乳腺癌間質T細胞亞群與乳腺癌5年生存率相關性的研究

姚 宇，陳登庭，邢魯奇，鄧 淼

乳腺癌是威脅人類健康的常見惡性腫瘤之一。惡性腫瘤的發生、發展與機體的細胞免疫功能，尤其是T細胞各亞群的數量及其功能狀態密切相關[1]，近年來很多研究表明調節性T細胞(regulatory T cells ,Tregs)在多種腫瘤的發生、發展、轉移過程中發揮免疫抑制作用。本研究采用免疫組化方法檢測腫瘤局部T淋巴細胞亞群的表達狀況，及其與乳腺癌臨床病理特征相關性，探討其對乳腺癌患者5 a生存率的影響。

1 材料與方法

1.1檢測對象選取河南科技大學第一附屬醫院病理科2001～2006年乳腺浸潤性導管癌病例80例，常規術后甲醛固定石蠟包埋。均為女性，年齡29～73歲，平均45.0歲。按2003年美國腫瘤聯合會(AJCC)乳腺癌TNM分期標準：Ⅰ期2例，Ⅱ期59例，Ⅲ期16例，Ⅳ期3例；組織學分級:高分化9例，中分化60例，低分化11例；手術病理證實淋巴結轉移52例，無淋巴結轉移28例；所有患者均進行了術后5 a隨訪，隨訪結果：死亡11例，存活69例，5 a生存率為86.3%。所有患者術前均未接受放、化療，全部標本HE染色后均經兩位有經驗的病理醫師診斷。

1.2檢測方法所有標本均經4%甲醛固定，石蠟包埋，連續切片，厚度為4 μm，每例標本切4張,染色時用已知陽性切片作陽性對照，用PBS代替一抗作陰性對照。小鼠抗人CD4單克隆抗體和小鼠抗人CD8單克隆抗體為即用型試劑，(福州邁新生物技術有限公司)；兔抗人FoxP3多克隆抗體(博奧森生物技術有限公司生產)，染色結果用DAB顯色。

1.3結果判定FoxP3：陽性細胞著色定位于胞漿，CD4+和CD8+細胞著色定位于細胞膜，表現為淺黃、棕黃或棕褐色。用雙盲半定量法評估其染色，無陽性細胞數為(-)，陽性細胞數占腫瘤間質淋巴細胞數<25%為(+)，25%～50%為(++)，>50%為(+++)。

1.3統計學分析所有數據均用SPSS 11.5 for Windows軟件包處理，按不同臨床病理指標進行分組，生存率用Kaplan-Meier方法計算；各組間率的比較采用χ2檢驗；相關分析采用Spearman相關系數檢驗。

2 結果

2.1乳腺癌間質T細胞亞群與患者5a生存率的相關性用Kaplan-Meier方法計算，Foxp3+Tregs陽性組和陰性組5 a生存率分別為92.5%和83.0%，兩者比較無顯著性差異(P>0.05)；CD4+T細胞陽性組和陰性組5 a生存率分別為73.7%和64.3%，兩者比較無顯著性差異(P>0.05)；CD8+T細胞陽性組和陰性組5 a生存率分別為25.0%和38.8%，兩者比較無顯著性差異(P>0.05)，見表1。

表1 乳腺癌間質T細胞亞群活性與5 a生存率的相關性

2.2乳腺癌間質Foxp3+Tregs浸潤與患者臨床病理特征的關系乳腺癌間質中Foxp3+Tregs浸潤與pTNM分期、組織學分級、淋巴結轉移均有顯著性差異(P<0.05)，與年齡、腫瘤大小無顯著性差異(P>0.05)，見表2。

表2 乳腺癌間質Foxp3+Tregs的浸潤

2.3乳腺癌間質CD4+T細胞浸潤與患者臨床病理特征的關系乳腺癌間質中CD4+T細胞浸潤與pTNM分期、組織學分級、淋巴結轉移均有顯著性差異(P<0.05)，與年齡、腫瘤大小無顯著性差異(P>0.05)，見表3。

2.4乳腺癌間質CD8+T細胞浸潤與患者臨床病理特征的關系腺癌間質中CD8+T細胞浸潤與pTNM分期、組織學分級均有顯著性差異(P<0.05)，與淋巴結轉移、年齡、腫瘤大小無顯著性差異(P>0.05)，見表4。

表3 乳腺癌間質CD4+T細胞的浸潤

表4 乳腺癌間質CD8+T細胞的浸潤

3 討論

在腫瘤局部微環境中，腫瘤細胞與T細胞相互誘導，相互抑制，若T細胞各亞群之間比例關系及功能出現異常，微環境內免疫功能會受到抑制，最終將導致機體對腫瘤的免疫無能和腫瘤細胞的免疫逃逸[2]。這其中涉及多種調控因素，近幾年研究較多的是具有免疫負性調節作用的Tregs,表達在其胞核的叉頭翼狀螺旋轉錄因子(forkhead/winged helix transcription factor p3, Foxp3)在2001年由Brunkown等首次報道，目前被認為是Tregs最具特異性的標記物，且其在調節Tregs發育和功能方面起決定性的作用,是T淋巴細胞向免疫抑制功能定向分化的關鍵因素[3]。

T細胞是機體抵御腫瘤的主要力量，其中CD8+T細胞直接作為效應細胞特異性殺傷癌細胞， CD4+T細胞主要通過分泌細胞因子調節機體抗腫瘤免疫狀態，二者皆處于免疫系統與腫瘤相互作用的前沿，若出現異常會直接影響機體抵御腫瘤的能力[4]。本研究發現乳腺癌間質中Foxp3+Tregs的浸潤與組織學分化異常程度、pTNM分期及淋巴結轉移的程度呈正相關，而CD4+及 CD8+T細胞在乳腺癌間質的浸潤與這些臨床病理特征呈負相關，但這些腫瘤間質T淋巴細胞的浸潤與患者的年齡和腫瘤大小無相關性?？商崾救橄侔╅g質Foxp3+Tregs可促進淋巴結轉移，在患者病情進展過程中發揮積極作用，它的增多可能抑制了在機體免疫系統中發揮重要功能的CD4+和CD8+T細胞，打破腫瘤間質免疫平衡狀態，致使腫瘤細胞發生免疫逃逸，從而參與腫瘤的擴散和轉移。Liyanage等對胰腺癌腫瘤浸潤淋巴細胞和局部淋巴結中Treg細胞研究發現，Treg細胞數量在腫瘤局部顯著增多[5]。有研究表明，在卵巢癌患者中發現Treg細胞可抑制CD4+T細胞、CD8+T細胞及NK細胞的抗瘤活性。有學者認為，Foxp3+Tregs可通過多種途徑抑制間質T細胞亞群的免疫功能，通過抑制CD4+和CD8+T細胞IL-2基因的轉錄和表達來抑制T淋巴細胞的活化、增殖[6]，亦能通過下調樹突狀細胞的CD80和CD86共同刺激分子表達、抑制樹突狀細胞成熟和上調穿孔素和顆粒酶的表達，有選擇性地殺傷提呈抗原的B細胞，抑制B細胞的增殖，從而影響抗原的提呈，致使腫瘤局部免疫無能，腫瘤細胞發生免疫逃逸，患者病情加重出現腫瘤擴散甚至轉移[7-8]。這些論斷與本實驗結果相似，提示Foxp3+Tregs在乳腺癌發生、發展的過程中發揮重要作用，可以作為評估患者病情程度的一個參考指標或者是治療中的一個針對點。本研究還發現，5 a存活陰性組患者的腫瘤間質T淋巴細胞亞群與5 a存活陽性組患者的相比較,差異并無顯著性，這提示了雖然乳腺癌間質T淋巴細胞亞群平衡狀態的改變使得腫瘤間質出現免疫抑制，造成腫瘤細胞對機體免疫系統的耐受和免疫逃逸，促進腫瘤的浸潤進展和淋巴結轉移，但與乳腺癌患者5 a生存并無明顯相關性。對于這一研究結果，我們可認為，對乳腺癌患者預后有影響的因素有多種，間質T細胞亞群只是對其有重要影響的因素之一，故還需進一步的實驗和研究。

近年來，免疫治療腫瘤已成為醫學界關注的熱點之一，一些腫瘤浸潤淋巴細胞過繼免疫治療和腫瘤疫苗已通過大量實驗，但效果并不理想，其中有很多需要解決的問題[9-10]。本研究提示，乳腺癌間質T細胞亞群與腫瘤細胞的相互影響、相互抑制直接關系著患者病情的發展，對間質T細胞亞群的研究，或許可以為對抗惡性腫瘤提供新的途徑。

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