FHIT和P16蛋白在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及意義

[摘要] 目的 研究FHIT和P16基因蛋白在非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）中的表達(dá)及其意義。 方法 使用組織芯片和免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)FHIT和P16基因蛋白在60例非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)情況。 結(jié)果 非小細(xì)胞肺癌中FHIT和P16蛋白表達(dá)陽(yáng)性率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。FHIT的表達(dá)陽(yáng)性率在肺鱗癌中為37.93%（11/29），在肺腺癌中為70.96%（22/31）（P < 0.05）；P16的表達(dá)陽(yáng)性率在肺鱗癌中為31.03%（9/29），在肺腺癌中為70.96%（22/31）（P < 0.05）。FHIT蛋白表達(dá)與肺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P < 0.05）。 結(jié)論 尚不能認(rèn)為非小細(xì)胞肺癌中FHIT和P16蛋白表達(dá)相互關(guān)聯(lián)。FHIT和P16在肺鱗癌發(fā)生中起了重大作用，F(xiàn)HIT可作為預(yù)測(cè)非小細(xì)胞肺癌有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的指標(biāo)。

[關(guān)鍵詞] 非小細(xì)胞肺癌；FHIT；P16；免疫組織化學(xué)；組織芯片

[中圖分類(lèi)號(hào)] R734.2 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 1673-9701（2013）36-0147-02

Expression and significance of FHIT and P16 proteins in non-small cell lung cancer

ZHANG Yanzi1 ZENG Xiangyi1 ZOU Xihong1 LI Qiulian1 PENG Qian1 WANG Xiaoping1 DU Richang2

1.The Second Respiratory Department of the First People's Hospital of Shaoguan City in Guangdong Province， Shaoguan 512000， China； 2.The Pathology Department of the First People's Hospital of Shaoguan City in Guangdong Province，Shaoguan 512000， China

[Abstract] Objective To discuss the expression and significance of FHIT and P16 in non-small cell lung cancer. Methods The expressions of FHIT and P16 proteins were studied by tissue chip technique and immunohistochemical SP methods in 60 cases of non-small cell lung cancer tissues. Results The positive expression rate of FHIT and P16 protein in NSCLC was no statistically significant difference（P > 0.05）. The positive expression rate of FHIT protein was 37.93%（11/29） in squamous carcinoma tissues while 70.96%（22/31）（P < 0.05）. This study also showed that the positive expression rate of p16 protein was 31.03%（9/29） in squamous carcinoma tissues of lung and 70.96%（22/31） in lung adenocarcinoma tissues（P < 0.05） . The expression of FHIT in NSCLC was closely related to lymph nodes metastasis（P < 0.05）. Conclusion It can not be considered that the expression of P16 and FHIT protein in NSCLC were correlated with each other. FHIT and P16 play important role in the the development of squamous carcinoma of lung. FHIT may be considered as an indicator to predict the presence of lymph node metastasis in non-small cell lung cancer.

[Key words] Non-small cell lung cancer； FHIT； P16； Immunohistochemistry； Tissue chip

惡性腫瘤是常見(jiàn)的一類(lèi)疾病，人們談“癌”色變。近年來(lái)，在腫瘤分子生物學(xué)研究領(lǐng)域中，許多人在研究腫瘤基因的異常表達(dá)與腫瘤的關(guān)系。本實(shí)驗(yàn)在2009年通過(guò)組織芯片和免疫組化觀察FHIT和P16基因蛋白在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)情況，進(jìn)而探討FHIT和P16基因與非小細(xì)胞肺癌發(fā)病關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

標(biāo)本為存檔石蠟標(biāo)本60例（為胸外科手術(shù)后經(jīng)病理科確診為非小細(xì)胞肺癌），其中鱗癌29例，腺癌31例；33例為無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，27例為有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者。實(shí)驗(yàn)試劑：SP試劑盒、FHIT兔抗人多克隆抗體（工作液）、P16鼠抗人單克隆抗體（工作液）均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.2 制片

先制成組織芯片石蠟塊后，然后切片，采用免疫組化SP法，詳細(xì)步驟嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。用已知陽(yáng)性的腎組織切片作為陽(yáng)性對(duì)照，用PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.3 免疫組織化學(xué)

FHIT和P16蛋白的表達(dá)免疫組化以出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性，F(xiàn)HIT和P16蛋白陽(yáng)性主要定位在胞漿，少數(shù)定位在細(xì)胞核。0～10%腫瘤細(xì)胞內(nèi)可見(jiàn)棕黃色顆粒為陰性；>10%腫瘤細(xì)胞見(jiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用軟件SPSS13.0進(jìn)行χ2檢驗(yàn)或四格表確切概率法，P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 FHIT和P16蛋白在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)

見(jiàn)表1。

表1 FHIT和P16蛋白在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)

注：χ2=0.1667，P > 0.05

2.2 非小細(xì)胞肺癌有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中FHIT和P16蛋白表達(dá)

見(jiàn)表2。

2.3 FHIT和P16蛋白在肺鱗癌與腺癌中的陽(yáng)性表達(dá)

見(jiàn)表3。

2.4 FHIT和P16蛋白在肺鱗癌中的表達(dá)

見(jiàn)表4。

表4 FHIT和P16蛋白在肺鱗癌中的表達(dá)

注：χ2=0.3333，P > 0.05

3 討論

肺癌的發(fā)病率和病死率呈逐年增加趨勢(shì)。基因改變?cè)趷盒阅[瘤的發(fā)生發(fā)展中起決定性的作用，基因調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)和分裂。兩類(lèi)基因即致癌基因和抑癌基因均參與了腫瘤的發(fā)生。脆性組氨酸三聯(lián)體基因（fragile histidine triad，F(xiàn)HIT）被認(rèn)為是抑癌基因，定位于染色體3p14.2上，它是將脆性位點(diǎn)與腫瘤相聯(lián)系起來(lái)[1]。3p14.2區(qū)域有500 kb，可以包含許多其他基因。p16基因又稱為多種腫瘤抑制物基因，被認(rèn)為是重要的抑癌基因，p16基因編碼的蛋白產(chǎn)物具有生長(zhǎng)抑制作用。p16基因的滅活與腫瘤發(fā)生密切相關(guān)。文獻(xiàn)[2]認(rèn)為p16基因的表達(dá)缺失是非小細(xì)胞肺癌中的常見(jiàn)事件。王國(guó)付等[3]認(rèn)為FHIT蛋白和P16蛋白表達(dá)缺失與非小細(xì)胞肺癌的發(fā)生有關(guān)。Chen P等[4]實(shí)驗(yàn)示：p16及FHIT基因轉(zhuǎn)錄本缺失檢出率在肺癌患者中顯著高于良性肺部疾病的患者。表1示本實(shí)驗(yàn)60例非小細(xì)胞肺癌標(biāo)本中20例肺癌FHIT、P16同時(shí)表達(dá)陽(yáng)性，13例肺癌FHIT陽(yáng)性、P16陰性，11例肺癌FHIT陰性、P16陽(yáng)性，而16例肺癌FHIT、P16同時(shí)表達(dá)缺失，表明肺癌的致癌因素不僅僅是FHIT、P16表達(dá)缺失，本實(shí)驗(yàn)所選標(biāo)本至少有三種因素參與了肺癌的發(fā)生。說(shuō)明多種基因功能異常和多種因素作用形成肺癌。單純恢復(fù)某一個(gè)抑癌基因的功能可能不能完全抑制腫瘤的生長(zhǎng)。文獻(xiàn)[5]認(rèn)為非小細(xì)胞肺癌中FHIT與P16蛋白表達(dá)呈正相關(guān)。但從表1可以看出非小細(xì)胞肺癌中FHIT和P16蛋白表達(dá)陽(yáng)性率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05），尚不能認(rèn)為非小細(xì)胞肺癌中FHIT和P16蛋白表達(dá)相互關(guān)聯(lián)。

FHIT蛋白陽(yáng)性表達(dá)率在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移肺癌組為37.03%（10/27），無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組為69.69%（23/33）（P < 0.05）。P16的表達(dá)陽(yáng)性率在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組為40.74%（11/27），無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組為60.60%（20/33）（P>0.05）。文獻(xiàn)[6]認(rèn)為P16缺失與肺癌有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。表明FHIT蛋白表達(dá)與肺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，可作為預(yù)測(cè)腫瘤有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的指標(biāo)，而P16則不然。本實(shí)驗(yàn)FHIT的表達(dá)陽(yáng)性率在肺鱗癌中為37.93%（11/29），在肺腺癌中為70.96%（22/31）（P < 0.05）。P16的表達(dá)陽(yáng)性率在肺鱗癌中為31.03%（9/29），在肺腺癌中為70.96%（22/31）（P < 0.05）。王萍等[7]認(rèn)為肺鱗癌中FHIT基因和P16基因表達(dá)缺失均低于肺腺癌。王國(guó)琴等[8，9]實(shí)驗(yàn)示FHIT蛋白在肺鱗癌中失表達(dá)陽(yáng)性率高于腺癌，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。楊文君等[10]認(rèn)為P16表達(dá)與肺癌病理組織分型無(wú)關(guān)。本實(shí)驗(yàn)證明FHIT基因、P16基因表達(dá)缺失與非小細(xì)胞肺癌病理組織類(lèi)型有關(guān)，參與肺鱗癌的發(fā)生、發(fā)展。檢測(cè)FHIT基因、p16基因表達(dá)缺失可以作為鑒別肺癌的組織類(lèi)型的一個(gè)參考指標(biāo)。從表4可以看出FHIT、P16蛋白在肺鱗癌中的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05），尚不能認(rèn)為兩者在肺鱗癌表達(dá)有關(guān)系。兩者在肺鱗癌的發(fā)生過(guò)程中可能存在關(guān)聯(lián)，也有可能為獨(dú)立因素。有待進(jìn)一步研究。

肺鱗癌中FHlT基因、P16基因失表達(dá)都是頻發(fā)事件，但應(yīng)用該兩基因蛋白診斷肺鱗癌時(shí)，目前尚無(wú)優(yōu)劣之分。而FHlT基因、P16基因可能在肺腺癌的發(fā)病過(guò)程中并非起關(guān)鍵作用，有待進(jìn)一步研究肺腺癌的發(fā)病機(jī)制。FHIT和P16在肺鱗癌發(fā)生中起重大作用。聯(lián)合檢測(cè)FHIT和P16蛋白有利于判斷非小細(xì)胞肺癌的病理組織類(lèi)型。FHIT可作為預(yù)測(cè)非小細(xì)胞肺癌有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的指標(biāo)。

[參考文獻(xiàn)]

[1] Ohta M，Inoue H，Cotticelli MG，et al. The FHIT gene，spanning the chrolnosome 3p14.2 fragile site and renal carcinoma-associated t（3：8） breakpoint.is abnormal in digestive tract cancers[J]. Cell，1996，84（4）：587-597.

[2] Panani AD，Maliaga K，Babanaraki A，et al. Numerical abnormalities of chromosome 9 and p16CDKN2A gene deletion detected by FISH in non-small cell lung cancer[J]. Anticancer Res，2009，29（11）：4483-4487.

[3] 王國(guó)付，欽光躍，李祝堯，等. 非小細(xì)胞肺癌組織中FHIT、P53和P16蛋白的異常表達(dá)及其與臨床病理的關(guān)系[J]. 中國(guó)肺癌雜志，2004，14（4）：21-24.

[4] Chen P，Li J，Wang Y，et al. Detection of FHIT and p16 mRNA deletion in biopsy specimens obtained by bronchoscopy for the diagnosis of lung cancer[J]. Int J Biol Markers，2013，28（3）：259-266.

[5] 王海霞，張建勇. FHIT和p16在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及意義[J]. 山東醫(yī)藥，2008，48（5）：37-38.

[6] 冼磊，周華富，張興華，等. p16基因甲基化及蛋白在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)[J]. 廣東醫(yī)學(xué)，2009，30（12）：1816-1818.

[7] 王萍，張慶，王祖義，等. 非小細(xì)胞肺癌組織中FHIT和P16基因表達(dá)的研究[J]. 癌變·畸變·突變，2007，19（3）：242-245.

[8] 王國(guó)琴，張燦珍，魏萬(wàn)里，等. FHIT基因在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及意義[J]. 實(shí)用腫瘤雜志，2006，31（4）：339-342.

[9] 袁玲，王新允，鄭海燕，等. 應(yīng)用組織芯片研究肺癌及癌前病變組織中FHIT的表達(dá)及其意義[J]. 中國(guó)肺癌雜志，2007，10（3）：192-196.

[10] 楊文君，翔燕，俞友娟，等. p53、p16、FHIT基因蛋白在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及意義[J]. 實(shí)用腫瘤雜志，2006，（1）：43-45.

（收稿日期：2013-11-08）