Survivin和PTEN在非小細胞肺癌中的表達及臨床意義

[摘要] 目的 探討Survivin和PTEN在非小細胞肺癌（NSCLC）中的表達及臨床意義。 方法 應用免疫組織化學EnVision法檢測80例NSCLC組織和30例癌旁肺組織中Survivin及PTEN的表達，并分析其與臨床病理因素之間的關系。 結果 肺癌組織中，Survivin和 PTEN的陽性表達率分別為72.5%和33.8%，癌旁組織中Survivin和 PTEN的陽性表達率分別為 0和83.3%，Survivin隨著腫瘤惡性程度增高，陽性表達率逐漸升高，而PTEN的表達則相反，二者在腫瘤中的表述呈負相關（r = -0.235，P < 0.01）。 結論 Survivin和PTEN的異常表達與NSCLC的發生發展有關，可作為判斷肺癌生物學行為和預后的參考指標。

[關鍵詞] Survivin；PTEN；非小細胞肺癌；免疫組織化學

[中圖分類號] R734.2 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2013）22-0050-03

肺癌是世界上發病率和病死率均居首位的惡性腫瘤，其中非小細胞肺癌（non-small-cell lung cancer，NSCLC）所占比例約為肺癌總數的80%～85%[1]，成為嚴重危害人類健康的疾病之一。肺癌的發生發展是多個癌基因和抑癌基因共同參與的過程，另外還與細胞增殖和凋亡調控異常有關。Survivin是凋亡抑制基因，具有抑制細胞凋亡、調控細胞周期及參與血管形成的作用，在腫瘤形成中起著重要作用。PTEN基因是一個具有酪氨酸磷酸酶活性的抑癌基因，在腫瘤細胞浸潤、血管發生及腫瘤轉移中起作用。本研究通過檢測Survivin和PTEN在NSCLC和癌旁肺組織中的表達并分析其與臨床病理學特征之間的關系，研究二者在非小細胞肺癌的發生發展中的作用及相關性，為判斷NSCLC的生物學行為及患者預后提供依據。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

隨機選取2005年1月～2012年12月濮陽市人民醫院胸外科手術切除并經病理證實的肺癌標本80例和相應的癌旁組織30例，所有患者術前均未行化療、放療和其他抗腫瘤治療?；颊吣挲g38～80歲，平均年齡（62±3.2）歲；男46例，女34例；其中鱗癌45例，腺癌35例；高、中分化52例，低分化28例。TNM分期：I期18例，Ⅱ期25例，Ⅲ期22例，IV期15例；有淋巴結轉移者48例，無淋巴結轉移者32例。所有標本均經10%福爾馬林固定，石蠟包埋，4 μm厚切片，分別進行HE染色及免疫組化染色。

1.2 方法

采用免疫組化EnVision法，多克隆兔抗人Survivin抗體、鼠抗人PTEN抗體和EnVisionTM檢測試劑盒均購自DAKO公司。將已知陽性切片作為陽性對照，用PBS代替一抗作為陰性對照。結果判定參考Falleni等[2]的半定量計數方法。每張切片選10個高倍視野，計數至少500個腫瘤細胞，取其平均值計算陽性細胞百分率。腫瘤細胞陽性率≤5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分。根據染色強度分為4級：0分：無染色；1分：淡黃色；2分：黃色；3分：棕黃色或棕褐色。陽性細胞率與染色強度得分相乘為每例積分。規定0～1分為陰性（-），積分≥2為陽性。其中2～4分為弱陽性（+），5～8分為中度陽性（++），9～12分為強陽性（+++）。

1.3 統計學處理

采用SPSS 17.0統計分析軟件進行數據分析，陽性率比較采用χ2檢驗，相關性采用校正χ2檢驗、Spearman等級相關分析，以α=0.05為檢驗水準。

2 結果

2.1 Survivin和PTEN在NSCLC和癌旁肺組織中的表達

Survivin的陽性表達信號位于胞漿，呈棕黃色細顆粒。在肺癌組織與癌旁組織Survivin的陽性表達率分別為72.5%和0。PTEN的陽性表達信號大部分位于胞質內，少數病例位于胞核，呈不同染色程度的棕黃色細顆粒。肺癌組織中PTEN的陽性表達率為33.8%，明顯低于癌旁組織 （83.3%）（P < 0.01）。見表1。

2.2 Survivin和PTEN在NSCLC中的表達與肺癌臨床病理學特征之間的關系

Survivin和PTEN的表達與腫瘤的分化程度、臨床分期及有無淋巴結轉移相關（P均< 0.05），Survivin的表達隨著腫瘤組織分化程度的降低、臨床分期的增高和有淋巴結轉移組織而逐漸增高。PTEN的表達則與之相反。二者的表達與患者的性別、年齡、腫瘤類型差異均無統計學意義（均P > 0.05）。見表2。

2.3 NSCLC中Survivin的表達和PTEN表達的相關性分析

Survivin、PTEN兩者經相關性檢驗得出，Spearman相關系數r = -0.235，P < 0.01，表明Survivin與PTEN之間存在負相關關系。見表3。

3 討論

Survivin基因定位于人染色體17q25，全長1476nt，長度范圍在75～130 kb，包含4個外顯子和3個內含子，由1.9 kb的mRNA轉錄和編碼，編碼142個氨基酸組成相對分子質量約16 200的胞漿蛋白，并被證實是一種結構和功能獨特的IAP家族成員，是IAP家族中分子結構最簡單、最獨特的，也是迄今發現最強的IAP。Survivin主要通過直接作用于凋亡末端通路，抑制Caspase-3、Caspase-7活性，阻斷細胞的凋亡過程[3]，參與腫瘤的發生。Survivin 主要在胚胎組織及分化未成熟的組織和大多數腫瘤組織中表達，在成人體內所有分化成熟的組織內均無表達。Akyurek等[4]研究表明，在正常的支氣管上皮細胞中、低分化的非典型腺瘤樣增生以及癌旁肺組織中，Survivin的表達為陰性；而在鱗狀化生和發育異常的非典型腺瘤樣增生組織中Survivin的表達為陽性。說明Survivin陽性表達是腫瘤發生的早期分子事件，提示組織學尚正常的組織存在癌變的可能[5]。為NSCLC的早期診斷提供了可靠依據。朱叢中等[6]研究發現Survivin的表達與組織學分級、臨床分期和有無淋巴結轉移有關，我們的研究結果顯示Survivin在NSCLC組織中表達的陽性率為72.5%，而在癌旁正常肺組織不表達，Survivin蛋白的表達與腫瘤的分化程度、臨床分期和淋巴結轉移相關（P < 0.01），而與其他臨床病理特征均無相關（P >0.05），提示Survivin蛋白表達與NSCLC的發生、發展密切相關， 同時也對預后評估提供了參考。

PTEN是一種具有雙重特異性磷酸酶活性的抑癌基因，定位于染色體10q23.3，全長200 kb，由9個外顯子和8個內含子組成，編碼403個氨基酸組成的蛋白質。參與細胞凋亡和細胞周期調控，與細胞黏附和腫瘤轉移有關。PTEN突變使細胞生長失去了負調控，可導致腫瘤進行性生長[7]。研究表明PTEN表達缺失是非小細胞肺癌發生發展過程中的晚期事件之一，可成為判斷肺癌分化程度、轉移及判斷病人病情預后的指標。Goncharuk VN等[8]用免疫組化方法對51例肺腺癌和53例肺鱗狀細胞癌檢測了PTEN的表達，發現PTEN缺失與腫瘤臨床分期、遠處轉移和患者的預后顯著相關，并且是獨立的預后因子。Wang C等[9]檢測了172例肺腺癌組織中PTEN的表達，發現PTEN與腫瘤分化程度、淋巴結轉移和遠處轉移有關，對肺癌患者預后有著高度預測作用。本研究結果顯示，PTEN的表達隨著腫瘤組織分化程度的降低、臨床分期的增高和有淋巴結轉移組織而逐漸降低，為判斷肺癌細胞生物學行為和患者預后提供了重要參考。

蔣暉等[10]報道，Survivin與PTEN均與細胞周期調控和細胞凋亡有關，但二者作用相反，當組織發生惡變時Survivin的表達上調，而PTEN表達下降或缺失，進而抑制血管內皮細胞和腫瘤細胞的凋亡，促進腫瘤細胞的增殖以及腫瘤血管的生成。本研究結果與文獻報道一致。因此，研究Survivin和PTEN在非小細胞肺癌中的表達及其與臨床病理因素之間的關系，將對非小細胞肺癌的早期診斷、臨床治療和預后判斷具有重要的指導意義。

[參考文獻]

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[3] Shin S，Sung BJ，Cho YS，et al. An anti-apoptosis protein human survivin is a direct inhibitor of caspase-3 and 7[J]. Biochemistry，2001， 40（4）：1117.

[4] Akyarek N，Memis L，Ekinei O，et al. Survivin expression in pre-invasive lesions and non-small cell lung carcinoma[J]. Virchows Arch，2006，449（2）：164-170.

[5] 何朗，侯梅，張杰，等. 非小細胞肺癌中survivin亞細胞定位的相關研究[J]. 癌癥，2009，28：955-960.

[6] 朱叢中，李芳，李贊，等. 非小細胞肺癌中Survivin和COX-2的表達及與肺癌發生、發展的關系[J]. 天津醫科大學學報，2010，16（3）：433-436.

[7] Ali IU，Schriml LM，Dean M，et al. Mutational spectra of PTEN/MMAC1 gene： a tumor suppressor with lipid phosphatase activity[J].Nat Cancer Inst，1999，91（22）：1922-1932.

[8] Goncharuk VN，del-Rosario A，Kren L，et al. Co-downregulation of PTEN，KAI-1，and nm-23-H1 tumor/metastasis suppressor proteins in non-small cell lung cancer[J]. Ann Diagn Pathol，2004，8（1）：6-16.

[9] Wang C，Yang R，Yue D，et al. Expression of FAK and PTEN in bronchioloalveolar carcinoma and lung adenocarcinoma[J]. Lung，2009，187（2）：104-109.

[10] 蔣暉，汪曉慶，張端蓮，等. PTEN與Survivin在人皮膚血管瘤組織中的表達及意義[J]. 華中科技大學學報（醫學版），2009，38（5）：602-607.

（收稿日期：2013-05-03）