網箱養殖條件下黃鱔性腺發育的研究

摘要：對網箱養殖條件下黃鱔（Monasteries albus）性腺發育進行研究。結果表明，在網箱養殖條件下，黃鱔性腺發育過程可分為雌性、間性、雄性3個階段。卵巢發育分為Ⅰ～Ⅵ期；間性性腺發育分為間性Ⅰ期和間性Ⅱ期；精巢發育分為Ⅰ～Ⅵ期。各期性腺主要包含對應時相的生殖細胞，也有其他時相生殖細胞存在，生殖細胞的發育速度并不一致。

關鍵詞：黃鱔（Monasteries albus）；網箱養殖；性腺發育

中圖分類號：S917.4 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2013）13-3095-04

黃鱔（Monasteries albus）是中國重要的經濟魚類之一，因其肉味鮮美、營養價值高而深受廣大消費者歡迎。近年來由于過度捕撈而導致黃鱔資源瀕臨枯竭。為了解決苗種缺乏問題，黃鱔人工繁殖成了近年來研究的熱點。有些學者對野生和養殖池內黃鱔性腺發育進行了研究，發現了完整的性腺發育過程，并對其進行了分期[1-8]。Brown等[9]、邴旭文等[8，10]認為黃鱔在高密度群棲狀態下，受食物資源和所受空間的影響導致性腺常停止發育。目前還無人對網箱養殖條件下黃鱔性腺發育進行研究，本研究對網箱養殖條件下黃鱔性腺發育過程進行研究，以期在網箱養殖條件下獲得大量高質量的黃鱔繁殖親本，為解決黃鱔人工繁殖提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗設施概況

選取湖北省漢川市刁汊湖漁場池塘為試驗基地。該池塘呈長方形，池底平坦，水源充足，水質清新，排灌方便，四周無高大的樹木。放養前每1 000 m2用225 kg生石灰干法清塘，然后暴曬7～10 d。網箱規格3.0 m×1.0 m×1.2 m和2.0 m×1.0 m×1.2 m，前者為30目、后者為60目聚乙烯無結節網片加工而成，用毛竹固定于池塘中，網箱底部距池底0.5 m，上口高出水面0.4 m，前者設置42個網箱，后者設置3個網箱，網箱之間的間距為1.0 m。放苗前15 d設置水花生作為黃鱔的棲息巢，水花生的種植面積為網箱的2/3左右。

1.2 試驗動物及分組

試驗黃鱔一部分購自湖北省漢川市刁汊湖周邊市場，選取規格一致、體格健壯的黃鱔1 440尾，體長25.2～38.5 cm，體重26.8～57.5 g；另一部分來自試驗網箱內繁殖出的仔、幼鱔。

試驗分為兩組：一組是購自刁汊湖周邊市場的黃鱔，共42個網箱，每個網箱30尾黃鱔；另一組是試驗網箱內繁殖出的仔、幼鱔，共3個網箱，每個網箱40尾黃鱔。

1.3 試驗飼料

飼料（表1）由魚粉、NP-90噴霧干燥血球蛋白粉、魷臟粉、豆粕粉、酵母粉、多維、多礦、淀粉（所有原料均由武漢高龍飼料有限公司提供）等配制而成，配制方法采用等能不等氮法（以魚粉、魷臟粉、酵母粉、豆粕作為蛋白源，配制成蛋白質含量35%的飼料）。

1.4 飼養管理

試驗從2006年7月至2007年6月，每天下午6點左右投喂飼料1次，按體重的3%～5%將飼料投放于水草表面，具體投喂量根據天氣變化和實際攝食情況而定。投喂飼料后，每隔20 min觀察一次攝食情況，不夠則繼續加投，直至最后兩次觀察發現池內飼料不再減少為止，此時認為魚已飽食，然后取出殘餌烘干后稱重。每天早、中、晚各測量一次水溫，并觀察黃鱔活動情況。每周測量一次水體pH，每個月用滅毒靈對整個池塘消毒一次。

1.5 取樣并制作性腺切片

每月30日定時進行取樣，從每個網箱隨機取出3尾黃鱔，取樣時在網箱投放誘捕黃鱔的籠子以避免黃鱔受傷。測量體長并稱重后進行解剖取性腺，將性腺固定于Bouin氏液。制作常規石蠟切片進行HE染色，光學顯微鏡觀察并記錄結果。根據黃鱔性腺在不同時期的發育特點，結合顯微鏡觀察結果，對各樣品性腺進行分期鑒定。

2 結果與分析

通過對黃鱔性腺切片觀察，網箱養殖條件下黃鱔的性腺發育可分為雌性、間性和雄性3個階段。

2.1 雌性卵巢發育時期

根據雌性生殖細胞的發育情況，網箱養殖條件下黃鱔雌性卵巢發育可分為6個時期：

Ⅰ期卵巢：多見于1～2月齡的仔、幼鱔。卵巢不明顯，接近透明，呈細線狀。細胞以Ⅰ時相卵母細胞為主，結締組織較少，卵母細胞外有一層很薄的濾泡細胞。細胞呈卵圓形，直徑僅為11～18 μm，細胞核可見，細胞質很少。Ⅰ時相卵母細胞為處于卵原細胞階段或由卵原細胞向卵母細胞過渡階段（圖1A）。

Ⅱ期卵巢：多見于3～4月齡的幼鱔。卵巢乳白色，呈線狀。肉眼不見卵粒， 充滿Ⅱ時相母細胞。細胞呈卵圓形，直徑為120～280 μm，細胞體積較Ⅰ時相明顯增大，細胞核相應增大，核仁數增加，靠近核膜內側分布。細胞質為嗜堿性，大部分卵母細胞外面有一層濾泡細胞（圖1B）。

Ⅲ期卵巢：多見于5～9月齡的幼鱔和已產卵的親鱔。卵巢呈棒狀，肉眼可看見淡黃色的小卵粒。卵巢內有Ⅱ時相和Ⅲ時相卵母細胞，細胞呈卵圓形，直徑為270～490 μm。細胞質為嗜堿性，含有豐富的細胞器和小卵黃泡，大部分核仁分布在核膜邊緣，部分核膜出現皺褶。大部分細胞內出現內外兩層濾泡膜（圖1C）。

Ⅳ期卵巢：多見于3～5月齡的幼鱔和已產卵的親鱔。肉眼可見大小不等的橙黃色、淡黃色卵粒。Ⅳ時相卵母細胞占較大比例，Ⅱ時相、Ⅲ時相卵母細胞也可見。細胞呈卵圓形，直徑為860～1 650 μm，細胞體積較Ⅲ時相明顯增大，卵黃顆粒較多，幾乎充滿核外空間。細胞質為嗜堿性，多分布于核周圍和卵膜邊緣，細胞核的位置由中央向邊緣移動。細胞內有內外兩層濾泡膜，外層由扁平狀的濾泡細胞組成，內層為顆粒狀濾泡細胞。Ⅳ時相卵母細胞為處于發育晚期的卵母細胞（圖1D）。

Ⅴ期卵巢：多見于5～8月齡的幼鱔和已產卵的親鱔。Ⅴ時相卵母細胞已經排入卵巢包膜中，卵巢包膜里充滿橙黃色的大卵粒，擠壓黃鱔腹部即有成熟卵子流出，卵巢里Ⅱ時相、Ⅲ時相和Ⅳ時相卵母細胞均可見。細胞呈卵圓形，直徑為3 150～3 900 μm。細胞質中充滿粗大卵黃顆粒，它們在成熟的過程中融合成塊狀，在細胞質的邊緣仍有濾泡，卵子外只有一層增厚的放射膜包圍。此時卵粒已成熟離巢，游離在卵巢包膜內。Ⅴ時相卵母細胞為處于發育轉折階段的卵母細胞（圖1E）。

Ⅵ期卵巢： 多見于5～8月齡產卵后的親鱔。為剛產過卵退化時期的卵巢，結構較疏松。其中以已經排出卵的空濾泡膜和敗育的卵母細胞為主，Ⅱ時相、Ⅲ時相、Ⅳ時相卵母細胞和未排出的Ⅴ時相卵母細胞有時也可見。細胞逐漸萎縮，部分細胞核膜溶解，核物質散布于細胞質中，液化的卵黃物質呈團塊狀分散于性腺囊腔內（圖1F）。

2.2 間性性腺發育時期

黃鱔在排卵或產卵后，雌性生殖細胞逐漸敗育，與此同時原始精原細胞生長發育，進入雌性生殖細胞和雄性生殖細胞共存的間性發育階段。根據性腺里這兩種生殖細胞的發育狀況，網箱養殖條件下黃鱔的間性性腺發育可分為2個時期。

間性Ⅰ期：性腺呈白色長條狀，肉眼不見卵粒。性腺內未見Ⅳ時相和敗育的卵母細胞，只有一些Ⅱ時相、Ⅲ時相卵母細胞以及部分濾泡細胞，卵母細胞的細胞器也較少，在性腺的結締組織中可觀察到少量的精原細胞（圖2A）。

間性Ⅱ期：性腺呈白色長條狀，肉眼不見卵粒。性腺內只有少量Ⅱ時相卵母細胞，其細胞核已發生偏位，核膜不清晰，部分核仁解體或空泡化，有核仁外排現象。精原細胞發育形成精小囊，精小囊多分布在結締組織間隙中，有的精小囊內的生精細胞已發育為初級精母細胞（圖2B）。

2.3 雄性精巢發育時期

根據雄性生殖細胞的發育情況，網箱養殖條件下黃鱔的雄性精巢發育可分為6個時期：

Ⅰ期精巢：多見于1～2月齡，精小囊已開始發育，由精小囊組成的精小葉還比較小。精小囊內以精原細胞為主，有的已發育為初級精母細胞，另外在精小葉之間還有部分結締組織（圖3A）。

Ⅱ期精巢：多見于3月齡，精小葉數量增多，同時直徑也增大，有些精小葉中出現小腔隙，精小葉內除少量精原細胞外，主要為初級精母細胞（圖3B）。

Ⅲ期精巢： 多見于3～4月齡，精小葉數量較多，遍布于整個精巢，精原細胞多分布于精小葉邊緣，各精小葉間的結締組織中可看見微血管和部分細胞核；精巢內出現少量小的管腔，精小葉中以初級精母細胞和次級精母細胞為主（圖3C）。

Ⅳ期精巢： 多見于4～5月齡，精小葉中初級精母細胞減少，次級精母細胞經第二次成熟分裂發育為精子細胞（圖3D）。

Ⅴ期精巢： 多見于 5～6月齡，有些精小囊已經發育成熟，它們之間的隔膜消失，形成大的管腔，成熟的精子聚集于管腔內，但部分精小囊仍由精子細胞組成。精原細胞數量較少，零星分布于精小葉壁。同時精巢內空腔增多，并且在這些空腔內，大多數都可觀察到成熟精子（圖3E）。

Ⅵ期精巢： 多見于6月，為排精后精巢，精巢內空腔較Ⅴ期減少，有的管腔中還殘存少量精子。空管腔四周的管壁上精原細胞數目增多，有的已形成精小囊（圖3F）。

3 小結與討論

3.1 關于網箱養殖條件下黃鱔的性腺發育及特點

本研究首次對網箱養殖條件下黃鱔性腺發育進行了研究，結果表明黃鱔性腺有著完整的發育過程，其發育正常，黃鱔的性腺發育有著明顯的性逆轉特征，可分為雌性、間性、雄性3個階段。

3.2 人工養殖密度對性腺發育的影響

網箱養殖條件下黃鱔屬于高密度群棲環境，其性腺有著完整的發育過程，并沒有停止發育，在繁殖期其性腺也能夠正常發育成熟，表明網箱養殖條件下高密度并沒有成為黃鱔性腺發育的制約因子。這一研究結果為解決黃鱔人工繁殖的瓶頸問題，即獲得大批量、高質量的黃鱔成熟親本提供了極其寶貴的科學參考資料。

參考文獻：

[1] 周定剛，譚永洪，付天佑.黃鱔卵巢發育的研究[J].水生生物學報，1992，16（4）：361-367.

[2] 周定剛，譚永洪，曹五七，等.黃鱔精巢發育的周年變化[J].四川農業大學學報，2002，20（3）：256-261.

[3] 張小雪，董元凱.黃鱔精巢顯微和超微結構的研究[J].水利漁業，1994（4）：9-11.

[4] 肖亞梅.黃鱔繁殖生物學研究：Ⅱ.黃鱔的雌性發育[J].湖南師范大學（自然科學學報），1995，18（4）：45-51.

[5] 肖亞梅，劉 筠.黃鱔由間性發育轉變為雄性發育的細胞生物學研究[J].水產學報，1995，19（4）：297-304.

[6] 楊代勤，陳 芳，劉百韜，等.黃鱔產卵類型及繁殖力的研究[J].湖北農學院學報，1994，14（3）：40-44.

[7] 尹紹武，周工健，劉 筠.黃鱔的繁殖生態學研究[J].生態學報，2005，25（3）：435-440.

[8] 邴旭文.模仿自然繁殖條件下的黃鱔人工繁殖試驗[J].水產學報，2005，29（2）：285-288.

[9] BROWN C， LALAND K N. Social learning in fishes： A review[J].Fish and Fisheries，2003，4（3）：280-288.

[10] 邴旭文，徐 跑.黃鱔生態繁殖技術的研究[J]. 經濟動物學報，2003，7（3）：46-48.