殼聚糖酶的分離純化及性質研究

摘要：利用芽孢桿菌（Bacillus sp.）Yg菌株發酵產殼聚糖酶，采用分段醇析法分離純化發酵產物，通過不連續SDS-PAGE法測定殼聚糖酶相對分子質量。結果表明，發酵產物先用體積分數40%的乙醇初步醇析，離心去除沉淀，而后加乙醇至體積分數為60%再次醇析，所得沉淀冷凍干燥即為殼聚糖酶，所得酶的回收率和純度均較高。所得殼聚糖酶的相對分子質量約為41.7 ku，最適反應溫度為45 ℃，最佳反應pH為5.5。該酶在4 ℃條件下保存穩定性較好，在65 ℃及以上溫度下短時間內即全部失活。

關鍵詞：殼聚糖酶；發酵；純化；酶活力；穩定性

中圖分類號：TQ925+9 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2013）15-3647-03

殼寡糖為殼聚糖降解產物，具有水溶性好、易吸收、無毒、無變異性的特性，具有很高的生物活性，應用領域廣泛[1，2]。殼聚糖酶是專一性水解殼聚糖生成殼寡糖的酶，殼聚糖酶水解法是目前制備殼寡糖的最佳方法[3]。我國目前還沒有自主研發的殼聚糖酶制品，殼聚糖酶的研究與開發利用已成為我國殼寡糖生產和應用的關鍵與瓶頸。本研究利用前期自行分離獲得的產殼聚糖酶芽孢桿菌（Bacillus sp.）Yg菌株發酵產殼聚糖酶，對產物進行分離、純化，并對殼聚糖酶的相關性質進行了研究。

1 材料與方法

1.1 材料

芽孢桿菌Yg菌株由廊坊師范學院生命科學學院提供。殼聚糖（脫乙酰度>80%，國藥集團化學試劑有限公司）。Marker：MBP-[3-galactosidase（175 ku）、MBP-CBD（62 ku）、Triosephosphate isomerase（32.5 ku）、β-Lactoglobulin A（25 ku）。丙烯酰胺、亞甲基雙丙烯酰胺、Tris、甘氨酸、十二烷基磺酸鈉（SDS）、β-巰基乙醇、溴酚藍、過硫酸銨、考馬斯亮藍R-250、無水乙醇、冰醋酸均為分析純。

1.2 方法

1.2.1 粗酶液制備……