高效液相色譜法測定鹽酸納洛酮注射液的有關物質研究

摘要：目的 探討應用高效液相色譜法（HPLC）測定鹽酸納洛酮注射液的有關物質。方法 采用自身對照法。色譜柱為C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），流動相為1-辛烷磺酸鈉溶液與甲醇梯度洗脫；流速1.0ml·min-1；檢測波長為229nm；柱溫為30℃。結果 鹽酸納洛酮降解產物與中間體能夠與主峰較好的分離。結論 在該色譜條件下，檢測結果靈敏、準確、簡便，專屬性強。

關鍵詞：高效液相色譜法；鹽酸納洛酮注射液；有關物質測定

鹽酸納洛酮是阿片受體拮抗藥，臨床臨床用于解救麻醉性鎮痛藥急性中毒，拮抗麻醉性鎮痛藥的殘余作用，解救急性乙醇中毒等[1]。由于本品不穩定，在放置過程中有關物質增加速度快，產品不穩定，因此有必要建立能穩定、準確檢測鹽酸納洛酮注射液有關物質變化情況的檢測方法。2010版中國藥典中對于鹽酸納洛酮注射液，有關物質項下只有檢查2，2’-雙納洛酮，為了進一步提升藥品質量，參照中國藥典、美國藥典及英國藥典對鹽酸納洛酮注射液有關物質方法進行改進，使其可以很好的檢查鹽酸納洛酮注射液的2，2’-雙納洛酮，單個未知雜質及總雜質。該HPLC方法操作簡便，結果準確，重復性高。

1 儀器和試藥

1.1 儀器 waters 2695四元低壓梯度高效液相色譜儀；ODS色譜柱（4.6mm×150mm，5μm），KQ-250DB型超聲波清洗器。

1.2試藥 鹽酸納洛酮對照品（批號171239-201106）由購于中國藥品生物制品檢定所；鹽酸納洛酮注射液（批號：市售品20130801；規格1ml：0.4mg）由江蘇恩華藥業股份有限公司提供；分析純試劑包括辛烷磺酸鈉、甲醇、氯化鈉。

2 測定方法

2.1色譜分析條件 色譜柱為ODS色譜柱（4.6mm×150mm，5μm）；流動相：辛烷磺酸鈉溶液（取1-辛烷磺酸鈉2.0g與氯化鈉2.0g，加水1000ml使溶解，搖勻）為流動相A；甲醇為流動相B；按表1進行梯度洗脫；檢測波長為229nm；流速1.0ml；柱溫30℃；進樣量10μl。供試品溶液的色譜圖中如有與系統適用性試驗溶液色譜圖中雜質II（2，2’-雙納洛酮）保留時間一致的峰，其峰面積乘以校正因子0.53，不得大于對照溶液主峰面積1/2（0.5%），其他單個雜質不得大于對照溶液主峰面積的1/5（0.2%），各雜質峰面積之和不得大于對照溶液主峰面積（1.0%）。

2.2分析樣品的制備 供試品溶液：直接取用鹽酸納洛酮注射液作為供試品溶液；自身對照溶液精密量取供試品溶液1ml，置100ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液。

2.3系統適應性驗證 取鹽酸納洛酮對照品適量，加0.1mol/L鹽酸納洛酮溶液溶解并制成每1ml中含0.2mg的溶液，取10ml，置25ml量瓶中，加0.4%三氯化鐵溶液1ml，置水浴中加熱10min，放冷，用水稀釋至刻度，搖勻，作為含2，2’-雙納洛酮的系統適用性溶液。結果見圖1（注：9.251min處峰為主峰，29.185min處峰為2，2’-雙納洛酮峰）。

2.4與合成中間體分離度驗證 分別精密稱取中間體Ⅰ～Ⅶ適量，各置100ml 量瓶中，加溶劑溶解稀釋，制成0.1 mg/ml 的溶液；精密量取各溶；28.260min為液1.0ml，置100 ml量瓶中，加流動相定容，搖勻，即得1 μg/ml 的中間體混合液，依照有關物質檢測方法檢測。結果見圖2（注：3.102min為中間體Ⅴ；6.076min為中間體Ⅶ；7.400min為中間體Ⅵ；9.793min為納洛酮主峰；13.895min為中間體Ⅳ；15.641min為中間體Ⅲ；23.269min為中間體Ⅱ；26.191min為中間體Ⅰ；28.260min為2，2’-雙納洛酮峰）。

2.5專屬性試驗 空白輔料溶液與供試品分別進樣10μl，記錄色譜圖。結果見圖3，4。由結果可知，空白輔料不干擾鹽酸納洛酮主峰及雜質峰的測定。

2.6精密度驗證 取自身對照液，連續測定6 次計算得主峰面積的RSD 為0.93%，表明該方法重復性較好。

2.7穩定性試驗 將供試品溶液（20130801批）25℃ 放置，分別于0、2、4、8、12和24h取樣后測定，記錄色譜圖。結果24h內，市售品的主峰面積的RSD 為0.12%，2，2′-雙納洛酮面積的RSD 為5.0%。表明供試品溶液穩定。

3 討論

現行中國藥典方法與美國藥典方法一致，由于中國藥典標準要求只檢查2，2′-雙納洛酮，所以對主峰前的雜質峰分離度要求不高；供試液色譜圖在主峰前有一個很大的包峰，影響雜質之間的分離，在檢查鹽酸納洛酮注射液單個雜質及總雜質時，不能得到真實的結果，此外中國藥典方法得到的色譜圖中，雜質之間不能實現基線分離，分離效果非常差；本關物質測定方法能夠很好的分離各個雜質。

本有關物質檢測方法是在在中國藥典方法基礎上降低了初始有機相比例，可以減小水峰面積，并與雜質峰分離。在供試品溶液沒有雜質的位置設置梯度，使得2，2′-雙納洛酮在中國藥典標準的條件下出峰，保證2，2′-雙納洛酮的檢查結果可靠，同時準確檢測其它雜質，準確監測產品放置過程中雜質變化情況。

參考文獻：

[1]李文喆，王勇.鹽酸納洛酮的臨床應用[J].世界危重病醫學雜志，2006（6）：1603-1606.

編輯/馮焱