厭氧菌的微生物檢驗(yàn)及臨床意義

【中圖分類號】R446.5 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A 【文章編號】1672-3783（2013）12-0137-01

【摘要】目的：探討厭氧菌的微生物檢驗(yàn)方法及臨床意義。方法：選80例厭氧菌感染的標(biāo)本采集、送檢、檢驗(yàn)方法及常見厭氧菌的快速鑒定進(jìn)行分析。結(jié)果：80例感染標(biāo)本中厭氧菌培養(yǎng)陽性者24例，陽性率為30 %。其中單純厭氧菌陽性者10例，占陽性標(biāo)本的41.6 % ；厭氧菌和需氧菌混合感染14例。6例為兩種厭氧菌感染。結(jié)論：60%的感染與厭氧菌有關(guān)，有些部位的感染80%以上是由厭氧菌感染所致。厭氧菌標(biāo)本的采集與送檢，直接關(guān)系到實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的陽性率與準(zhǔn)確性。對于厭氧菌感染，實(shí)驗(yàn)室診斷日益受到重視。

【關(guān)鍵詞】厭氧菌；標(biāo)本采集立；送檢；檢驗(yàn)方法

厭氧菌分布十分廣泛是體內(nèi)正常菌群的組成成員，正常情況下菌群之間保持著微生態(tài)平衡，厭氧菌代謝產(chǎn)生的乙酸、乳酸等能抑制病原菌生長。選取80例感染標(biāo)本中厭氧菌檢驗(yàn)進(jìn)行分析。

1 臨床資料

1.1 一般資料 本組為2012年3月～2013年3月住院患者感染標(biāo)本80例，男性48例，女性32例，年齡15～73歲，平均年齡42歲。肺部感染20例，腹部水及腹腔引流液39例，膽汁14例，穿刺膿液7例。

1.2 方法

1.2.1標(biāo)本采集與送檢 標(biāo)本采集后要立即送檢，送檢過程中也必須避免接觸氧氣。標(biāo)本送到實(shí)驗(yàn)室后，應(yīng)在20～30 min內(nèi)處理完畢，最遲不超過2 h，以免其中的兼性厭氧菌過度生長而抑制厭氧菌的生長。若不能及時(shí)接種，可將標(biāo)本置室溫下保存，切不可冷藏，因在低溫時(shí)氧氣的溶解度較高，不利于厭氧菌的生長。

1.2.2厭氧菌的檢驗(yàn)方法

1.2.2.1肉眼觀察 每次接種前均應(yīng)觀察標(biāo)本的性狀，如是否為膿性、血性，有無黑色壞死組織或黑色分泌物，有無硫黃樣顆粒，是否有惡臭等。

1.2.2.2直接鏡檢 除血液標(biāo)本外，各種臨床標(biāo)本在接種前均須直接涂片，做革蘭染色后鏡檢，以觀察細(xì)菌的染色性、形態(tài)特征以及標(biāo)本中的菌量，以供分離培養(yǎng)、判斷結(jié)果時(shí)參考。

1.2.2.3分離培養(yǎng) 初代培養(yǎng)常用方法有厭氧罐法、氣袋法和厭氧手套箱法等。前兩種方法比較簡便，不需特殊設(shè)備，適用于小型實(shí)驗(yàn)室，后一種方法設(shè)備較為復(fù)雜而昂貴，但效果最佳。盡量使用新鮮培養(yǎng)基，并在2～4 h內(nèi)用完。使用前放入無氧環(huán)境，預(yù)還原處理24～48 h。可采用預(yù)還原滅菌法制作的培養(yǎng)基。若為液體培養(yǎng)基，在使用前必須煮沸10 min以驅(qū)除溶解氧，并迅速冷卻后接種細(xì)菌。標(biāo)本經(jīng)48h初代培養(yǎng)后，用放大鏡觀察平板上的菌落性狀。每個(gè)平板挑選5個(gè)不同性狀菌落，每個(gè)菌落分別接種2～3個(gè)平板，每個(gè)平板劃分4～6個(gè)區(qū)，分別作幾個(gè)菌落的次代培養(yǎng)。然后分別放入有氧、無氧和含5%～10%二氧化碳環(huán)境中培養(yǎng)48h。如在有氧、無氧環(huán)境中均能生長為兼性厭氧菌；如在有氧、無氧環(huán)境中均不生長或生長不好，而在二氧化碳環(huán)境生長最好為需二氧化碳菌；如在有氧下生長而在無氧下不生長則為需氧菌；在有氧環(huán)境中不生長而僅在厭氧環(huán)境中生長即為專性厭氧菌。

2 結(jié)果

80例感染標(biāo)本中厭氧菌培養(yǎng)陽性者24例，陽性率為30 %。其中單純厭氧菌陽性者10例，占陽性標(biāo)本的41.6 % ；厭氧菌和需氧菌混合感染14例。6例為兩種厭氧菌感染。厭氧菌在某些特定條件下，可引起人體的內(nèi)源性感染。60%的感染與厭氧菌有關(guān)，有些部位的感染80%以上是由厭氧菌感染所致。

3 討論

對厭氧菌的感染，常規(guī)細(xì)菌培養(yǎng)方法不能檢出，常用抗菌藥物也多無效果，是臨床上許多疑難雜癥，如“無菌性感染或膿腫”、“原因不明的發(fā)熱”，以及某些感染性疾病遷延不愈和反復(fù)發(fā)作的重要原因之一。在發(fā)生菌群失調(diào)或機(jī)體免疫力下降或細(xì)菌進(jìn)入非正常寄居部位時(shí)，這些厭氧菌即可作為條件致病菌而導(dǎo)致內(nèi)源性感染。厭氧菌標(biāo)本的采集與送檢，直接關(guān)系到實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的陽性率與準(zhǔn)確性。

標(biāo)本的采集與運(yùn)送是否適當(dāng)，對厭氧菌培養(yǎng)能否成功至關(guān)重要。厭氧菌的標(biāo)本采集的原則是要求標(biāo)本絕對不能被正常菌群所污染，采集時(shí)盡量避免接觸空氣。臨床在進(jìn)行厭氧菌培養(yǎng)前還應(yīng)與實(shí)驗(yàn)室聯(lián)系，以便實(shí)驗(yàn)室做好接種培養(yǎng)的準(zhǔn)備[1]。標(biāo)本應(yīng)從正常無菌部位或通過嚴(yán)格無菌技術(shù)采集，用特殊技術(shù)或方法采取的標(biāo)本，必須通過用于厭氧菌正常棲居地才能取到的標(biāo)本，如痰、支氣管鏡采樣（無特殊保護(hù)套）、咽拭子、排出的尿及陰道拭子不能做厭氧菌培養(yǎng)；糞便標(biāo)本厭氧菌培養(yǎng)，只能做難辨梭菌及內(nèi)毒桿菌的培養(yǎng)。最好是床邊接種，如無條件床邊采樣時(shí)，盡快將空針中的氣體排盡，用消毒空針抽取厭氧培養(yǎng)標(biāo)本，將針頭插入無菌橡皮塞。或?qū)?biāo)本插入運(yùn)送培養(yǎng)基中送細(xì)菌室培養(yǎng)。標(biāo)本送到實(shí)驗(yàn)室后，應(yīng)在20～30 min內(nèi)處理完畢，最遲不超過2 h，以免其中兼性厭氧菌過度生長而抑制厭氧菌的生長。如果一時(shí)來不及接種，可將標(biāo)本置室溫下保存。標(biāo)本不宜冷藏，因冷藏對某些厭氧菌有害，而且在低溫時(shí)氧的溶解度較高。每次標(biāo)本接種前均應(yīng)觀察標(biāo)本的性狀，包括標(biāo)本的氣味、是否膿性、帶血或腐敗物質(zhì)等，對厭氧菌的鑒定很重要。

肺部和胸腔的厭氧菌感染，吸入性肺炎多發(fā)生于老年人及嬰幼兒。局限性肺炎和支氣管肺炎主要是慢性復(fù)發(fā)性局限性肺炎和支氣管炎，病理學(xué)上以間質(zhì)性和肺泡內(nèi)浸潤為特征，缺少明顯的組織壞死和臨床癥狀。壞死性肺炎厭氧菌感染率100%[2]。本病特點(diǎn)是形成許多直徑在2 cm以下的小膿腫和壞死灶。嚴(yán)重者，形成肺壞疽。病人情況嚴(yán)重，體溫在39℃以上，常侵犯兩肺葉。部分病人有惡臭的痰及膿胸，病死率較高。肺膿腫與膿胸由吸入性肺炎引起，1～2周后開始有空洞或出現(xiàn)氣液平面。病人長時(shí)期體溫高、熱期長，部分病人白細(xì)胞明顯增多，還有部分病人體重明顯下降。肺部出現(xiàn)膿性分泌物。

腹膜及腹腔內(nèi)臟器的厭氧菌感染，腹膜炎細(xì)菌通過腹腔臟器的各種炎癥、手術(shù)、外傷和穿孔等，進(jìn)入腹腔所引起的繼發(fā)性感染。肝膿腫及其他腹腔膿腫，臨床表現(xiàn)和診斷與需氧菌引起的肝膿腫相同，即發(fā)熱、寒戰(zhàn)、貧血、惡心、食欲不振、肝區(qū)疼痛、肝臟腫大和體重減輕等癥狀。膽道系統(tǒng)感染，正常膽囊壁及膽汁中無菌，或僅有極少數(shù)細(xì)菌[3]。在膽囊炎或膽石癥時(shí)腸道的菌群沿膽管上行，或經(jīng)淋巴管進(jìn)入膽囊壁。闌尾炎和闌尾膿腫多為需氧菌與厭氧菌的混合感染，且闌尾炎癥越嚴(yán)重，厭氧菌培養(yǎng)陽性率也增高。

參考文獻(xiàn)

[1]周貴民.厭氧菌血培養(yǎng)是值得重視的問題.中華醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志，2005，28：979-980.

[2]張璞玉，陳升杰. 臨床標(biāo)本厭氧菌培養(yǎng)結(jié)果分析J . 中華醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志，2002 ，253（1） ：141 .

[3]吳多榮氧凈（OxyplatesTM）厭氧菌培養(yǎng)法的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用[J]中國熱帶醫(yī)學(xué)，2004，4：617～619