茯苓多糖的提取技術(shù)

[中圖分類號] S-1 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1003-1650 （2013）11-0182-01

一、引言

茯苓多糖為我國傳統(tǒng)中藥茯苓的主要有效成分，具有抗腫瘤、抗病毒、增強(qiáng)機(jī)體免疫力、抗氧化、降血糖血脂、保肝、催眠等作用，可用于醫(yī)療、保健等領(lǐng)域，具有廣闊的開發(fā)應(yīng)用前景。

二、材料與方法

1.茯苓多糖的提取方法

2.均勻設(shè)計實(shí)驗(yàn)對超聲波提取茯苓多糖提取工藝

2.1器材及藥品

茯苓，數(shù)控超聲波清洗器，紫外分光光度計，電子分析天平。葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品，苯酚，濃硫酸和鋁片等。

2.2.方法

2.2.1藥材粉碎度的選擇 參照文獻(xiàn)條件，取不同粒度茯苓藥材，在乙醇濃度50%，提取溫度45℃條件下超聲提取20 min，。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，藥材粒度為20～60目時，提取時提取率較好。

2.2.2提取次數(shù)的選擇 取20～60目粒度茯苓藥材，在2.2.2.1條件下分別提取1，2，3次，結(jié)果表明，超聲波提取1次后，茯苓多糖即已提取完全。

2.2.3 茯苓提取物中多糖含量的測定方法

2.2.3.1 4%苯酚溶液的配制取苯酚100 g，加鋁片0.1 g和碳酸氫鈉0.05 g，蒸餾并收集182 ℃餾分，稱取4 g，在100 ml容量瓶加水溶解至刻度線，然后放冰箱內(nèi)冷藏備用。

2.2.3.2制備標(biāo)準(zhǔn)曲線 精密稱取置五氧化二磷減壓干燥器中干燥12 h以上的無水葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品15 mg，置25 ml容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻置室溫下（約24℃）備用（濃度為0.6 mg/ml）。精密量取對照品溶液0.0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 ml，分別置于100 ml容量瓶中，并加水至刻度，搖勻。精密量取上述各溶液2 ml，置具塞試管中，分別加入4%的苯酚溶液1 ml，混勻后迅速加入濃硫酸7.0 ml，搖勻，并于45℃水浴中保溫30 min后取出，置冰水浴中5 min后取出。然后以第1份為空白對照組，用分光光度計在490 nm的波長處測定其吸收度A，以吸光度（A）為縱坐標(biāo)，溶液濃度C為橫坐標(biāo)。統(tǒng)計，進(jìn)行線性回歸。

2.2.3.3苯酚-硫酸法測茯苓多糖含量 將各提取方法所得樣品制成1 g/ml的溶液，精密量取2 ml，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項(xiàng)下的方法，用紫外分光光度法測定其吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程中計算 出待測溶液濃度，并進(jìn)一步計算出其多糖含量（以葡萄糖量計）。

2.2.4 均勻?qū)嶒?yàn)設(shè)計及結(jié)果分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果用多元回歸處理，將實(shí)驗(yàn)結(jié)果輸入均勻設(shè)計分析軟件2.10。驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)按上述優(yōu)化的超聲提取條件，進(jìn)行3次茯苓多糖的超聲提取，結(jié)果得到優(yōu)化條件下的茯苓多糖提取率為5.58%，與回歸方程的預(yù)測值5.60%很接近，且重復(fù)實(shí)驗(yàn)相對偏差不超過2.5%，說明超聲優(yōu)化條件重復(fù)性良好。

3.茯苓多糖純化方法

3.1蛋白質(zhì)的去除方法

Severge法 根據(jù)蛋白質(zhì)在氯仿等有機(jī)溶劑中變性的特點(diǎn)，從而去除蛋白。按多糖水溶液體積的1/4～1/3加入氯仿：戊醇（正丁醇）=5∶1，劇烈振搖20～30 min，除去含有蛋白質(zhì)的氯仿和正丁醇混合液。

3.2 茯苓多糖的脫色 通常用活性炭吸附，但此法易造成多糖的損失，所以一般用弱堿性樹脂、DEAE纖維素吸附色素。通過離子交換柱不僅能達(dá)到脫色的目的，而且可以進(jìn)行分離[3]。

3.3透析除小分子雜質(zhì)透析在逆相流水中進(jìn)行，pH值保持在6.0～6.5。操作時將需要處理的茯苓多糖于雙蒸水中過夜溶脹后，置于半透膜透析袋中，雙蒸水透析，透析液濃縮后用乙醇沉淀多糖[4]。

3.4 大孔吸附樹脂純化茯苓多糖[5]應(yīng)用大孔樹脂純化茯苓多糖，取得了較好的效果。該法具有吸附量大、選擇性好、吸附速度快、易于解吸附、機(jī)械強(qiáng)度高、再生處理簡便等優(yōu)點(diǎn)。

三、結(jié)果與討論

以上實(shí)驗(yàn)考察了影響藥材有效成分提取的4個主要因素：藥材粒度、固液比、提取時間，提取次數(shù)來研究茯苓多糖的提取，并對用傳統(tǒng)加熱回流和超聲提取茯苓多糖的實(shí)驗(yàn)均進(jìn)行了最佳工藝的驗(yàn)證，并對其因素的顯著性影響進(jìn)行了分析，得到了加熱回流和超聲提取茯苓多糖的最佳工藝條件，并對它們進(jìn)行了處理，從而得到了從茯苓中提取茯苓多糖的較為理想的方法——超聲波提取法。茯苓多糖的超聲提取方法簡便，提取率高達(dá)5.58%左右，比常規(guī)提取方法的操作時間縮短10～20倍，而且多糖得率高。超聲提取天然藥物有效成分具有周期短、成本低、不破壞活性成分等顯著優(yōu)點(diǎn)，具有很好的應(yīng)用前景。

參考 文獻(xiàn)

[1]聶金媛，吳成巖，吳世容，等.微波輔助提取茯苓中茯苓多糖的研究[J].中草藥，2004，35（12）：1346.

[2]趙聲蘭，趙榮華，陳 東，等.茯苓皮中茯苓多糖的提取工藝優(yōu)化[J].時珍國醫(yī)國藥， 2006 ，17（9）：2730.

[3]王藝峰.茯苓菌核多糖及其衍生物的結(jié)構(gòu)及生物活性[DB/OL]. 武漢大學(xué)碩士論文，2004：1.

[4]陳 莉.茯苓多糖提取工藝的優(yōu)化及開發(fā)利用研究[DB/OL].貴州大學(xué)碩士論文，2007.

[5]李玲. 多糖的分離、純化與分析[J]. 新疆工學(xué)院學(xué)報， 1996，17（2）：129.