實驗性雞高尿酸血癥模型的建立

任予勇

（杜集區農水局畜牧水產中心，安徽 淮北 235000）

嘌呤代謝紊亂和尿酸排泄減少會引起高尿酸血癥（hypemricemia）和痛風（gout）疾病，痛風的病理基礎產生于高尿酸血癥，痛風都會伴有高尿酸血癥。［1］高尿酸血癥是指細胞外液的尿酸鹽呈超飽和狀態，當血尿酸鹽大于等于417μmol／L時應考慮高尿酸血癥。引起嘌呤代謝紊亂的重要原因認為是超高蛋白膳食，過量攝入糖、鹽、脂肪、蛋白質及大量飲酒與該病也有重要關系。雞痛風病又稱尿石癥、腎結合內臟或營養性痛風等，是家禽的一種常見病，以雞多見，在我區各雞場時有發生，造成雞場不小損失。人類痛風是由單鈉尿酸鹽（MSU）沉積所致的晶體相關性關節病，與嘌呤代謝紊亂和（或）尿酸排泄減少所致的高尿酸血癥直接相關。隨著人民飲食結構的改變以及藥物的作用，人類高尿酸血癥及痛風的發病率也明顯升高，對該病的研究也逐漸增多。［2］因此本實驗采取高鈣、高蛋白雙因素相結合建立實驗性雞高尿酸血癥模型，探討不同含量的鈣和蛋白日糧對雞血尿酸指標的影響，從而為今后高鈣和高蛋白飲食致雞高尿酸血癥及痛風病人的防治提供理論基礎。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物及分組

雄性“羅曼蛋雞”（從淮北市某雞養殖場購買）80只，體重為700±50g，雞齡60天，實驗雞在動物房適應性喂養5天后稱重，測量實驗雞的踝關節周徑。然后隨機分成4組，A、B、C為造模組。A組高蛋白組；B組高鈣組；C組高鈣高蛋白組；D組對照組；每組20只實驗用雞。A、B、C三組造模組采用專用的造模飼料來喂養，而D組對照組則采用常規的蛋雞飼料喂養，籠養，在其他方面四組的條件相同。

1.1.2 常規飼料與造模飼料制備

蛋雞前期配合飼料喂養的是常規飼料，從淮北市正大飼料有限公司購入。造模飼料［3］為1號飼料：高鈣飼料；2號飼料：高蛋白飼料；3號飼料：高鈣高蛋白飼料；4號飼料：基礎飼料。飼料組成為：其中1號飼料中85%的基礎飼料，15%的石粉；2號飼料中50%的基礎飼料，50%的豆粕；3號飼料中50%的豆粕，35%的基礎飼料，15%的石粉。

1.1.3 試劑與儀器

測定尿酸試劑盒購于溫州東甌津瑪生物科技有限公司，分光光度計購于上海安亭科學儀器廠；低速離心機購于美國Beckman公司。

1.2 方法

1.2.1 動物模型建立

對照組常規飼料喂養，A、B、C組造模組予以相應的造模飼料喂養。約17d后造模組雞開始出現痛風表現，會出現精神不振，羽毛松亂，脫落，進食減少，排糞白且稀，關節腫大，輕輕捏之會躲閃哀鳴，站立不穩等現象。以上體征出現表明雞高尿酸血癥模型造模成功，造模成功后按照原方案繼續喂養。

1.2.2 體重測量

每周用精密電子秤準確秤量雞的體重，并密切觀察雞造模前后的不同表現。

1.2.3 踝關節周徑測量

用軟尺測量兩腿踝關節周徑，為雞踝部第一足爪的下方環繞跗踝部的周徑長度，分別測量2次，求出平均值，計數精確到0.1cm，每周測量1次。

1.2.4 血清尿酸值測定

將雞翅展開暴露翼根靜脈，垂直刺破血管，取1.5ml血液，3000轉×10min離心，分離血清。酶偶聯比色法測定血清尿酸水平，高尿酸血癥判斷標準是以血尿酸＞476.57μmol／L（8mg／dl）。［4］

1.2.5 統計學處理

實驗數據采用SPSS程序軟件進行方差分析，“平均數±標準差”表示，P﹤0.05具有統計學意義。

2 結果

2.1 各組雞的體重變化情況（見表1）。

表1 實驗不同時期雞體重變化（kg）

由此可見，高蛋白質高鈣飼料致雛雞高尿酸血癥時伴有體重的快速增長。雞的體重與飼養時間呈正相關。各組雞隨著飼養時間的延長，體重變化有顯著性差異，但同一階段各組間體重的差異不顯著（p＞0.05）。

2.2 各組雞踝關節周徑的變化（見表2、表3）

表2 實驗不同時期雞踝關節周徑（左爪）（cm）

表3 實驗不同時期雞踝關節周徑（右爪）（cm）

左踝關節周徑在實驗的不同時期（見表2），模型組雞與D組相比差異均顯著（p＜0.05），各造模組之間無顯著差異（p＞0.05）；D組各時期踝關節周徑變化不大；各組間7d時左踝關節周徑變化差異不顯著；第17d各造模組左踝關節周徑均明顯增長，差異具有統計學意義（p＜0.05）。第27d時各組無明顯增長（p＞0.05）。

右踝關節周徑在不同的實驗時期（見表3），造模組與D組相比差異均顯著，模型組之間無明顯差異；D組出現踝關節增長的原因可能是飼養管理或者測定時讀數有誤差。隨著飼養時間的延長，第7dA組右踝關節周徑明顯增加（p＜0.05），其他模型組增加不明顯（p＞0.05）；喂養17d后，A、B、C組的踝關節周徑均明顯增加，差異顯著（p＜0.05），喂養第27d，三組踝關節周徑無明顯增長，差異不顯著（p＞0.05）。

2.3 各組試驗雞血尿酸值的變化

各試驗組雞的血尿酸值變化情況見表4。

表4 實驗不同時期雞血尿酸指標（μmol／L）

由表4可見，隨著飼養時間的延長，造模組三組雞的血尿酸值均明顯升高。A組血尿酸值升高速度最明顯，喂養第17d最高，已達到高尿酸血癥的標準，與其他組相比具有顯著差異，而C組血尿酸有一定的升高，但沒達到診斷高尿酸血癥的水平。與其他組比較，差異不顯著，B組與D組血尿酸值升高不明顯，無統計學意義（p＞0.05）。喂養第27d時，血尿酸含量，A組、C組均已達到或者超過高尿酸血癥的標準水平，與D組比較，均增加顯著（p＜0.05），其中C組的血尿酸值顯著高于其他造模組。B組血尿酸值則升高不明顯，未達到高尿酸血癥的診斷水平。

2.4 飼養過程中雞狀態的變化

在實驗過程中，各造模組雞出現進食減少，精神不振，羽毛松落，排白色稀糞（稀糞中含有大量的白色尿酸鹽），踝關節腫大，輕捏即躲閃哀鳴，站立不穩，喜伏臥等現象。

3 討論

雞體內嘌呤代謝的最終產物是尿酸，可引起高尿酸血癥及痛風癥［5］。禽痛風的致病因素比較復雜，有報道［6］認為導致禽痛風的因素可達20多種，如飼料中蛋白質含量過高、鈣、磷比例失調、維生素A的含量長期不足及水攝入不足等，本實驗結果表明，日食中蛋白質的量和性質及鈣含量影響較明顯。研究認為，關節型痛風的病因主要有兩種因素：高蛋白飼料和遺傳因素。許多研究者證實高蛋白日食可引起痛風性關節炎，高核蛋白類飼料可引起雞內臟或關節出現尿酸鹽沉積，因為大量高核蛋白攝入后，血尿酸含量會增高，達到一定程度會引起腎小管上皮的損害，腎臟排泄阻礙，造成尿酸代謝紊亂，引起痛風病。有研究［7］認為當飼料中蛋白質含量過高，體內尿酸生成過多，腎增強排泄功能后仍不能把尿酸全部排出時，會發生痛風。在本次實驗中，高蛋白日糧成功地復制了典型的高尿酸血癥模型，與以往研究結果一致。

喂養的飼料中含鈣量過高，鈣、磷比例失調也與雞痛風發病有關，如果鈣和磷的比例失調，高鈣飼料就可能引發痛風病。以往研究發現［8］青年蛋雞對飼料中的高鈣十分敏感，飼料中的鈣含量如果超過標準的50%可引起不良后果，認為飼喂含鈣21.5%、磷0.14%日食的蛋雞有發生腎病的危險，血鈣持續升高會導致腎小管上皮細胞發生變性、腫脹、壞死和脫落等病變。在本次實驗中，高鈣日糧喂養的雞血尿酸有所升高，但未達到高尿酸血癥水平。提示高鈣參與了禽痛風的發病過程，但可能不起主要作用。

體內組織分解代謝的加強與高尿酸血癥有密切關系。尿酸是禽類蛋白質和核酸代謝的含氮最終產物，如果飼料中蛋白含量過高，就會產生大量的尿酸，在動物腎功能正常情況下，尿酸可正常排泄，但予以高鈣高蛋白復合日食飼喂時，高鈣引發腎小管上皮細胞損害，使腎功能受損，飼料中的高蛋白會產生大量的尿酸，從而促進尿酸積聚，導致典型的痛風病。實驗結果顯示：高鈣高蛋白日糧成模率最高，提示高鈣、高蛋白聯合作用更易引起高尿酸血癥［5］。

易發生痛風的階段是雞25～45日齡，因此養禽戶一般會在雞45日齡左右改用低蛋白的中期配合飼料。建立雞高尿酸血癥模型，為預防雞高尿酸血癥提供實驗依據。

由于鳥、禽類、爬行類和靈長類及人類缺乏尿酸分解酶，而其他大多數動物包括哺乳動物體內存在尿酸分解酶能將體內尿酸分解為尿囊素，隨尿液排出，所以很少在體內形成痛風結石引起損害。因此建立哺乳動物高尿酸血癥模型比較困難，所以至今尚無理想的痛風動物模型。有研究證實禽類與人類的嘌呤核苷酸代謝途徑相似，雞體內的核蛋白水解后產生核酸，降解成嘌呤類物質代謝成尿酸，其過程中與人類一樣，當日食中含高量蛋白質及核蛋白時，生成尿酸的量大大增加。同時雞體內同樣缺乏尿酸酶，其嘌呤代謝的最終產物亦為尿酸，增加嘌呤吸收、合成以及減少尿酸降解和排泄，可使血尿酸含量增加，從而引發雞高尿酸血癥，該病理過程與人相似。［9］故研究雞高尿酸血癥模型對探討人類高尿酸血癥和痛風的防治也有重要意義。

4 小結

綜上所述，隨著飼養時間的延長，高蛋白、高鈣、高鈣高蛋白日糧均可引起雞體內尿酸鹽的明顯升高，其中高蛋白組和高鈣高蛋白組血尿酸值達到了雞高尿酸血癥標準，成功復制了雞高尿酸血癥模型。試驗結果顯示，高蛋白日糧成模最快，而高鈣高蛋白日糧成模率最高。

［1］張超，曹克光，楊崇青，等.高尿酸血癥及尿酸性腎病動物模型的建立及應用［J］.實驗動物科學與管理.1999，16（4）：18－21.

［2］劉小青，張冰.鵪鶉高尿酸血癥模型建立初探［J］.中國病理生理雜志，2001，17（10）：1038－1040.

［3］王圣瑾.雞高尿酸血癥模型的建立和復方中草藥對模型雞療效觀察［D］.合肥：安徽農業大學，2010.

［4］蘇友新，陳偉宏，王和鳴，等.痛風寧顆粒對實驗性雞痛風性關節炎的影響［J］.中國骨傷，2003，16（5）：275－277.

［5］邱許，黃有才，蔣建兵.對蛋雞痛風癥的病因調查研究［J］.禽業科技，1997，13（7）：29－30.