左乙拉西坦對癲癇患兒的神經保護作用

[摘要] 目的 觀察左乙拉西坦（LEV）對癲癇患兒血清神經元特異性烯醇酶（NSE）的影響，探討LEV對癲癇患兒的神經保護作用。 方法 參與本次實驗研究的有40例癲癇患兒和10例健康兒童。采用放免法測健康兒童及癲癇患兒發作72 h之內血清NSE的濃度，以此為標準對LEV治療的癲癇患兒予8周評估。將40例癲癇患兒隨機分成LEV組和VPA（丙戊酸鈉）組，分別監測兩組癲癇患兒在治療前（0周）與治療后2周、8周血清NSE濃度變化。結果 干預前LEV與VPA兩組的NSE指標水平無顯著差異（P = 0.398），明顯高于正常兒童組（P < 0.01）；治療2周后，LEV組、VPA組的NSE指標均有所下降，與正常兒童間的血NSE指標差異均顯著（P < 0.01）；治療8周后，NSE值在三組間有顯著性差異，LEV組與正常兒童間的差異不顯著（P = 0.669），VPA組與LEV組及正常兒童組的差異顯著（P < 0.01），均高于二者的平均值。結論 左乙拉西坦會降低癲癇患兒血清NSE的水平，可能具有神經保護作用。

[關鍵詞] 癲癇；左乙拉西坦；丙戊酸鈉；神經元特異性烯醇酶

[中圖分類號] R742.1 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2013）25-0031-02

Neuroprotection effect of LEV in children with epilepsy

QIU Anli1 REN Zhimin2 FANG Shaohong2 CHEN Guiying1 HAO Yanqiu2

1.Department of Pediatrics， Harbin Children’s Hospital， Harbin 150010， China； 2.Department of Pediatrics， the Second Hospital Affiliated to Harbin Medical University， Harbin 150086， China

[Abstract] Objective To investigate effects of levetiracetam （LEV） on serum neuron-specific enolase （NSE） for understanding its neuronal protection in children with epilepsy. Methods Forty children with epilepsy and ten healthy children participated this study. The children with epilepsy were randomized into two groups： one was treated under LEV （n=20） and the other was under VPA （n=20） for eight weeks. The NSE level in the serum was assessed in the healthy children once. The NSE level of children with epilepsy was assessed within 72 hours after seizure before the treatment as well as at 2 and 8 weeks after the treatment. Results Before the treatment， the serum NSE level was comparable between children treated with VPA and children treated with LEV （P = 0.398）， but was higher than that in healthy children （P < 0.01）. After the two-week-treatment， the NSE level was reduced in children treated with VPA （P < 0.01） and children treated with LEV（P < 0.01） but was still significantly greater than that of normal children （P < 0.01）. After the eight-week treatment， the NSE level was comparable between children under the LEV treatment and normal children （P = 0.669）， while the higher NSE level was observed in children under the VPA treatment in comparison with normal children （or children with the LEV treatment） （P < 0.01）. Conclusion LEV decreases the serum NSE level in children with epilepsy and thus may have potential protection of neuronal damage.

[Key words] Epilepsy； LEV； VPA； Neuron-specific enolase

癲癇（epilepsy）是小兒常見的中樞神經系統疾病，是慢性腦損傷疾患，頻繁發作會導致腦的不同區域神經元死亡及損傷，常導致患兒智力低下，不能生活自理，嚴重影響患兒的生活質量。左乙拉西坦（LEV）是一種新型抗癲癇藥物，具有獨特的化學結構及作用機制，良好的藥代動力學特性[1]：高效的生物利用度，線性動力學，較低的血漿蛋白結合力等，LEV已廣泛應用于部分性癲癇發作。

近年來國內外除了研究LEV抗癲癇作用外，更關注其神經保護作用，Haichen Wang等[2]在閉合性腦損傷（CHI）及蛛網膜下腔出血（SAH）鼠模型、Gibbs等[3]在電誘導癲癇持續狀態（SE）模型中均已經證明了LEV具有神經保護作用。而蔣莉等[4]研究報道血清神經元特異性烯醇酶（NSE）是臨床檢測腦損傷的有效指標。本文我們對2012年2～9月哈爾濱醫科大學附屬第二醫院兒內科門診及兒童醫院神經科門診癲癇患兒的臨床資料進行研究，旨在探討LEV引起癲癇患兒血清NSE濃度變化及其意義，分析其神經保護作用，從而指導臨床合理用藥。

1 對象與方法

1.1研究對象

1.1.1診斷與分類標準 根據國際抗癲癇聯盟1981年癲癇發作的國際分類及1989年癲癇及癲癇綜合征的國際分類[5]、臨床表現和EEG檢查均符合癲癇的診斷，并將發作類型分為全身性發作和部分性發作。

1.1.2研究納入標準 ①新診斷癲癇患兒是2012年2～9月哈爾濱醫科大學附屬第二醫院兒內科門診及兒童醫院神經科門診就診的患兒，就診前半年內起病，無熱驚厥發作頻繁或癲癇持續狀態，呈全身性發作，臨床表現和EEG檢查均符合癲癇診斷；②對照組為年齡、性別相仿的同期門診健康體檢兒童，入選兒童及其監護人了解本實驗的研究目的和方法，愿意參與本研究；③確診癲癇前未服抗癲癇藥物（AEDS）；④僅LEV、VPA單藥治療且治療后無發作；⑤頭CT或MRI檢查無明顯異常；⑥丙戊酸鈉組檢測血藥濃度。

1.1.3 病例排除標準 ①初診患兒癲癇發作類型是部分性發作；②VPA、LEV治療過程中發作未控制，改用、合用其他AEDs等添加治療者；③腦發育遲滯或既往有腦部疾病史；④未按照約定時間定期復診。

1.2 研究方法

1.2.1分組與設計 依據納入標準將入組病例40例隨機分成兩組，LEV組20例，男12 例，女 8例，年齡12月～11歲，平均（6.00±3.02）歲。VPA組20例，男10例，女10例，年齡9月～11歲，平均（5.00±3.12）歲。LEV組20例癲癇患兒采用優時比公司的開普蘭片，規格250 mg，每日（10～30） mg/kg，口服。VPA組20例，給予丙戊酸鈉口服，每日（20～30） mg/kg，口服。正常組10例，男5例，女5例，年齡4～8歲，平均（5.1±1.8）歲。

1.2.2檢驗方法 采集LEV組、VPA組癲癇患兒治療前，治療后2周、8周全血及10例健康兒童的全血，離心后留1.5 mL的血清分別貼上標簽，置-70℃冰箱凍存待測。采用ELESA分析法測定NSE含量（試劑盒為ADL公司產品），嚴格按照說明書進行操作。

1.3統計方法

采用SPSS18.0軟件進行統計分析。計量資料以均數±標準差（x±s）表示。固定時間因素（0周、2周、8周）LEV組與正常組或VPA組的比較，在每個時間點上做單因素方差分析或兩樣本t檢驗，P < 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

LEV組對癲癇患兒治療后血清NSE濃度的變化見表1。健康兒童組各隨訪時間點的血清NSE指標無顯著差異。從各時間點看，干預前LEV與VPA兩組的血清NSE指標水平無顯著差異（P = 0.398），但明顯高于正常兒童組（P <0.01）；治療2周后，LEV組、VPA組的血清NSE指標均有所下降，與正常兒童間的NSE指標差異均顯著，但VPA組高于LEV組，LEV組高于正常兒童組；治療8周后，VPA組與LEV組及正常兒童組的差異顯著（P < 0.01），均高于二者的平均值，而LEV組與正常兒童間的血清NSE濃度差異不顯著（P =0.669）。干預前后各組之間存在交互效應（F=86.816，P<0.01）。

3 討論

癲癇是小兒神經系統常見病，是以神經元異常放電所致的暫時性中樞神經功能失常為特征的綜合征。癲癇發作時，腦組織存在缺血缺氧，由于神經元對缺血缺氧最為敏感， 因此即使短暫的供血供氧障礙也會造成神經元的損傷。神經元特異性烯醇酶（NSE）分布于神經細胞及神經內分泌細胞中，是一種糖酵解酶，與神經細胞分化成熟有關，并參與神經細胞的能量代謝過程。神經細胞受損后，NSE隨細胞崩解而釋放入腦脊液中，腦膠質細胞和其他神經組織中不含有這種酶，成為神經細胞損傷的重要標志。因而可以利用這種酶在癲癇發作前后的變化來了解神經元損傷情況[6]。Lasxmikants等[7]動物模型實驗中發現單次癲癇發作或是癲癇持續狀態（SE）均可造成腦損傷導致腦功能異常。近年來無論是動物實驗或臨床研究證實，驚厥發作后血清NSE的變化與神經元死亡的發生發展規律一致，認為血清NSE 可能作為臨床檢測腦損傷的有效指標[4]。

VPA 除抗癲外還具有神經保護和抗凋亡作用。Chen等[8]在大鼠中腦星型膠質細胞中發現VPA 具有誘導神經營養及神經保護作用。本研究中，VPA治療前后血清NSE逐漸降低，也證實了其神經保護作用。LEV是一種新型抗癲癇藥物，其抗癲癇機制不明，多數研究認為，LEV與腦內突觸囊泡蛋白SV2A結合，調節突出囊泡循環與神經遞質釋放到突出間隙控制癲癇發作[9]。近年來對LEV神經保護作用的研究較少，多為體外研究。Sendrowski K等[1]通過體外光鏡下神經元細胞形態測試和乳酸脫氫酶釋放活動，證明LEV能夠阻止低氧誘導下海馬神經細胞死亡，高劑量LEV組神經細胞存活率高于對照組二倍。Haichen Wang等[2]在閉合性腦損傷（CHI）及蛛網膜下腔出血（SAH）鼠模型中通過測量大腦中動脈的直徑證明LEV能夠改善損傷的腦細胞功能，減少CHI及SAH鼠模型中的血管痙攣及神經元損傷的組織學改變。Klitgaard等[10]發現在毛果云香堿誘導的癲癇發作模型中LEV可以減少海馬細胞死亡，增加海馬細胞興奮性。Gibbs等[3]在電誘導SE模型中發現，LEV能有效防御SE后線粒體機能障礙和氧化應激，揭示了其神經保護活動優于其抗癲癇特性。在本研究中，LEV組、VPA組癲癇患兒抽搐發作72 h內血清NSE濃度均顯著升高，與正常組有明顯差異，LEV組、VPA組治療2周時血NSE濃度下降（LEV組較VPA組下降明顯），但與正常組仍有差異，治療8周時LEV組血清NSE濃度接近正常，與正常組無差異，而VPA組血清NSE濃度下降，但與正常組有差異。本研究可以看到在0～8周治療期間，接受LEV組治療患者血清NES濃度比接受VPA組治療患者血清NES濃度有明顯減少，同時，LEV組治療患者血清NES濃度變化的速度比VPA組治療患者血清NES濃度變化的速度快，綜上所述，LEV影響了癲癇患兒發作后血清NSE濃度的變化，減輕癲癇患兒的腦神經元損傷，可能對癲癇患兒具有一定的神經保護作用，對臨床用藥及改善患兒生活質量有很大的意義。LEV與VPA在治療過程中均有效的控制了癲癇發作，其中有4例患兒出現了嗜睡，1例易怒，未發現對記憶力，注意力等認知功能的影響。由于配合本實驗患兒例數有限，LEV對癲癇患兒血清NSE的影響及其所揭示的神經元保護作用還待進一步研究，以便臨床應用。

[參考文獻]

[1] Sendrowski K，Bockowski L，Sobaniec W，et al. Levetiracetam protects hippocampal neurons in culture against hypoxia-induced injury[J]. Folia Histochemica ET Cytobiologica，2011，49（1）：148-152.

[2] Haichen Wang，Junling Gao，Timothy F，et al. Levetiracetam is neuroprotective in murine models of closed head injury and subarachnoid hemorrhage[J]. Neurocrit Care，2006，5（1）：71-78.

[3] Gibbs JE，Walker MC，Cock HR. Levetiracetam：Antiepileptic properties and protective effects on mitochondrial dysfunction in experimental status epilepticus[J]. Epilepia，2006，47（3）：469-478.

[4] 蔣莉，蔡云成，陳瓊，等. 長程驚厥發作后神經元死亡的動態研究[J].重慶醫科大學學報，2002，27（3）：253-256.

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[8] Chen PS，Peng GS，LiG，et al. V alproate protects dopam inergic neurons in m idb rain neu ron/glia cultures by stim u lating the release of neurotrophic factors from astrocytes[J]. Mol Psychiatry，2006，11（12）：1116-1125.

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[10] Klitgaard，Asla PitKanen. Antiepileptogenesis，neuroprotection and disease modification in the treatment[J]. Epileptic Disord，2003，5（1）：9-16.

（收稿日期：2013-05-21）