連樸飲傳統(tǒng)煎劑與中藥配方顆粒中鹽酸小檗堿的含量比較Δ

羅秀瓊，馮 華（遵義市食品藥品檢驗所，貴州遵義 563002）

連樸飲出自《霍亂論》，處方由制厚樸6 g、川黃連3 g、石菖蒲3 g、制半夏3 g、香豉9 g、焦梔子9 g、蘆根60 g組成，具有清熱化濕、理氣和中之功效，臨床上主要用于治療濕熱霍亂、上吐下瀉、胸脘痞悶、心煩躁擾、小便短赤、舌苔黃膩、脈滑等。處方中川黃連是毛茛科植物黃連的一種，為黃連的道地藥材。在此處方中川黃連量雖少但卻作為君藥發(fā)揮主要的藥理作用，而在川黃連中發(fā)揮主要功效且含量最高的成分為鹽酸小檗堿，約含5%～8%。用分煎法（中藥配方顆粒）與合煎法（傳統(tǒng)煎劑）制備的連樸飲中藥復(fù)方煎劑，其有效成分的含量有何變化，其藥理作用又有何變化，一直是中醫(yī)藥理論和臨床實踐中值得探討的課題；特別是近年來中藥配方顆粒逐漸在臨床上推廣應(yīng)用，更引起大家的重視。本試驗以中藥經(jīng)方連樸飲中的有效成分鹽酸小檗堿作為指標(biāo)，采用高效液相色譜（HPLC）法比較連樸飲傳統(tǒng)煎劑與中藥配方顆粒中鹽酸小檗堿的含量差異，以探索中藥復(fù)方制劑不同制法對其有效成分提取量的影響。

1 材料

1.1 儀器

1525型HPLC儀、紫外檢測器（美國Waters公司）；KQ-300 DE型超聲儀（北京中儀友信科技有限公司）。

1.2 試劑

鹽酸小檗堿對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：110749-200572）；甲醇、乙腈為色譜純，水為娃哈哈純凈水。

1.3 藥材

制厚樸、川黃連、石菖蒲、制半夏、香豉、焦梔子、蘆根均由貴州遵義市醫(yī)藥有限公司提供，均經(jīng)遵義市食品藥品檢驗所鄧順超副主任中藥師鑒定為真品，均符合2010年版《中國藥典》（一部）規(guī)定；中藥配方顆粒由貴州省三仁堂藥業(yè)有限公司制備。

2 方法與結(jié)果

2.1 處方與煎制

2.1.1 處方 制厚樸6 g、川黃連3 g、石菖蒲3 g、制半夏3 g、香豉9 g、焦梔子9 g、蘆根60 g。

2.1.2 傳統(tǒng)煎劑（合煎劑）的煎制 按處方取各藥材，加相當(dāng)于藥材8倍量的水煎煮，保持微沸30 min，倒出煎液；藥渣再加8倍量的水煎煮20 min。合并2次煎液，減壓干燥成干粉。

2.1.3 中藥配方顆粒（分煎劑）的煎制 分別稱取上述處方量的藥材，分別加8倍量的水煎煮2次，每次保持微沸30 min，制備各藥材的煎液，減壓干燥成干粉，分別制粒后混勻。

兩者的干粉率均約20%。

2.2 色譜條件

色譜柱：Diamonsil C18（200 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-0.1%磷酸溶液（50∶50，V/V）（每100 ml加十二烷基磺酸鈉0.1 g）；流速：1.0 ml/min；檢測波長：265 nm[1-3]；柱溫：30℃。

2.3 溶液的制備

2.3.1 對照品貯備液 精密稱取鹽酸小檗堿對照品適量，加甲醇制成每1 ml含鹽酸小檗堿1 mg的溶液，作為對照品貯備液。

2.3.2 傳統(tǒng)煎劑（合煎劑）的供試品溶液 取合煎法制得的干粉約2.0 g，精密稱定，置100 ml量瓶中，用適量開水溶解，放冷后定容。精密吸取5 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇適量，超聲處理（功率：250 W，頻率：20 kHz）25 min，取出，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，取續(xù)濾液，用0.45 μm微孔濾膜濾過，即得傳統(tǒng)煎劑的供試品溶液。

2.3.3 中藥配方顆粒（分煎劑）的供試品溶液 稱取分煎法制得的中藥配方顆粒約2.0 g，精密稱定，照“2.3.2”項下方法制備中藥配方顆粒的供試品溶液。

2.3.4 陰性對照溶液 按“2.1.2”項下方法制備不含川黃連的陰性樣品，再按“2.3.2”項下方法制備陰性對照溶液。

2.4 干擾試驗

取鹽酸小檗堿對照品溶液、傳統(tǒng)煎劑（合煎劑）供試品溶液及不含川黃連的陰性對照溶液各20 μl注入HPLC儀測定。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在此色譜條件下，鹽酸小檗堿峰與其他組分峰分離完全，陰性對照在與鹽酸小檗堿峰相同的保留時間處無干擾。色譜見圖1。

圖1 高效液相色譜圖Fig 1 HPLC chromatograms

2.5 線性關(guān)系考察

分別精密量取質(zhì)量濃度為1.0012 mg/ml的鹽酸小檗堿對照品貯備液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，即得系列質(zhì)量濃度的鹽酸小檗堿對照品溶液，分別進樣20 μl，照上述色譜條件測定峰面積。以進樣量（x）為橫坐標(biāo)，峰面積積分值（y）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為y＝5.0×106x+1.0×106（r＝0.9992，n＝5）。結(jié)果表明，鹽酸小檗堿進樣量在2.0～10.0 μg范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系。

2.6 精密度試驗

精密吸取同一對照品溶液20 μl，按“2.2”項下色譜條件重復(fù)進樣5次，測定峰面積，結(jié)果，RSD＝0.28%（n＝5），表明儀器精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗

取同一供試品溶液[傳統(tǒng)煎劑（合煎劑）]適量，分別于室溫下放置0、4、8、16、24h，取20μl進樣，測定峰面積。結(jié)果，RSD＝1.03%（n＝5），表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 重復(fù)性試驗

精密稱取同一樣品[傳統(tǒng)煎劑（合煎劑）]適量，按“2.3.2”項下方法平行制備6份供試品溶液，再按“2.2”項下色譜條件進樣測定。結(jié)果，RSD＝1.2%（n＝6），表明本方法重復(fù)性良好。

2.9 加樣回收率試驗

精密稱取已知含量（每1 g含7.96 mg）的[傳統(tǒng)煎劑（合煎劑）]樣品粉末適量，共6份，分別置50 ml量瓶中，用適量開水溶解，再分別精密加入鹽酸小檗堿對照品溶液（質(zhì)量濃度為1.661mg/ml）5ml，放冷后加甲醇定容，搖勻，取續(xù)濾液，用0.45 μm微孔濾膜濾過，按“2.2”項下色譜條件進樣測定，計算加樣回收率，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果（n＝6）Tab 1 Results of recovery tests（n＝6）

2.10 樣品含量測定

分別按“2.1.2”、“2.1.3”項下制備方法各制備3份樣品，再分別按“2.3.2”、“2.3.3”項下方法制備供試品溶液，照“2.2”項下色譜條件進樣測定，計算樣品中鹽酸小檗堿的含量，結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果（n＝3）Tab 2 Results of content determination of samples（n＝3）

由表2可見，連樸飲分煎劑中鹽酸小檗堿的平均含量比合煎劑高。

3 討論

采用HPLC法測定中藥復(fù)方制劑中鹽酸小檗堿的含量，文獻報道可用多種不同組成的流動相系統(tǒng)[4-7]。本試驗參考文獻和《中國藥典》方法，選用乙腈-0.1%磷酸溶液（50∶50，V/V）（每100 ml加十二烷基磺酸鈉0.1 g）作為流動相。結(jié)果表明，鹽酸小檗堿峰形較為理想，與雜質(zhì)峰能達(dá)到基線分離。

連樸飲傳統(tǒng)煎劑（合煎劑）與中藥配方顆粒（分煎劑）中鹽酸小檗堿的含量比較結(jié)果表明，中藥配方顆粒（分煎劑）比傳統(tǒng)煎劑（合煎劑）中有效成分鹽酸小檗堿的含量高。原因可能是傳統(tǒng)煎劑（合煎劑）中各藥材之間的相互化學(xué)作用，如沉淀反應(yīng)等導(dǎo)致其結(jié)果偏低。傳統(tǒng)煎劑（合煎劑）中有效成分含量較低是否為一個普遍現(xiàn)象，還有待廣泛的研究。

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