景洪哥納香醇提物對兩株人腫瘤細胞體外細胞毒作用初探

摘要：目的：觀察景洪哥納香醇提物體外抗腫瘤活性。方法：通過改良MTT法，考察不同濃度的洪哥納香醇提物體外對人胃癌細胞MKN-28及人肝癌細胞SMMC-7721的細胞毒作用。結果：100μg/mL景洪哥納香醇提物對MKN-28、SMMC-7721的細胞增殖抑制率可達95%以上。在一定的劑量范圍內，洪哥納香醇提物對MKN-28的增殖抑制能力具有一定的劑量依賴性，而對SMMC-7721則不明顯。其IC50分別為3102μg/mL、1888μg/mL。結論：景洪哥納香醇提物體外對MKN-28、SMMC-7721具有顯著的抗腫瘤活性。

關鍵詞：醇提物、細胞毒、MKN-28、SMMC-7721

中圖分類號：R9694文獻標識碼：A

文章編號：1007-2349（2013）02-0048-02

惡性腫瘤嚴重的威脅著人類生命和健康，其發病率和死亡率在世界許多國家和地區居首位。據WHO預測，到2020年全球腫瘤發病率將上升50%，癌癥病人將增加的近1500萬，惡性腫瘤將成為21世紀危害人類健康的頭號殺手。目前已上市的抗腫瘤藥物缺乏細胞毒性特異性，在殺傷腫瘤細胞的同時，往往無選擇地殺傷正常細胞，特別是增生活躍的造血干細胞，正常細胞的損傷常導致嚴重的并發癥，影響治療效果和患者依從性。而近年來，從天然藥物中尋找高效低毒的抗腫瘤藥物成為研究熱點[1]。

景洪哥納香系蕃荔枝科哥納香屬植物，全世界約50種，分布于熱帶及亞熱帶地區[2]。我國產10種，分布于西南、華南、臺灣等省區。在民間主要用于清熱、殺蟲、抗癌、抗瘧等[3]。筆者通過體外觀察景洪哥納香醇提物對兩株人腫瘤細胞株的抗增殖作用，初步判斷其抗腫瘤活性。為將景洪哥納香抗腫瘤活性的進一步研究提供必要的前期基礎。

1材料與方法

11材料人胃癌細胞MKN-28、人肝癌細胞SMMC-7721購自于中國科學院上海細胞庫；RMPI-1640培養基購自于GIBCO公司；新生牛血清購自于杭州四季青試劑公司；胰蛋白酶、二甲基亞砜（DMSO）、噻唑藍（MTT）購自于Sigma公司；三聯液（10mL SDS，5mL異丁醇，012mL HCL，定容至100mL）由實驗室自己配置。注射用青霉素鈉、注射用硫酸鏈霉素購自于大連美羅大藥廠。

12細胞培養用RPMI-1640培養液含10%新生牛血清、100 kU/L青霉素、100 kU/L鏈霉素，在37 ℃、5 %的二氧化碳培養箱中常規培養，25 g/L胰酶+02 g/L EDTA消化傳代，取對數生長期的細胞用于實驗。

13體外抗增殖作用采用改良MTT法，取對數生長期的細胞，以4×104/mL、90 μL /孔接種于96孔板中，分別加入陰性對照組生理鹽水（NS）、陽性對照組（終濃度為01、1、10 μg/mL的順鉑）及終濃度分別為1、3、10、30、100 μg/mL的各種景洪哥納香醇提物，每個濃度均設4個平行孔，于37℃、5%CO2培養箱內培養48 h，每孔加入5 g/ L MTT 10 μL，振蕩混勻，4h后，每孔加入100 μL三聯液，12 h后，輕輕振蕩15 min，在酶標儀上于490 nm/570 nm雙波長下測定OD值，計算細胞增殖抑制率：

細胞抑制率=（1-實驗組OD值/對照組OD值）×100%

并利用Gwbasic軟件計算半數抑制濃度（IC50）。

2結果

21形態學觀察不同濃度的景洪哥納香醇提物用于兩種人腫瘤細胞48h后，光學顯微鏡下觀察可見細胞增殖被顯著抑制（見圖1、圖2）。高濃度景洪哥納香醇提物與正常組比較，細胞貼壁能力下降，由不規則形狀逐漸變圓、皺縮、折光性降低，細胞數量顯著減少，可見大量細胞碎片。且發現景洪哥納香醇提物對兩株人腫瘤細胞增殖抑制能力有一定的劑量依賴性。

22體外細胞增殖抑制作用改良MTT法觀察景洪哥納香醇提物對細胞的細胞毒作用，發現景洪哥納香醇提物在一定的劑量范圍內，可以顯著的抑制MKN-28細胞的增殖能力，且具有顯著的劑量依賴性，其IC50為3102μg/mL。而其對SMMC-7721同樣具有顯著的細胞毒作用，但是劑量依賴性不明顯，其IC50為1888μg/mL。觀察發現，100μg/mL景洪哥納香醇提物對這兩株人腫瘤細胞增殖抑制率可達95%以上。隨著濃度的降低，其細胞毒作用也逐漸降低。（見圖3）

3討論

中醫藥在治療癌癥方面有其獨到之處。近年來，從中藥中篩選抗癌活性成分以及抗癌先導化合物已成為這一領域研究的熱點。據不完全統計，來源于植物藥的抗癌制劑，占總抗癌藥的1/3左右[4]。紫杉醇、喜樹堿、長春新堿等已作為許多腫瘤的首選藥。我國的藥用植物種質資源豐富，如果能將中藥中抗腫瘤有效成分分離出來，明確其抗腫瘤作用及機理，對于抗腫瘤藥物的研制開發以及腫瘤治療具有非常重要的意義。[JP]

番荔枝科屬植物抗腫瘤活性顯著，在上世紀90年代就被多位國內外學者所關注[5]。景洪哥納香是番荔枝科哥納香屬植物，其抗腫瘤活性近年也開始引起學者的關注[6]。筆者對景洪哥納香的醇提物在體外進行了初步細胞毒活性測試，光學顯微鏡下觀察發現景洪哥納香醇提物高濃度時可以顯著抑制細胞增殖，且發現大量細胞碎片，提示筆者其抗MKN-28增殖作用的機制可能是直接殺死細胞，而不僅僅是誘導細胞凋亡。改良MTT法研究發現其抗腫瘤活性顯著，且具有一定的劑量依賴性。提示筆者可以進一步觀察其對其它人腫瘤細胞株細胞毒作用如何、以及其細胞毒活性是否存在時間依賴性及其抗腫瘤機制。

筆者通過體外觀察兩株人腫瘤細胞體外實驗，對景洪哥納香醇提物抗腫瘤活性進行初探，以期為景洪哥納香的抗腫瘤活性研究提供必要的前期基礎。[KH*1D]

參考文獻：

[1]范治軍，崔英中草藥抗腫瘤的研究進展[J].中國醫學文摘（腫瘤學），2005 02：152-153

[2]中國科學院編輯委員會中國植物志[M].第30 卷北京：科學出版社，1978：64

[3]中國科學院昆明植物研究所云南植物志[M].北京：科學出版社，1991：51

[4]劉延澤，陳士林，馬培，等中草藥中發現新抗癌藥物的途徑[J].現代藥物與臨床，2012，04：323-337

[5]楊根金，顧正兵，梁華清，等用核磁共振研究和確定景洪哥納香中一種新生物堿的化學結構[A].第十屆全國波譜學學術會議論文摘要集[C].中國物理學會波譜學專業委員會：1998：2

[6]姜苗苗，馮毅凡，張雪，等景洪哥納香根的化學成分研究（Ⅱ）[J].中草藥，2011，12：2386-2388[JX*1]