甲醛對小鼠造血功能影響的試驗研究

摘要：為了探討甲醛對小鼠造血功能的影響，將昆明小鼠30只隨機分為5組，分別為低、中、高濃度甲醛組，鹽酸苯肼試驗組和空白對照組，試驗期間連續腹腔用藥，第二天起每天檢測紅細胞數量、白細胞數量、血紅蛋白含量以及網織紅細胞比例等參數的改變，試驗第十天檢測后處死小鼠取肝臟和骨髓常規石蠟切片HE染色。結果表明，用藥第二天小鼠即出現溶血現象，第八天時，與空白對照組相比高濃度組小鼠紅細胞數量降低了32.47%，血紅蛋白含量降低了44.14%，網織紅細胞比例高達22.86%；肝臟、骨髓切片可見較多破壞的紅細胞。甲醛對小鼠有致溶血作用，能嚴重影響小鼠的造血功能。

關鍵詞：小鼠；甲醛；鹽酸苯肼；造血功能

中圖分類號：TS201.6 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2013）16-3905-03

隨著人們對居室環境的重視程度越來越高，家居裝修也越來越受到重視，甲醛作為室內裝飾材料中普遍存在的物質，家居裝修材料中的甲醛含量超標會嚴重危害人們的身體健康[1-6]。本試驗以昆明小鼠為試驗對象，采用低、中、高濃度甲醛進行試驗，研究了甲醛對小鼠造血功能的影響，以便為提高人們在日常生活中的防護能力和臨床診治相關的溶血性疾病提供一定的理論支持。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 試驗動物 試驗動物采用出生后8周齡的昆明小鼠30只，體重25 g左右，由濰坊學院實驗動物中心提供，雌雄不限，正常喂食。

1.1.2 藥品與試劑

主要藥品：甲醛、鹽酸苯肼，由上海國藥集團化學試劑有限公司提供。

主要試劑：10 g/L煌焦油藍乙醇溶液、HiCN轉化液均按照常規方法配制；Hayem液、白細胞稀釋液、0.1 mol/L鹽酸、10 mg/mL甲醛、1 mg/mL鹽酸苯肼生理鹽水液現配現用；石蠟制片HE染色各種試劑均常規配制使用。

1.2 試驗方法

1.2.1 藥物注射 參考甲醛、鹽酸苯肼的毒理作用確定用量[7]，腹腔注射，低、中、高濃度組10 mg/mL甲醛用量分別為1、2、3 mL/kg體重，鹽酸苯肼每天注射5 mL/kg體重，首日加倍10 mL/kg，空白對照組注射生理鹽水，0.1 mL/只。

1.2.2 檢測方法 血常規檢測采用常規方法[8，9]，處理后次日開始每組每天隨機取1只斷尾采血1次。

紅細胞和白細胞采用改良Neubauer計數板計數，紅細胞計數時采用Hayem稀釋液，白細胞稀釋液采用1%龍膽紫染色；血紅蛋白含量的測定使用HiCN轉化液，用TU-1800PC型紫外可見分光光度計測定吸光度；網織紅細胞比例的測定用10 g/L煌焦油藍乙醇溶液為染料，制成血涂片后在低倍鏡下選擇紅細胞分布均勻的部位于油鏡下計數1 000個紅細胞中的網織紅細胞并換算為百分比[10]。

石蠟制片染色方法：處死小鼠后取小塊肝臟組織迅速固定于中性甲醛，常規脫水、浸蠟制片，HE染色后高倍鏡觀察；切斷小鼠股骨兩端使用注射器沖洗出骨髓，參照上法固定制片，HE染色觀察。

2 結果與分析

結果顯示，甲醛能促進紅細胞溶解，小鼠表現典型的急性溶血性貧血癥狀，循環血中網織紅細胞明顯增多，骨髓片中紅細胞碎片增多（圖1），肝臟中央靜脈見大小不等的紅細胞，周圍白細胞浸潤明顯（圖2）。

鏡下可見紅細胞形態改變以及較多紅細胞碎片。中央靜脈內可見大小不等的成熟紅細胞（粗↑），周圍的炎性細胞（細↑）增多。

試驗小鼠各項血液學指標也有較大變化，檢測結果見表1。用藥第二天小鼠即出現溶血現象，在第八天時，與空白對照組相比，高濃度組小鼠紅細胞數量降低了32.47%。

血液中血紅蛋白的含量在一定程度上反映了紅細胞數量，表2中血紅蛋白含量的變化與表1中紅細胞數量變化趨勢相同，在第八天時，與空白對照組相比，高濃度組小鼠血紅蛋白含量降低了44.14%。總體上是隨甲醛劑量的增加而減少。

由表3可知，使用鹽酸苯肼或甲醛后白細胞的數量是明顯增加了，這可能是由于甲醛、鹽酸苯肼的毒理作用，注射后引發炎癥，導致組織發生一系列炎性反應，表現為血液中的白細胞數目增多。

由表4可知，使用甲醛后隨注射劑量的增加和時間的推移，網織紅細胞的比例逐漸升高。在第八天時，高濃度組網織紅細胞比例高達22.86%，這是因為循環血紅細胞數量減少、血紅蛋白含量降低時，機體的代償性反應使骨髓中幼稚的紅細胞提前進入血液循環，表現為血液中網織紅細胞比例增加[11]。

3 小結與討論

甲醛的用途非常廣泛，塑料、橡膠、造紙、紡織、制藥以及建筑材料和消毒、防腐過程中均要用到甲醛，各種人造板材中也含有甲醛，因此新裝修的房間總會有甲醛釋放，長期接觸低劑量甲醛可引起慢性呼吸道疾病、女性月經紊亂等，也可使新生兒體質降低、染色體異常，高濃度甲醛對神經系統、免疫系統、肝臟等都有毒害作用[12]。國際癌癥研究機構IARC已經于2004年將甲醛上升為第一類致癌物質，有足夠的證據可以證明甲醛能引起人類的鼻咽癌、鼻腔癌和鼻竇癌，并能引發白血病。

試驗表明，甲醛能使動物骨髓、肝臟等器官內紅細胞破裂，紅細胞碎片增加，造成動物急性溶血性貧血，溶血的程度與注入的劑量呈正相關，但溶血程度較鹽酸苯肼弱。其原因是甲醛可破壞紅細胞膜的穩定性，促使紅細胞崩潰，造成溶血性貧血，因此外周血中紅細胞數量降低，血紅蛋白含量隨之減少，加快了未成熟網織紅細胞進入血液循環的速度，結果使血液中的網織紅細胞數量迅速增加。同時，中等濃度甲醛組小鼠在第七天、高濃度甲醛在第四天、第七天、第九天各有1只小鼠死亡，其他試驗組小鼠也出現不同程度的腹部塌陷、變硬等癥狀，急性中毒作用明顯。

有相關調查資料顯示，室內空氣污染已經成為危害城鎮居民生命健康的一大“ 隱形殺手”，目前中國4%的疾病與居室污染有關，每年有11.1萬人死于室內污染，而新裝修家庭中甲醛已成為主要的污染物[13，14]。本試驗即基于此對比觀察研究甲醛對小鼠造血功能的影響，并初步觀察了造血器官骨髓及肝臟內紅細胞的形態學改變，以期提高人們在日常生活中的防護意識和能力，為臨床診治相關的疾病提供一定的試驗支持。

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