狗肝菜多糖對(duì)肝纖維化大鼠肝組織瘦素及血管內(nèi)皮因子蛋白表達(dá)的影響

【中圖分類號(hào)】R575.2 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】1672-3783（2013）12-0120-01

【摘要】目的：研究狗肝菜多糖對(duì)二甲基亞硝胺（DMN）誘導(dǎo)的肝纖維化大鼠肝組織中瘦素（Leptin）及血管內(nèi)皮因子蛋白表達(dá)的影響。方法：用DMN誘導(dǎo)大鼠肝纖維化模型，不同濃度狗肝菜多糖干預(yù)后，肝臟常規(guī)取材、制片，免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)各組大鼠肝組織Leptin及血管內(nèi)皮因子蛋白表達(dá)的情況。結(jié)果：模型組大鼠肝組織Leptin及血管內(nèi)皮因子蛋白染色強(qiáng)度和范圍明顯高于正常組，具有顯著性差異（P<0.05）；與模型組比較，狗肝菜多糖高劑量組、狗肝菜多糖中劑量組大鼠肝組織Leptin及血管內(nèi)皮因子蛋白表達(dá)明顯降低，具有顯著性差異（P<0.05）。結(jié)論：狗肝菜多糖抗肝纖維化的作用機(jī)制可能通過(guò)降低Leptin及血管內(nèi)皮因子蛋白的表達(dá)而調(diào)控細(xì)胞外基質(zhì)的代謝有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】狗肝菜多糖；肝纖維化；免疫組織化學(xué)；瘦素；血管內(nèi)皮因子

瘦素（Leptin）及血管內(nèi)皮因子在代謝、炎癥、腫瘤中均發(fā)揮著重要作用，明顯加重肝纖維化的發(fā)展程度，可能是一個(gè)關(guān)鍵促纖維化因子。狗肝菜多糖是是爵床科華九頭獅子草屬，在抗炎抑菌、抗氧化、抗病毒中發(fā)揮重要作用。近年來(lái)通過(guò)其化學(xué)成分、藥理作用的研究，其藥用價(jià)值得到了進(jìn)一步的肯定，尤其是在保肝護(hù)肝方面。因此，作者等通過(guò)免疫組化方法，觀察狗肝菜多糖干預(yù)的肝纖維化大鼠肝組織中Leptin及血管內(nèi)皮因子蛋白表達(dá)情況，探討狗肝菜多糖抗肝纖維化機(jī)制是否與降低Leptin及血管內(nèi)皮因子蛋白表達(dá)有關(guān)。

1材料與方法

1.1 SPF級(jí)SD大鼠72只，體重180-220g，雄性，適應(yīng)性喂養(yǎng)2d，每組12只，隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組、秋水仙堿組、狗肝菜多糖高劑量組、狗肝菜多糖中劑量組、狗肝菜多糖低劑量組。除正常對(duì)照組外，余60只造模。模型復(fù)制：每只動(dòng)物按2ml.kg-1劑量，腹腔注射0.5% DMN，連續(xù)注射三天，停藥四天，造模時(shí)間為四周，共注射12次。第一周用2/3劑量，以后用全量。藥物處理：秋水仙堿組劑量為0.1mg.kg-1，狗肝菜多糖高、中、低劑量組分別為300mg.kg-1、200mg.kg-1、100mg.kg-1，除正常對(duì)照組和模型組給予等體積生理鹽水灌胃外，各組均灌胃給藥，1次/d，連續(xù)4周。4周末，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，取大鼠肝組織常規(guī)脫水、制片，蘇木素-伊紅染色（HE）染色，觀察各組大鼠肝組織形態(tài)改變；免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)各組大鼠肝臟Leptin、血管內(nèi)皮因子表達(dá)情況。

免疫組化結(jié)果判定： 以胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒為陽(yáng)性。先按染色強(qiáng)度打分：0分為無(wú)色，1分為淺黃色，2分為棕黃色，3分為棕褐色；再按陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比打分：0分為陰性，1分為<10%，2分為11%-50%，3分為51%-75%，4分為>75%。總分0-1分（-），2-3分（+），4-5分（++），6-7分（+++）。

1.2 用SPSS17.0 統(tǒng)計(jì)軟件，進(jìn)行Ridit分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 Leptin表達(dá)情況

與正常組比較，模型組表達(dá)明顯升高（P<0.05）；與模型組比較，狗肝菜多糖高、中劑量組、秋水仙堿組瘦素蛋白表達(dá)明顯降低（P<0.05），狗肝菜多糖低劑量組瘦素蛋白表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；狗肝菜多糖高、中劑量組與秋水仙堿組比較，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

3討論

新近發(fā)現(xiàn)，瘦素（leptin）與轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1，血小板源性生長(zhǎng)因子，腫瘤壞死因子，r干擾素、 缺氧誘導(dǎo)因子-1α等構(gòu)成相互促進(jìn)或抑制的調(diào)解網(wǎng)絡(luò)，在肝纖維化形成中具有重要作用。作用機(jī)制為促進(jìn)肝內(nèi)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1、血小板衍生生長(zhǎng)因子等細(xì)胞因子的表達(dá)，增加膠原的表達(dá)，上調(diào)基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-1的表達(dá)，減少基質(zhì)金屬蛋白酶-1的形成，減少細(xì)胞外基質(zhì)的降解，并能上調(diào)促炎因子和促血管生成因子，從而促進(jìn)纖維化發(fā)展[1]。在人肝星狀細(xì)胞細(xì)胞系（LX - 2） 、鼠肝星狀細(xì)胞細(xì)胞系（HSC - T6）和從正常鼠肝內(nèi)分離培養(yǎng)活化的肝星狀細(xì)胞內(nèi)均發(fā)現(xiàn)有Leptin受體的表達(dá)，Leptin能刺激基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑啟動(dòng)子活性，激活絡(luò)氨酸激酶和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子3，5酶活性，進(jìn)而促進(jìn)基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-1的產(chǎn)生。Crepo J檢測(cè)135名慢性肝炎患者和75名正常對(duì)照者Leptin水平，并評(píng)價(jià)Leptin水平與肝纖維化程度的相關(guān)性，結(jié)果表明Leptin水平與肝纖維化程度正相關(guān)，隨著纖維化程度增加而升高。王曙強(qiáng)[2]認(rèn)為，在非酒精性肝硬化中，Leptin水平與轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1水平呈正相關(guān)，Leptin在非酒精性肝硬化中是獨(dú)立的致病因素，Leptin可能通過(guò)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1系統(tǒng)導(dǎo)致肝纖維化。

狗肝菜多糖作為一種民間藥物，有清熱解毒、消腫利濕的功效，常用來(lái)治療水腫、感冒發(fā)熱、蛇蟲(chóng)咬傷等。近年來(lái)通過(guò)其化學(xué)成分、藥理作用的研究，其藥用價(jià)值得到了進(jìn)一步的肯定。此次研究發(fā)現(xiàn)，模型組大鼠肝組織Leptin及血管內(nèi)皮因子表達(dá)明顯高于正常組，證實(shí)Leptin及血管內(nèi)皮因子在肝纖維化中發(fā)揮了重要作用。狗肝菜多糖防治大鼠肝纖維化可能與其降低Leptin及血管內(nèi)皮因子表達(dá)，抑制肝星狀細(xì)胞增殖和降低肝內(nèi)轉(zhuǎn)化誘導(dǎo)因子β1等細(xì)胞因子表達(dá)，減輕肝臟炎性壞死程度，減少血管生成，從而抑制肝纖維化的啟動(dòng)密切有關(guān)。同時(shí)，中醫(yī)藥與西醫(yī)治療比較，具有成本低廉、副作用小、多靶點(diǎn)、提取簡(jiǎn)單等優(yōu)勢(shì)。我國(guó)又是傳統(tǒng)中醫(yī)藥大國(guó)，中藥資源豐富，因此，狗肝菜多糖防治肝纖維化研究具有廣闊的推廣前景。

參考文獻(xiàn)

[1]劉弋云，朱萱.瘦素在肝纖維化形成中的作用與地位[J].國(guó)際消化病雜志，2009，29（6）：384-386.

[2]王曙強(qiáng).瘦素和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1對(duì)非酒精性脂肪性肝炎患者肝纖維化的影響[ J ].臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2009，8（8）：17-18.