廣斧螳卵鞘水提物對非酒精性脂肪肝小鼠的影響

摘要：為了研究廣斧螳（Hierodula patellifera ootheca）卵鞘防治脂肪肝的作用，將56只小鼠隨機分為5個組，正常組、模型組、高劑量組、中劑量組、低劑量組，30 d后測定血清總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）；制備肝勻漿并測定肝臟TC、TG；取肝臟，稱濕重，計算其肝指數。結果表明，與正常組相比較，模型組動物血清TC、TG顯著降低，肝指數極顯著增加（P<0.01），卵鞘水提物可顯著降低該脂肪肝模型小鼠肝臟TC、TG，與模型組比較有顯著差異（P<0.05）；但卵鞘水提物對該脂肪肝模型小鼠血清TG無明顯影響。廣斧螳卵鞘水提物具有治療小鼠非酒精性脂肪肝的作用，其作用機制與降低肝臟TC、TG有關。

關鍵詞：廣斧螳（Hierodula patellifera ootheca）卵鞘；水提物；非酒精性脂肪肝；肝指數；膽固醇；甘油三酯

中圖分類號：Q485 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2013）15-3550-03

廣斧螳[1]（Hierodula patellifera ootheca）為藥食兩用昆蟲，其蟲體衍生物卵鞘可入藥，是醫學上比較重要的中藥[2]。卵鞘入藥性平、味甘咸、入肝、腎經，具有補腎、助陽、固精、縮尿等功能[3]；主治腎陽不足、遺精、陽痿、早泄、白濁、赤白帶下、小便頻數、遺尿等癥狀[4，5]。脂肪肝的病變主體在肝小葉，以肝細胞彌漫性脂肪變性為主要病理改變[6]。非酒精性脂肪肝更為復雜化，包括“二次打擊”因素，從而導致炎癥反應和肝纖維化發生[7]。在治療該病征時，大多用植物藥極少用動物藥，利用昆蟲衍生物入藥的甚少[8]。本研究以廣斧螳的衍生物，即其卵鞘單味劑入藥，觀察廣斧螳卵鞘水提物對非酒精性脂肪肝小鼠血液及肝組織的干預作用，探討了其對非酒精性脂肪肝的治療效果。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 原料 藥物（廣斧螳卵鞘）：秋季野外采捕雌性廣斧螳回室內產卵收集，或從貴州省貴陽市中藥材市場采購鑒定為昆蟲綱直翅目螳科斧螳屬（Hierodula Burmeister）廣斧螳的卵鞘。80～100 ℃鼓風烘烤4 h，打粉過80目篩，取藥材粉末5 g，其余藥材粉末封裝好后置于-80 ℃冰箱備用。參照國標GB/T 5009.6-2003，采用索氏提取法提取[9]，再用旋轉蒸發儀濃縮成1 g/mL的原藥液存入4 ℃冰箱保存，待測時用去離子水稀釋成8%、4%、0.8%的灌胃藥液。

試驗動物：昆明種小鼠56只，清潔級，雌雄各半，體重18～22 g，購自重慶市滕鑫實驗動物有限公司，動物合格證號：Scxk（渝）2007-0006。

1.1.2 主要試劑 膽固醇，膽酸鈉，丙基硫氧嘧啶，TC試劑盒，TG試劑盒，CCl4，異丙醇，蔗糖（購自附近超市散稱白砂糖），豬油（購自附近農貿市場，經煉制后使用），福爾馬林，石蠟，二甲苯，無水乙醇，蘇木精，加拿大樹膠等。

1.1.3 試驗儀器 酶標儀（德國萊卡，Leica），R-201型旋轉蒸發儀，高速萬能粉碎機，超低溫冰箱，索氏提取儀，202型電熱恒溫干燥箱，超純水儀（美國頗爾，Pall），冷凍離心機（美國西格瑪，Sigma），2084型激光掃描共聚焦顯微鏡，移液器（德國，Eppendorf），80目篩，手術刀，止血鉗，蠟盤，眼科剪，固定針，研缽等。

1.2 方法

脂肪肝動物模型造模方法按參考文獻[10]，略加修改。配制復方高脂飼料：2%膽固醇+0.5%膽酸鈉+0.2%丙基硫氧嘧啶+5%蔗糖（高溫下轉化為焦糖后使用）+10%豬油+82.3%基礎飼料，由貴州大學昆蟲研究所實驗室自行配制生產。

56只小鼠隨機分為5個組，正常組、模型組、高劑量組、中劑量組、低劑量組，試驗前適應環境3 d，自由飲水，取食基礎飼料。其中，正常組：常規方法飼養30 d；模型組：復方高脂飼料+5% CCl4 0.2 mL/（次·d）飼養15 d，第16天采用常規飼養方法，常規飼養15 d。高劑量組：在模型組基礎上第16天灌胃卵鞘水提物833.3 mg/（kg·d）；中劑量組：在模型組基礎上第16天灌胃卵鞘水提物416.7 mg/（kg·d）；低劑量組：在模型組基礎上第16天灌胃卵鞘水提物83.3 mg/（kg·d）。高、中、低劑量組灌胃卵鞘水提物治療15 d，并常規飼養15 d。

動物處死前禁食12 h，稱體重，尾部取血，若有渾濁則離心（3 500 r/min，10 min），取上清液用生理鹽水稀釋成不同濃度，用酶標儀測定TC、TG。處死小鼠，迅速剪開腹腔并觀察肝臟形態。取出完整肝臟，用濾紙吸干表面水分后稱重，計算肝指數，肝指數=肝臟重量（g）/體重（g）×100。完整分離肝臟左葉用10%福爾馬林溶液固定以做病理組織切片，切片用激光掃描共聚焦顯微鏡觀察[11]。完整分離肝臟中葉，剪取100 mg，取肝臟組織加9倍體積的異丙醇，在冰水中研磨成10%的肝勻漿，4 ℃提取24 h，

3 000 r/min離心10 min，提取上清液，用酶標儀測定TC、TG。多余肝臟組織于-70 ℃冰箱保存。

2 結果與分析

2.1 肝臟形態學及切片觀察

正常組小鼠肝臟顏色紅潤，表面光滑，邊緣銳利，包膜完整，質地柔軟。模型組小鼠肝臟顏色呈黃褐色，肝臟腫大，包膜緊張，有白色脂滴分布，表面有較多顆粒狀突起均勻分布。低劑量組在形態學上與模型組相似。中劑量組、高劑量組小鼠肝臟色澤較為紅潤，肝臟大小及質地較低劑量組有進一步改善，有較小白色脂滴分布，且有少量顆粒狀突起存在，如圖1所示[11]。

2.2 廣斧螳卵鞘水提物對非酒精性脂肪肝小鼠肝指數和體重的影響

由表1可知，正常組小鼠肝臟質量為（1.816± 0.336） g，肝指數4.417±0.693；模型組肝臟質量為（2.820±0.374） g，肝指數7.202±0.985。小鼠經CCl4注射加復合高脂飲食后肝臟質量增加，肝指數升高，廣斧螳卵鞘水提物低劑量可以極顯著降低小鼠的肝指數（P<0.01），中劑量組可以顯著降低該組小鼠的肝質量和肝指數（P<0.05），高劑量組也有降低肝質量和肝指數的趨勢，但與模型組比較無統計學差異。對給藥過程中小鼠的體重變化進行顯著性分析，結果表明，廣斧螳卵鞘水提物劑量的高低與小鼠給藥前后體重存在線性相關關系，但沒有顯著差異，即廣斧螳卵鞘水提物劑量的高低對小鼠體重無顯著影響。

2.3 廣斧螳卵鞘水提物對非酒精性脂肪肝小鼠血清TC、TG的影響

由表2可知，健康小鼠在注射5% CCl4溶液0.2 mL/（次·d）加復合高脂飼料后，其血清TC和TG極顯著降低（P<0.01），分別從（3.330±0.010） mmol/L降到（1.630±0.030） mmol/L和從（2.88±0.89） mmol/L降到（1.05±0.29） mmol/L。廣斧螳卵鞘水提物有恢復非酒精性脂肪肝小鼠血清TC的作用。而高、中、低劑量組對非酒精性脂肪肝小鼠血清的TG無明顯影響。

2.4 廣斧螳卵鞘水提物對非酒精性脂肪肝小鼠肝臟TC、TG的影響

由表3可知，健康小鼠在注射5% CCl4溶液0.2 mL/（次·d）加復合高脂飼料后，其肝臟TC和TG有所升高，分別從（0.046±0.001） mmol/L升高到（1.126±0.002） mmol/L和從（1.821±0.087） mmol/L升高到（3.776±0.125） mmol/L。廣斧螳卵鞘水提物高劑量組對降低該模型小鼠肝臟TG有顯著作用（P<0.05）。廣斧螳卵鞘水提物的高、中劑量組對降低模型組小鼠肝臟TC有顯著作用（P<0.05）。廣斧螳卵鞘水提物的低劑量組的TG、TC較模型組無統計學差異。

3 小結與討論

一個健康肝臟的總脂肪含量約占肝濕重的5%，其中包括磷脂、甘油三酯、游離脂肪酸、膽固醇及膽固醇酯等，如果肝細胞內脂肪蓄積超過肝濕重的5%即稱為脂肪肝病FLD[12]。而非酒精性脂肪肝病（Nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD）包括單純性脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎和肝硬化一系列改變[7]。目前已成為常見慢性肝病，病變主體在肝小葉，以大泡性為主的肝細胞脂肪變性為病理特征的臨床綜合征[13]。

桑螵蛸為常用動物藥，系螳螂科多種昆蟲的卵鞘，具有益腎、澀精、縮尿等功效[14]。《中華人民共和國藥典》1990年版規定桑螵蛸的商品分為團螵蛸、長螵蛸和黑螵蛸3種。廣斧螳卵鞘為黑螵蛸品種，3種桑螵蛸的酪氨酸含量均偏高，而在人體中酪氨酸酶催化酪氨酸合成L-多巴，因此，在抗氧化、精神調節、增強皮膚保護功能方面具有重要的作用[15]。許益民等[16]以薄層比色法測定出桑螵蛸（未指明屬何種）中含有7種磷脂。磷脂是構成血球及其他細胞膜的重要物質，可用來治療急慢性肝炎、肝硬變及脂肪肝，減輕動脈粥樣硬化等，并有促進代謝和紅細胞發育的作用[17]，這些提示廣斧螳卵鞘具有潛在的治療非酒精性脂肪肝的作用。

本研究首次觀測了在用單味卵鞘灌胃后，復合高脂飼料加CCl4致非酒精性脂肪肝模型小鼠在體重、肝指、肝臟生理指標以及一般狀況方面的變化，從而評定單味廣斧螳卵鞘水提物對非酒精性脂肪肝小鼠模型的功能。試驗結果表明，廣斧螳卵鞘水提物能夠有效緩減非酒精性脂肪肝的病變，具有降低模型小鼠肝臟TC、TG的功效。

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