蝴蝶蘭組培快繁技術研究

摘 要：以蝴蝶蘭的花梗為外植體，研究蝴蝶蘭快繁方法。結果表明，花梗外植體在培養基MS+BA3mg/L+NAA1mg/L上培養15d后產生幼芽；叢生芽增殖的最佳培養基為MS+BA5mg/L+NAA0.1mg/L，增殖率為2.07%；生根誘導最佳培養基為1/2MS+NAA1mg/L+IBA1mg/L，生根率可達100%。

關鍵詞：蝴蝶蘭；組織培養；快速繁殖

中圖分類號 Q949.71+8.43 文獻標識碼 A 文章編號 1007-7731（2013）12-23-02

蝴蝶蘭（Phalaenopsis amabilis Bl.）是蘭科蝴蝶蘭屬多年生名貴花卉，于1750年發現，現已發現70多個原生種，原產馬來西亞等熱帶地區，大多數產于潮濕的亞洲地區，在中國臺灣和泰國、菲律賓、馬來西亞、印度尼西亞等地都有分布，其中以臺灣出產最多，因花形似蝶而得名。其株型美觀、枝葉繁茂，花朵碩大、花色鮮艷，而且花期特別長，一般為2～3個月，最長可達半年，適于家庭擺設或作切花用于花籃、花束等，在熱帶蘭中素有“蘭花皇后”的美譽，有較高的觀賞和經濟價值，深受國內外花卉市場的歡迎。但是，由于蝴蝶蘭是單莖性氣生蘭，植株很少發育側枝，很難采用常規分株方式進行無性繁殖，其種子也不含胚乳或其他組織，在自然條件下萌發率極低，因此無法利用播種方式進行有性繁殖，而采用組織培養方法進行種苗繁殖是目前蝴蝶蘭大規模生產的唯一途徑。

近年來，國內外學者對蝴蝶蘭的組織培養技術進行了大量研究，蝴蝶蘭組織培養誘導原球莖的外植體有莖尖、葉片、花梗腋芽、花梗節間切段等誘導類原球莖，進而誘導分生苗實現快繁。

蝴蝶蘭的繁育方法有2種：叢生芽和原球莖增殖。原球莖增殖容易出現變異，采用叢生芽增殖能夠很好地保持原有品種的特性，還可利用花梗腋芽、葉片等作為外植體接種在不同培養基上進行離體培養，再利用誘導產生的不定芽的莖尖進行莖尖培養，可得到大量的原球莖狀體。由于莖尖作外植體誘導原球莖誘導率高，但損傷母株，而且還會有不同程度的污染率，故利用腋芽萌發的不定芽的幼葉為外植體，雖然誘導率稍低，但大大降低了污染率。

大量研究表明，在蝴蝶蘭進行組織培養過程中，選取的外植體不同，原球莖的誘導率也有很大差異，其中幼葉、莖尖、花梗腋芽是蝴蝶蘭原球莖誘導的較佳外植體，葉片和根段的誘導效果最差。但是，采用莖尖作外植體會對植株造成損傷，因此蝴蝶蘭的組織培養通常以幼葉或花梗腋芽為外植體。蝴蝶蘭組織培養采用的基本培養基有MS、1/2MS、VW、B5、KC、花寶及其改良型等。

通過組織培養，在短期內獲得大量幼小植株，是經濟有效的快速繁殖方法，也是工廠化育苗的重要途徑。研究蝴蝶蘭快速繁殖的方法、生長發育規律及其綜合栽培技術，有利于我國花卉業向高檔次、高效益方向發展。

1 材料與方法

1.1 材料 選取白花紅心品種健壯無病蟲的帶節花梗。蝴蝶蘭組織培養的外植體有莖尖、莖段、葉片、花梗腋芽、花梗節間、根尖等，各部位均可誘導成功，只是難度高低不一。蝴蝶蘭是單莖性熱帶氣生蘭，只有1個莖尖，如果直接從開花植株取得莖尖或莖段，造成整株浪費；以葉片或根尖作外植體，材料豐富，但誘導周期長、難度大；用花梗腋芽或花梗節間作外植體，容易誘導，外植體表面滅菌成功率高，是最合適的外植體取樣部位。

1.2 方法 取材前2～3周，把母株置于溫室內培養，不要噴水。在接種前選擇健壯無病的帶節花梗剪下，用自來水沖洗干凈，將花梗剪成長約2～3cm帶腋芽的切段，用無菌吸水紙或紗布吸干水分，帶入無菌操作室按無菌操作程序進行滅菌和接種，再用70%的酒精浸30s后，在超凈工作臺上用0.1%HgCl2溶液消毒8min、12min、16min，無菌水沖洗4～5次，切取帶1～2個芽點的花梗接種于MS+BA3的培養基上，可用腋芽萌發為叢生芽。初代培養誘導溫度為25～28℃，光照以1 800～2 200lx為宜。20d后統計不同時間處理對外植體污染率及死亡率的影響。

外植體的誘導與繼代增殖均以MS為基本培養基，在繼代增殖過程中附加不同濃度BA、NAA的激素配比；生根培養設置了1/2MS、1/3MS、1/4MS處理，同時附加香蕉泥100g/L，活性炭1g/L和不同濃度的NAA、IBA。所有培養基均添加蔗糖25g/L或30g/L；瓊脂6g/L；pH5.3。培養溫度25～27℃；每天光照10～16h；光照強度為1 500lx。

2 結果與分析

2.1 不同消毒時間對無菌體系建立的影響 從表1可以看出，蝴蝶蘭外植體隨消毒時間的延長，污染率得到了有效的控制，在12～16min內，可將污染率控制在10%～20%，成功率達60%。但同時，外植體死亡率也不斷增加，其中16min的死亡率高達60%，而8min的死亡率僅為10%。綜上所述，筆者認為，蝴蝶蘭外植體以12min的消毒時間最佳。

2.2 花梗腋芽的培養 將消毒好的外植體切成帶1～2個芽點的花梗接在啟動培養基MS+BA3mg/L+NAA1mg/L+蔗糖30g/L上進行培養。花梗側芽在此培養基上培養7～10d后腋芽突起膨大，經過15d后腋芽萌發，可達1cm以上的不定芽。

2.3 不同BA濃度對叢生芽增殖的影響 叢生芽的分化與增殖是實現蝴蝶蘭工廠化的關鍵。在一定范圍內，不同激素組合可使誘導出來的腋芽分化成叢生芽。在試驗過程中筆者觀察到NAA的誘導率比IAA、IBA高，BA的誘導率比KT高。從表2可以看出，增殖率隨著BA濃度的上升而增加，但是，BA濃度并非越高越好，高濃度的BA會使芽長勢細弱。本試驗的最佳分化培養基為MS+BA5mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L。

2.4 不同無機鹽的營養對生根的影響 影響蝴蝶蘭無根苗生根的重要因素是無機營養元素。本試驗比較了1/2MS、1/3MS和1/4MS等處理，結果見表3。無機營養較多的生根率明顯高于含量較低的處理；另外，生根壯苗需要較豐富的碳水化合物，因而蔗糖濃度對生根有顯著影響，生根率隨蔗糖濃度的提高而升高，同時添加香蕉泥提高了培養基總糖含量，從而也可以提高生根率并促進生根苗的生長。本試驗的最佳生根培養基為1/2MS+NAA1mg/L+IBA1mg/L+蔗糖25g/L，生根率可達100%。

2.5 試管苗的移栽 當試管苗具有3～4片葉、2～3條粗壯的根時，即可進行移栽。南方地區可在3～10月進行，以4～6月或9～10月移栽效果為好。先將試管苗移出實驗室，打開瓶蓋，放置于通風、明亮的常溫房間煉苗，每天早、中、晚各噴水1次，保證足夠的濕度。3d以后，用鑷子將小苗輕輕夾出培養瓶，洗凈根部附著的培養基。可先用1 500倍的多菌靈藥液浸泡5～10min，然后種植于椰糠基質中，環境溫度保持25～28℃，濕度保持在80%～90%，防陽光直射。當新葉長出、新根伸長時，每周1次葉面噴施0.3%～0.5%KH2PO4，成苗率可達65%以上。

3 結論

在本試驗中，蝴蝶蘭外植體無菌體系的建立取決于消毒時間，8min與16min的消毒效果都不甚理想，而以12min的成功率較高。隨著消毒時間的延長，外植體死亡數也不斷增加，說明長時間用升汞作為消毒劑對蝴蝶蘭幼嫩莖段有很強的殺傷力。

由于蝴蝶蘭這個名貴品種對移栽環境要求的特殊性，因此，迄今為止，筆者仍未能獲得蝴蝶蘭試管苗移栽較為成功的經驗。對于其移栽試驗還有待于進一步的研究與探討。

參考文獻

[1]劉青林，馬祎，鄭玉梅，等.花卉的組織培養[M].北京：中國農業出版社，2002.

[2]韋三立.花卉組織培養[M].北京：中國林業出版社，2000.

（責編：徐世紅）