參麥注射液對肺缺血—再灌注損傷細胞因子的影響

[摘要] 目的 探討參麥注射液對肺缺血-再灌注損傷患者細胞因子的影響。 方法 將32只建立肺缺血-再灌注模型的大白兔隨機分為研究組和對照組各16只。研究組在原位阻斷肺門前5分鐘注射參麥注射液（3mL/kg）。比較分析兩組白兔不同時間NF-κB陽性顆粒比例及TNF-α、IL-6和IL-8水平。 結果 研究組各時段血清TNF-α水平及肺組織NF-κB陽性顆粒比例均顯著低于對照組（P < 0.05），IL-6水平在再灌注1h以后顯著低于對照組（P < 0.05）；研究組血清IL-8水平在缺血末、再灌注2h、再灌注4h均顯著低于對照組（P < 0.05）。 結論 參麥注射液可早期抑制TNF-α活性而減少IL-6和IL-8的釋放，從而減輕炎癥反應和組織損傷。

[關鍵詞] 參麥注射液；肺缺血-再灌注；細胞因子

[中圖分類號] R285.5 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2013）31-0102-02

近年來，心外科手術諸如肺移植、肺動脈血栓內膜剝脫術、體外循環等應用越來越廣泛， 隨之而來的肺缺血-再灌注損傷（I/R）的問題也越來越受到重視。有研究證實，細胞因子在肺I/R中扮演重要角色，利多卡因、米屈肼、異丙酚、地塞米松、嗎啡等藥物具有保護肺組織、減輕肺損傷的作用[1]，但中藥對肺I/R的作用研究少見報道。我們在大白兔肺I/R模型的基礎上，觀察參麥注射液對其細胞因子的影響，旨在探討參麥注射液對肺I/R的臨床意義。

1資料與方法

1.1一般資料

本實驗于2012年1～5月進行設計及實驗前準備，2012年6～7月實施實驗。選擇健康日本長耳大白兔32只（由寧波大學實驗動物中心提供），體重1 450～1 520 g，平均（1 509.6±5.9）g；隨機分為研究組和對照組各16只，兩組動物在年齡、體重、健康狀況、喂養條件等方面具有可比性。

1.2研究方法

1.2.1動物模型建立 本組32例均采用原位阻斷肺門建立大白兔肺I/R模型。具體方法為：取大白兔稱重、編號，予10%水合氯醛（3.0 mL/kg）腹腔內注射麻醉生效后，氣管切開，連接呼吸機予呼吸機輔助呼吸（f=70，I∶E=1.25∶1，V=5～6 mL），牽拉左上肢，使大白兔呈右側臥位，消毒胸部，取左第5肋間開胸，游離左下肺韌帶，分離出左側肺門包括左支氣管，左肺動、靜脈，股靜脈注射肝素150 U/kg后，細導尿管穿過肺門，阻斷左肺門，45 min后重新開放，制備缺血再灌注模型。研究組在原位阻斷肺門前5 min股靜脈注射參麥注射液（3 mL/kg）。

1.2.2標本制備 每組分別于缺血末和再灌注1 h、2 h、4 h各處死4只大白兔，處死前采集并制備標本待檢。①經右股動脈采血6 mL，4℃低溫下3 000轉/min離心后取血漿，保存于1.0 mL EP管中，置于-70℃冰箱內凍存，備檢測。②取中葉肺組織，吸凈血污，用手術刀片修剪成約0.5 cm×0.5 cm、厚約0.3～0.4 cm后，10%甲醛溶液中固定24 h以上，常規脫水、透明、石蠟包埋備用。③4 h后結束實驗，經股動脈放血處死大白兔。

1.2.3觀察項目 分別于缺血末和再灌注1 h、2 h、4 h應用即用型超敏SP免疫組化試劑盒（上海博華生化試劑有限公司生產），采用免疫組織化學法檢測肺組織切片NF-κB，采用美國Media Cybemetics 公司的Image Pro Plus 圖像分析軟件，以細胞胞核胞漿中出現淺棕色或深棕色顆粒為陽性標準，統計陽性顆粒比例；采用放射免疫試劑盒（博研生物科技有限公司上海分公司）測定血漿中TNF-α水平；應用酶聯免疫吸附試劑盒（上海西唐生物科技有限公司）測定IL-6、IL-8水平。所有檢測項目均嚴格按照說明書操作并判定結果。比較兩組不同時間不同標本NF-κB陽性顆粒比例及TNF-α、IL-6和IL-8水平。

1.3統計學處理

所有數據以均數±標準差（x±s）表示，并錄入SPSS11.5軟件建立數據庫，組內數據行方差分析，組間行t檢驗， P < 0.05為差異具有統計學意義。

2結果

經方差分析，研究組內血清TNF-α、IL-6、IL-8水平具有顯著性差異（P < 0.05，F值分別為28.61、25.02和16.35）， 肺組織NF-κB陽性顆粒比例無顯著性差異（P > 0.05，F值為0.00）；對照組內上述觀察項目無顯著性差異（P > 0.05，F值分別為0.01、4.6、7.8和1.00）。

研究組各時段血清TNF-α水平及肺組織NF-κB陽性顆粒比例均顯著低于對照組（P < 0.05），IL-6水平在缺血末與對照組無顯著性差異（P > 0.05），再灌注1h以后顯著低于對照組（P < 0.05）；研究組血清IL-8水平在缺血末、再灌注2h、再灌注4h均顯著低于對照組（P < 0.05），但再灌注1h兩組無顯著性差異（P > 0.05）。見表1。

3討論

缺血-再灌注損傷（I/R）是指機體在一定時間內缺血后，組織細胞恢復供血而造成組織損傷程度加劇的情況[1]。目前認為，I/R的機制主要是氧自由基及脂質過氧化反應、細胞內鈣穩態失調、中性粒細胞大量浸潤引起的過度炎癥反應以及體液因子參與肺缺血再灌注損傷并引起細胞凋亡。但后者研究少見報道，多數研究集中在肺I/R時肺功能的物理指標（如血氧分壓、氣道阻力、肺順應性等）、生化指標和形態學改變方面。宮素崗[2]等研究認為，I/R期間的細胞因子釋放與細胞凋亡有密切的關系，腫瘤壞死因子α（TNF-α）、白細胞介素2（IL-2）、白細胞介素6（IL-6）、白細胞介素8（IL-8）等細胞因子在核因子-κB（NF-κB）的調控下參與免疫反應的早期和炎癥反應各階段。

TNF-α是一種具有廣泛生物活性的細胞活化因子，其主要功能是激活的巨噬細胞、內皮細胞、中性粒細胞及B淋巴細胞分泌，從而啟動和觸發炎癥過程，在急性肺損傷（ALI）的發生和發展過程中起重要作用[3，4]。徐繼來等[5]研究表明，TNF-α在急性創傷中早期即可高水平分泌，通過直接損傷血管內皮細胞、激活多形核粒細胞產生多種活性物質等途徑造成組織器官的進一步損傷。IL-6在急性炎癥反應中通過刺激肝細胞合成急性期反應蛋白參與驗證反應[6，7]；IL-8具有吸引和激活中性粒細胞的生物學活性，趨化后者定向游走到反應部位并釋放一系列活性產物，造成局部炎癥反應加重。

我們在建立白兔肺I/R模型[8]的基礎上，研究參麥注射液對肺I/R期間細胞因子的影響，結果表明：研究組各時段血清TNF-α水平及肺組織NF-κB陽性顆粒比例均顯著低于對照組（P < 0.05/0.01），提示參麥注射液具有降低因組織缺血而導致的TNF-α分泌水平；IL-6水平在缺血末與對照組無顯著性差異（P > 0.05），再灌注1h以后顯著低于對照組（P < 0.05/0.01），提示IL-6水平可能與再灌注損傷程度相關；研究組血清IL-8水平在缺血末、再灌注2h、再灌注4h均顯著低于對照組（P < 0.05/0.01），但再灌注1h兩組無顯著性差異（P > 0.05），提示參麥注射液對IL-8水平影響較弱，且不穩定。 研究組內TNF-α、IL-6和IL-8水平及NF-κB陽性顆粒比例隨時間呈現持續下降趨勢，經方差分析TNF-α、IL-6和IL-8水平具有顯著性差異（P < 0.05），表明參麥注射液具有持久抑制TNF-α、IL-6和IL-8等細胞因子活性的作用。

參麥注射液是提取中藥紅參、麥冬的有效成分，加入聚山梨酯80、亞硫酸氫鈉等輔料制成，具有抗休克、抗心律失常、強心等功效，在心血管應用較廣泛[9-11]。近年來，有研究證實，參麥注射液還具有調節免疫和抗炎等作用，并在重癥肺部疾病治療中取得滿意效果[12]。周俊輝等[13]研究認為，參麥注射液可抑制氧自由基的生成，減輕脂質過氧化對肺缺血/再灌注損傷。本研究從參麥注射液對肺I/R過程中細胞因子水平的影響，一方面探討了細胞因子在肺I/R損傷中的作用，另一方面也驗證了參麥注射液對肺I/R損傷具有保護作用，其作用機制可能為早期抑制TNF-α活性而減少IL-6和IL-8的釋放，從而減輕炎癥反應和組織損傷[14，15]。

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（收稿日期：2013-04-16）