技巧都可以由預實驗探索而來[2]。

每次實驗都會因時間、室溫、試劑批號及濃度和儀器的改變而出現不同的實驗結果，所以每次實驗前都要做好預實驗。做好預實驗首先需要注意環境的干凈整潔，該滅菌的儀器和器皿是否準備充足，然后認真完成所需要的各種試劑的保存條件、稀釋時的配比等。

其次是儀器設備的準備，實驗前要仔細調試設備，這樣才能確保實驗的正常進行。比如我們實驗室新買了一臺離心機，空機轉動很好，可是在預實驗時發現放到里面的離心管頂部與機器有摩擦，及時與廠家聯系進行維修解決了問題。其實預實驗目的就是確定實驗條件，尋找存在的問題及注意事項，確保實驗課的正常進行。

3 加強各方面的協調工作是實驗準備的保證

實驗準備工作特點是接觸面廣，與學校教務處、設備科、學科教師、學生的關系密切，處理好以上幾個方面的關系是搞好實驗工作的重要保證。（1）設備科：分子生物學實驗是一門新開實驗，作為采購部門的設備科第一次采購某些耗材就有可能會發生理解上的錯誤，這就需要和設備科老師有良好的溝通，比如填寫的購置計劃只寫著封口膜（全名叫無菌培養容器封口膜），在領取時設備科老師就先讓供貨商拿來一包樣品（Para film），發現不對我們及時調貨最終確保了實驗的順利進行；（2）學科教師：實驗教學是教師和實驗人員共同完成的教學任務，二者相互依賴，缺一不可，在實驗準備中要常征求學科教師意見，互相尊重，密切配合；（3）學生：每次實驗課前都要給本實驗室的負責人交代清楚實驗過程中的注意事項，有些必要的要打印出來貼在醒目處請學生注意。

4 加強日常管理

良好的實驗室管理是保證實驗順利進行的基礎。在實驗過程中要做到以下幾點。

4.1 實驗儀器的管理

分子生物學操作中會涉及一系列儀器，管理不當或者使用不當導致實驗失敗、減少儀器使用壽命或損壞儀器，因此在進行操作前細致地了解各種儀器的使用方法及注意事項，是使后繼實驗事半功倍的一個必要準備。比如超低溫冰箱和可調微量移液器，在超低溫冰箱內儲存的物品包裝盒材質應為不銹鋼、鋁質或耐低溫的硬質塑料。禁止使用紙盒、橡膠器皿、玻璃器皿以及軟質塑料袋；盡量減少開門的次數和開門時間，以保證箱內溫度的穩定；存取樣品時動作應迅速，不能長時間打開冰箱。離開時務必確認冰箱已經關嚴。可調微量移液器在使用過程中動作要緩慢平穩，不使用時要調至最大值的刻度，使彈簧處于松弛狀態以保護彈簧。實驗結束后督促學生填寫儀器使用情況表，如有故障要寫明原因，以便及時聯系維修人員進行檢修。

4.2 實驗材料的管理

實驗室的安全最重要，分子生物學實驗經常與毒性強，甚至是致癌的試劑接觸，像氯仿、異戊醇、甲醛、乙醚等許多溶劑，都應在通風櫥中使用，并且注意保護皮膚和呼吸道。另外一些致癌物或誘變劑，像溴化乙錠等，在操作中要注意防護，并注意使用后的處理。特別是一些試劑盒，一定要掌握相關知識后方可使用。實驗室工作人員要列出每次實驗的材料清單，每次實驗課前組長按照清單一一清點，對于有毒及需要特殊處理的試劑要對學生交代清楚，同時要明確下課后按時把所有實驗材料整理歸位，老師檢查合格后方可離開。

4.3 實驗室衛生管理

從第一次上課就要強調實驗室環境衛生的重要性，促使學生養成良好的衛生習慣。每次實驗結束后值日生認真打掃衛生，并將實驗室儀器、物品擺放整齊，為下一次實驗創造良好的氛圍。

分子生物學的準備工作繁瑣而復雜，即使有幾年的工作經驗也難免會有疏漏，這就要求我們平時的經驗非常重要。注意總結實驗中注意事項，每次的物品準備都要有詳細的記錄，每學期實驗項目一旦確定就不會改變，準備教師可以提前熟悉實驗程序。嫻熟的操作技能是保證實驗準備得以順利進行的重要條件，只有做到正確使用、熟練和規范操作，才能得到正確結果[3]。長此以往，可以改正不足，逐漸完善實驗準備工作。

參考文獻

[1]孫蕊，于洪帥，丁寧，等.預實驗在培養大學生綜合素質中的作用[J].現代醫藥衛生，2008（22）：151-152.

[2]吳玉秀，董小青，王玉祥，等.做好微生物學實驗準備工作的幾點體會[J].山西醫科大學學報：基礎醫學教育版，2006（6）：70-71.

[3]沈澄，葉知秋.重視實驗準備工作保證實驗教學質量[J].現代醫藥衛生，2006（23）：150.