肺癌患者T細胞亞群和D—二聚體與臨床分期相關性分析

[摘要] 目的 研究肺癌患者外周血T淋巴細胞亞群、D-二聚體與臨床分期、臨床病理分級之間的關系。 方法 運用流式細胞術和免疫比濁法分別測定80例肺癌患者外周血T淋巴細胞亞群比例和D-二聚體含量。 結果 臨床分期Ⅲ～Ⅳ期（晚期）外周血中CD4+（%）比例較臨床Ⅰ～Ⅱ期（早期）低（P < 0.01）、Ⅲ～Ⅳ期（晚期）CD8+（%）比例較臨床Ⅰ～Ⅱ期（早期）高（P < 0.01）、CD4+/CD8+（%）比例較臨床Ⅰ～Ⅱ期（早期）低（P < 0.01），D-二聚體含量（μg/L）較臨床Ⅰ～Ⅱ期（早期）高，外周血T細胞亞群比例和D-二聚體的含量與病理類型和病理分級無相關性（P > 0.05）。 結論 肺癌患者外周血T淋巴細胞亞群和D-二聚體含量與肺癌的臨床分期早晚相關，與肺癌的病理類型和分化級別無關，提示可作為肺癌患者分期的參考指標。

[關鍵詞] T淋巴細胞；D-二聚體；肺癌；臨床分期

[中圖分類號] R734.2 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2013）22-0058-02

腫瘤的發生、發展及轉移與腫瘤微環境密切相關。而微環境內執行細胞免疫功能主要依賴于T淋巴細胞。正常情況下，T細胞及亞群的數目處于相對平衡狀態，維持免疫功能穩定；若T細胞總數或者CD4+/CD8+T細胞比值發生異常時，即可視為免疫調節紊亂，宿主免疫功能低下或受抑制，易發生腫瘤或自身免疫疾病[1]。腫瘤抗原識別通過CD4+完成，肺癌患者體內CD4+細胞數減少，CD8+細胞數增多，則有利于腫瘤增長。而CD4+/CD8+比值增加，會抑制腫瘤增殖。故檢測肺癌患者外周血T細胞亞群，對于判斷腫瘤患者的免疫功能有一定價值，特別是對監視腫瘤復發、提高療效、估計預后均有一定的臨床意義[2]。

D-二聚體是纖維蛋白單體經活化的因子交聯后再經纖溶酶水解所產生的一種特異降解產物，有報道在肺癌[3]、肝癌[4]、結直腸癌[5]等惡性腫瘤中均有較高的表達。因而近年來有關惡性腫瘤患者D-二聚體水平的變化引起了許多學者的關注，D-二聚體的水平可能與腫瘤的臨床分期有關。本文通過測定不同肺癌分期T細胞亞群的比例、D-二聚體的含量，分析兩者在肺癌臨床分期、病理類型及病理分化級別中的意義，以期為肺癌診斷和治療提供理論支持。

1 資料與方法

1.1 一般資料

80例肺癌患者為2011年7月～2012年7月在我院腫瘤科或胸外科住院患者，其中男43例，女37例，年齡42～85歲，中位年齡59.4歲。所有患者均為經支氣管鏡或手術病理證實的初診肺癌患者，其中支氣管鏡活檢確診32例，手術病理48例，根據2009年國際抗癌聯盟（UICC）的TNM分期標準，其中Ⅰ期患者24例、Ⅱ期患者21例、Ⅲ期患者25例、Ⅳ期患者10例。所有患者均為初治患者，不伴有免疫缺陷性疾病、器官移植或其他系統的腫瘤，近3個月未使用過免疫增強或抑制的藥物及其他生物治療。

1.2 主要試劑與儀器

小鼠抗人IgG-PE、IgG-FITC、CD4+-FITC、CD8+-FITC、CD4+-PE、CD8+-PE為美國CST公司生產，流式細胞儀為美國COULER EPICS XL，SIEMENS公司D-二聚體試劑盒，SYSMEX CA1500 全自動生化分析儀。

1.3 方法

收集治療前患者清晨空腹靜脈血2 mL，分別檢測患者治療前血漿D-二聚體水平及T淋巴細胞亞群的情況。采用SYSMEX CA1500全自動生化分析儀，D-二聚體試劑盒，應用免疫比濁法檢測研究對象血漿D-二聚體含量。用流式細胞分析法測定T細胞亞群，方法為：用PE熒光標記的單克隆抗體20 μL加入EDTA抗凝血100 μL發生抗原抗體反應，溶血劑2 mL破壞紅細胞，磷酸鹽緩沖液洗滌，固定液固定后用COULER EPICS XL流式細胞儀檢測外周血T淋巴細胞。

1.4 統計學方法

計量資料用均數±標準差（x±s）表示，并用SPSS 13.0軟件包對T淋巴細胞亞群和血清D-二聚體含量與肺癌臨床分期的關系進行兩獨立樣本的t檢驗， T淋巴細胞亞群和血清D-二聚體含量與病理分化級別的關系采用獨立樣本t檢驗，以P < 0.01為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 肺癌的分期與肺癌患者T細胞亞群分布及D-二聚體含量的關系

對肺癌臨床分期Ⅰ～Ⅱ期（早期）和Ⅲ～Ⅳ期（晚期）的樣本進行兩獨立樣本的t檢驗按α=0.01的標準，CD4+細胞比例（t=5.523，P=0.00047）、CD8+細胞比例（t=5.690，P=0.00032）、CD4+/CD8+比例（t=6.418，P=0.00063）及D-二聚體含量（t=6.154，P=0.00082）的差異具有統計學意義。見表1。

2.2 肺癌病理類型及病理分化級別與肺癌患者T細胞亞群分布及D-二聚體含量的關系

肺癌病理類型分為鱗癌41例，腺癌39例。CD4+細胞的比例（鱗癌：t=3.193，P=0.592，腺癌：t=4.803，P = 0.843）、CD8+細胞比例（鱗癌：t=4.492，P = 0.321，腺癌：t = 5.52，P = 0.582）、CD4+/CD8+的比例（鱗癌：t = 0.546，P = 0.605，腺癌：t=0.558，P =0.642）與病理分化級別之間差異無統計學意義，D-二聚體含量（鱗癌：t = 3.28，P = 0.910，腺癌：t = 4.231，P = 0.431）與病理分化級別的差異亦無統計學意義。見表2。

3 討論

在惡性腫瘤形成過程中腫瘤細胞產生免疫抑制因子抑制淋巴細胞分化增殖，使得淋巴細胞表面CD4+抗原減少，CD4+ T細胞降低，免疫反應誘導及效應不足，特異抗腫瘤效應下降[5]；CD8+T細胞反應性增多，則CD8+T可直接作用于B淋巴細胞表面的同種異型受體，使與腫瘤抗原結合的受體被封閉，CD8+T細胞升高則免疫反應低下，CD4+/CD8+降低，免疫抑制反應的效應高于免疫誘導[6]，國內已有報道T淋巴細胞亞群與結直腸癌、宮頸癌等臨床分期的關系，本研究發現外周血中CD4+比例、CD8+比例、CD4+/CD8+比例的改變與臨床分期早晚有關，臨床分期Ⅲ～Ⅳ期（晚期）外周血中CD4+比例較臨床Ⅰ～Ⅱ期（早期）低、CD8+的比例較臨床Ⅰ～Ⅱ期（早期）高、CD4+/CD8+比例較臨床Ⅰ～Ⅱ期（早期）低，這與董暉等[7]、劉小林等[8]的報道類似。

D-二聚體作為交聯纖維蛋白的降解產物，是繼發性纖溶的特異性分子標志物之一，對惡性腫瘤的觀測有重要臨床價值。有報道稱約90%以上轉移癌和一半以上的原發癌存在凝血參數異常，研究發現D-二聚體含量與胃癌、乳腺癌、腸癌的TNM分期有關[9]。我們的數據顯示血清中D-二聚體與肺癌患者的TNM分期級別高低有關，臨床晚期較于早期的外周血D-二聚體含量明顯增高，提示可以利用D-二聚體含量來檢測腫瘤的存在，同時同一病理類型（鱗癌或腺癌）分化級別與D-二聚體含量差異無統計學意義，不同病理類型同一分化級別的腫瘤D-二聚體的含量亦無顯著性差異，說明D-二聚體的含量與肺癌的分期級別高低有關而與肺癌病理類型無關。

本研究發現肺癌患者外周血T淋巴細胞亞群和血清D-二聚體含量與臨床分期級別高低有關，同時T淋巴細胞亞群和血清D-二聚體含量與肺癌的病理類型和分化級別無關，提示T淋巴細胞亞群和D-二聚體可以作為臨床分期的輔助參考指標。

[參考文獻]

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[7] 董暉，王朝杰. 結直腸癌患者免疫狀況與腫瘤分期的關系[J]. 國外醫學：放射醫學核醫學分冊，2005，29（5）：115-117.

[8] 劉小林，王忠明. 宮頸癌患者淋巴細胞亞群檢測的臨床意義[J]. 放射免疫學雜志，2010， 23（5）：592-593.

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（收稿日期：2013-04-02）