竹葉柴胡與北柴胡解熱鎮(zhèn)痛作用的比較

杜士明，杜婷，王剛，葉方，孫榮進，陳科力 （.湖北醫(yī)藥學院附屬十堰市太和醫(yī)院，湖北 十堰，44000；.湖北中醫(yī)藥大學中藥資源和中藥復方教育部重點實驗室，湖北 武漢，430065）

竹葉柴胡（Bupleurum marginatum Wall.ex DC.）為傘形科柴胡屬植物，主要分布于四川、湖北、陜西、云南、貴州、湖南等地［1］。長期以來，鄂西北地區(qū)所產的柴胡習慣以“北柴胡”之名經銷全國各地，并在中藥市場上享有較高的聲譽。但本課題組對鄂西北地區(qū)柴胡資源調查結果表明，本地區(qū)野生柴胡品種均為竹葉柴胡，尚未發(fā)現有野生和人工栽培的北柴胡［2］。《中國藥典》2010 年版收載的柴胡品種為北柴胡（Bupleurum chinense DC.）或狹葉柴胡（B.scorzonerifolium Willd.南柴胡）的干燥根入藥，而竹葉柴胡被云南、四川、貴州等省的地方標準所收載［3］。文獻報道鄂西北地區(qū)所產竹葉柴胡皂苷含量較高［4］，本課題組前期研究也表明鄂西北各產地竹葉柴胡的皂苷含量均符合藥典北柴胡含量測定項下的有關規(guī)定，本實驗在此基礎上進一步比較竹葉柴胡和北柴胡的解熱及鎮(zhèn)痛藥理作用，觀察其是否有差異，為竹葉柴胡的臨床應用和后續(xù)的開發(fā)研究提供借鑒和依據。

1 材料與試劑

JJ200電子天平（美國兄弟公司）；MH－1000調溫型電熱套（北京科偉永興儀器有限公司）；RE－52AA 旋轉蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）；MT－101型電子體溫計（杭州世佳電子有限公司）；501型超級恒溫器（上海市實驗儀器廠）。

竹葉柴胡，產地：湖北房縣，購于湖北神農本草中藥飲片有限公司（批號20111220）；北柴胡，產地：山西運城，由山西運城北柴胡種植基地提供（批號20111020），上述飲片經湖北中醫(yī)藥大學陳科力教授鑒定分別為竹葉柴胡（Bupleurum marginatum Wall.ex DC.）與 北 柴 胡（Bupleurum chinense DC.）；2，4－二硝基苯酚；氫氧化鈉；醋酸；對乙酰氨基酚片（四川省旺林堂藥業(yè)有限公司，批號120202）。

SD 大鼠，體質量（200±20）g，雌雄各半，動物合格證號：No.4200900016；昆明種小鼠，體質量（20±2）g，雌雄兼取，動物合格證號：No.4200900008，實驗動物使用許可證號：SYXK（鄂）2011－0031，均由湖北醫(yī)藥學院動物實驗中心提供。

2 方法

2.1 飲片提取液的制備

2.1.1 水煎液的制備 分別稱取適量竹葉柴胡和北柴胡，加8倍量的水煎煮2次，每次1.5h，過濾、合并濾液，減壓濃縮，加水調配成濃度為每毫升相當于0.5g生藥的儲備液，備用。

2.1.2 醇提液的制備 分別稱取適量竹葉柴胡和北柴胡，加8倍量的60%乙醇（調pH 7～8），80 ℃回流2h，過濾，收集濾液，濾渣重復提取1次，合并濾液，減壓濃縮至無乙醇味［5］，加水調濃度制成每毫升相當于0.5g生藥的儲備液，備用。

2.2 大鼠解熱作用研究

2.2.1 2，4－二硝基苯酚溶液制備 稱取2，4－二硝基苯酚150 mg，加80 mL 生理鹽水，滴加5 mol·L－1的氫氧化鈉溶液，邊加邊攪拌使之溶解，再加生理鹽水至100mL，搖勻，備用。

2.2.2 實驗動物的篩選 參照文獻［6］中的方法，實驗前用電子體溫計測正常肛溫，每天2次，連續(xù)3 d，測量肛溫（插入大鼠肛門距離2cm 左右）。將體溫變化（ΔT＞0.5 ℃）及單次體溫高于38 ℃的大鼠剔除。

2.2.3 實驗方法 篩選出體溫合格的大鼠48只，隨機分為6組，每組動物8只，分別為竹葉柴胡水煎液高劑量（ZG，5.0g·kg－1·d－1）、低劑量組（ZD，2.5 g·kg－1·d－1）；北柴胡水煎液高劑量（BG，5.0g·kg－1·d－1）、低劑量組（BD，2.5g·kg－1·d－1）；正常對照組（K）、模型對照組（M）給予同等容量的純化水（10.0 mL·kg－1）。實驗前24h 大鼠禁食不禁水，造模前稱重，1h 內測大鼠直腸溫度2 次，取均值作為基礎體溫值。每天灌胃1次，連續(xù)給藥4d，末次灌胃給藥60min后，除正常對照組外，其他各組大鼠按0.1mL·kg－1背部皮下注射0.15%的2，4－二硝基苯酚溶液，然后于0.5，1，1.5，2，2.5，3h 測體溫一次，以基礎體溫為基數，計算各測定時間點大鼠的體溫變化ΔT（℃）。以時間為橫坐標，ΔT 為縱坐標繪制體溫變化曲線，并計算各實驗組在體溫達到峰值后的下降幅度ΔT′（℃）。

2.3 小鼠鎮(zhèn)痛試驗

2.3.1 熱板法 調節(jié)超級恒溫器，控制溫度在（55±0.5）℃，用秒表記錄小鼠自投入熱板后第一次出現舔后足的時間（s）作為該鼠的痛閾值。挑選在5～30s內反應穩(wěn)定、不跳躍的小鼠80只備用。

將80只小鼠隨機分成10組，每組8只，分別為竹葉柴胡水煎液高、低劑量組（劑量為10.0g·kg－1和5.0g·kg－1）；竹葉柴胡醇提液高、低劑量組（劑量為10.0g·kg－1和5.0g·kg－1）；北柴胡水煎液高、低劑量組（劑量為10.0g·kg－1和5.0g·kg－1）；北柴胡醇提液高、低劑量組（劑量為10.0g·kg－1和5.0g·kg－1）；陽性對照組給予0.2g·kg－1的對乙酰氨基酚，每天灌胃1次，連續(xù)給藥4d，模型對照組給予等容量的純化水。于末次給藥后1.0h分別測定各鼠痛閾值，計算痛閾抑制率。痛閾抑制率（%）＝（給藥后痛閾值－給藥前痛閾值）／給藥前痛閾值×100%。2.3.2 扭體法 小鼠80只，隨機分為10組，每組8只，雌雄各半，稱重并記錄，分組給藥同“2.3.1”項，每天灌胃1次，共4d。末次給藥后1.0h，腹腔注射0.5%醋酸10mL·kg－1，觀察15min內各組動物扭體反應（腹部收縮，身體扭曲，伸展后肢，臀部抬高）次數，計算扭體抑制率。扭體抑制率（%）＝（陰性對照組平均扭體次數－給藥組平均扭體次數）／對照組平均扭體次數×100%，比較各組受試藥物之間的扭體抑制率。

3 結果

3.1 解熱作用 如圖1、表1所示，各組大鼠皮下注射2，4－二硝基苯酚后，2.0h內體溫顯著上升，1.5～2.0h達到峰值，與基礎體溫比較，除正常對照組外，各組大鼠的體溫變化均大于0.8 ℃，表明造模成功。與模型組比較，竹葉柴胡、北柴胡給藥組大鼠體溫變化（ΔT，T1.5h與T3.0h體溫差值）、ΔT1.5h（T1.5h與基礎值體溫差值），計算體溫下降幅度（%）＝ΔT／ΔT1.5h×100%）均有顯著性差異（P＜0.05），表明2種柴胡均有降低大鼠體溫的作用；竹葉柴胡與北柴胡給藥組之間比較結果表明，兩者降低大鼠體溫的作用差異無顯著性（P＞0.05），提示竹葉柴胡與北柴胡的解熱作用相似；不同劑量組竹葉柴胡與北柴胡給藥組的解熱作用差異也無顯著性（P＞0.05），見表2。

圖1 各實驗組大鼠不同時間點的體溫變化趨勢—◆—K；—■—M；—▲—BG；—□—BD；—○—ZG—●—ZDFig 1 The changing trend of the temperature at different time intervals—◆—K；—■—M；—▲—BG；—□—BD；—○—ZG—●—ZD

3.2 熱板致痛模型鎮(zhèn)痛作用的比較 表3表明，與模型對照組比較，竹葉柴胡、北柴胡水煎液組差異均有顯著性（P＜0.05），而兩者醇提液組差異均無顯著（P＞0.05），提示2種柴胡水煎液均有鎮(zhèn)痛作用，而醇提液鎮(zhèn)痛作用不明顯；痛閾抑制率比較結果表明，竹葉柴胡與北柴胡水煎液之間差異無顯著性（P＞0.05）。

3.3 醋酸致痛模型鎮(zhèn)痛作用的比較 表4結果顯示，與模型組比較，各給藥組扭體百分率均有顯著性差異（P＜0.05），提示2種柴胡的水煎液和醇提液對醋酸所致疼痛模型的小鼠均有鎮(zhèn)痛作用；北柴胡與竹葉柴胡之間差異無顯著性（P＞0.05）；2種柴胡不同劑量組間的鎮(zhèn)痛效果差異也無顯著性（P＞0.05），表明北柴胡與竹葉柴胡在醋酸致痛模型的鎮(zhèn)痛作用方面相近。

4 討論

研究表明，柴胡揮發(fā)油部分、黃酮部分和其他物質在解熱效應中發(fā)揮重要作用，能協同增強解熱效果；而皂苷部分具有明顯的拮抗作用［7］。本實驗前期研究表明，柴胡醇提液中皂苷含量較高，而水煎液與臨床常用的劑型更為接近，所以在考察解熱作用時只選擇了2種柴胡的不同提取液進行解熱作用比較。結果表明2種柴胡的不同提取液均有明顯的解熱、鎮(zhèn)痛作用，兩者的解熱作用相近，差異無顯著性，可能與2種柴胡的解熱成分相似有關；研究也發(fā)現2種不同劑量組之間解熱作用無顯著性差異，由于柴胡解熱作用是通過調節(jié)下丘腦體溫調節(jié)中樞，影響致熱原、抗炎及調節(jié)機體免疫力實現的［8］，這說明了這2種柴胡可能通過調節(jié)下丘腦體溫調節(jié)中樞，達到一定的解熱效應之后，與用藥劑量無明顯的相關性。

表1 各治療組大鼠不同時間點體溫的變化（±s，n＝8）Tab 1 The change of the temperature at different time intervals（±s，n＝8）

表1 各治療組大鼠不同時間點體溫的變化（±s，n＝8）Tab 1 The change of the temperature at different time intervals（±s，n＝8）

表2 各實驗組大鼠體溫的下降幅度（n＝8）Tab 2 The drop of the temperature（n＝8）

表3 熱板試驗結果（n＝8）Tab 3 The results of hot plate test（n＝8）

表4 醋酸致痛試驗結果（n＝8）Tab 4 The results of HAc－induced writhing response（n＝8）

不同劑量的竹葉柴胡與北柴胡解熱作用結果（表2）表明，竹葉柴胡低劑量組大鼠體溫降幅較為顯著（94.18%），更接近于基礎體溫，其他給藥組在第3小時節(jié)段體溫均低于模型組，各組沒有明顯差異。在熱板法和醋酸扭體鎮(zhèn)痛試驗中，竹葉柴胡與北柴胡低劑量組均有明顯的鎮(zhèn)痛作用，均好于高劑量組，但2 種柴胡各組之間差異無顯著性（P＞0.05）。這些說明柴胡對用藥劑量非常敏感，藥用時要根據不同的治療用途進行辨證給藥，當以解熱為主要用途時可用稍大的劑量，而以鎮(zhèn)痛為主要用途時應使用適當較小的劑量，以合理使用柴胡達到較佳的治療效果。

在鎮(zhèn)痛試驗中，熱板法是經典快痛實驗模型，適合于評價中樞鎮(zhèn)痛的藥物，而醋酸扭體法是引起較深的、大面積而持久的疼痛刺激，適合于外周鎮(zhèn)痛研究，故本實驗采用熱板法和醋酸扭體法綜合考察竹葉柴胡和北柴胡水煎液的鎮(zhèn)痛作用。結果顯示，竹葉柴胡、北柴胡飲片的水煎液和醇提液在醋酸扭體試驗中均有鎮(zhèn)痛作用，兩者的水煎液和醇提液之間無顯著性差異；兩者的水煎液在熱板試驗中均顯示出較好的鎮(zhèn)痛作用，而醇提液無明顯作用，提示鎮(zhèn)痛作用的活性成分以水溶性成分居多。

綜合分析表明，2種柴胡不同提取液的藥理作用效果優(yōu)于醇提液，說明柴胡飲片發(fā)揮作用時除柴胡皂苷外，可能還有柴胡的揮發(fā)油、柴胡多糖以及多種黃酮成分等綜合發(fā)揮作用，說明柴胡采用傳統中藥湯劑的藥用方法具有科學性；而2種柴胡醇提部分的鎮(zhèn)痛作用可能偏向于外周神經作用，其具體作用機制有待更深一步的研究。本實驗前期對鄂西北地區(qū)柴胡飲片的資源調查結果表明，鄂西北地區(qū)以“北柴胡”之名廣泛使用的柴胡實際為竹葉柴胡的根，本實驗表明竹葉柴胡與北柴胡解熱鎮(zhèn)痛作用相似，其作用強度沒有顯著性差異，說明竹葉柴胡可以作為北柴胡藥用資源代替使用，這也為開發(fā)新的柴胡飲片資源提供了理論基礎。

［1］ 中國科學院中國植物志編輯委員會.中國植物志［M］.北京：科學出版社，1979：215.

［2］ 杜士明，葉方，楊光義，等.鄂西北地區(qū)柴胡資源調查研究［J］.中藥材，2012，35（6）：866－869.

［3］ 林海霞，王硯，孫翠萍，等.竹葉柴胡規(guī)范化種植標準操作規(guī)程［J］.中醫(yī)中藥，2011，31（9）：380－381.

［4］ 肖培根.新編中藥志［M］.第1 卷.北京：化學工業(yè)出版社.2002：784－809

［5］ 黃偉，孫蓉.柴胡總皂苷粗提取物對大鼠急性毒性實驗研究［J］.中國藥物警，2010，7（9）：524－526.

［6］ 薛燕，白金葉.柴胡解熱成分的比較研究［J］.中藥藥理與臨床，2003，19（1）：11.

［7］ 高琳，白晶，劉迪謙.柴胡－黃芩水煎液中不同化學成分群配伍與其解熱作用相關性研究［J］.北京中醫(yī)藥大學學報，2006，11（2）126－128.

［8］ 張云波，梁園，夏愛軍.柴胡解熱作用的藥理研究進展［J］.中國藥業(yè)，2011，3（7）：172－174