毛細管氣相色譜法測定甲磺酸伊馬替尼原料藥中有機溶劑殘留量

于 生，單鳴秋，邵 霞，郭 戎，丁安偉（南京中醫藥大學，南京 210046）

甲磺酸伊馬替尼（Imatinib mesylate）是一種高效特異的酪氨酸激酶抑制劑，分子式為C29H31N7O·CH4O3S。臨床上用于治療慢性粒細胞白血病（CML）急變期、加速期或α-干擾素治療失敗后的慢性期患者，不能手術切除或發生轉移的惡性胃腸道間質腫瘤（GIST）患者[1]。

甲磺酸伊馬替尼在合成過程中使用了丙酮、甲醇、異丙醇、甲苯與吡啶等有機溶劑。本研究按照2010年版《中國藥典》二部附錄ⅧP[2]的要求及人用藥品注冊技術要求國際協調會（ICH）的有機溶劑殘留量指導原則[3]，采用毛細管氣相色譜法對樣品中的殘留溶劑進行了檢查并進行了方法學研究。結果表明，建立的方法簡便、靈敏，結果準確、可靠[4-5]。

1 材料

GC-4890D型氣相色譜儀、氫離子火焰檢測器（FID）、Cerity色譜工作站（美國Agilent公司）。

甲磺酸伊馬替尼原料藥（自制，批號：201001、201002、201003，純度：均大于99.0%）；丙酮、異丙醇、三氯甲烷、甲苯、吡啶與二甲基亞砜（DMSO）均為分析純，甲醇為色譜純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：HP-INNOWAX毛細管柱（30 m×0.53 mm，2.65 μm）；進樣口溫度：150℃；FID溫度：180℃；色譜柱升溫程序：40℃，保持7 min，30℃/min升溫至60℃，保持12 min，再30℃/min升溫至180℃，保持5 min；載氣：氮氣，壓力：5 Psi；燃氣：氫氣，壓力：300 kPa；助燃氣：空氣，壓力：390 kPa；進樣量：1 μl。

在上述色譜條件下，取“2.2～2.3”項下對照品溶液和供試品溶液進樣分析，結果各溶劑之間分離良好，色譜見圖1。

圖1 氣相色譜圖A.對照品；B.供試品；1.丙酮；2.甲醇；3.異丙醇；4.三氯甲烷；5.甲苯；6.吡啶Fig 1 GC chromatogramA.substance control；B.test samples；1.acetone；2.methanol；3.isopropanol；4.trichloromethane；5.toluene；6.pyridine

2.2 溶液的制備

內標溶液：取三氯甲烷適量，加DMSO溶解并制成每1 ml約含60 mg的內標溶液。

對照品貯備液：分別精密稱取丙酮508.6 mg、甲醇298.5 mg、異丙醇512.9 mg、甲苯89.2 mg、吡啶40.9 mg，置于同一50 ml量瓶中，加DMSO溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對照品貯備液。

供試品溶液：精密稱取甲磺酸伊馬替尼原料藥1 g，置于10 ml量瓶中，精密加入內標溶液1 ml，再加DMSO溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3 線性關系考察

精密量取對照品貯備液0.1、0.5、1.0、2.5、5.0、10.0 ml，各置于100 ml量瓶中，分別精密加入內標溶液10 ml，再加DMSO稀釋至刻度，搖勻，即得系列濃度對照品溶液。分別精密量取1 μl，進樣測定，記錄色譜圖。以各待測溶劑與內標峰面積比值（y）對各待測溶劑質量濃度（x，μg/ml）進行線性回歸，結果見表1。

表1 各溶劑線性關系Tab 1 Linear relation of organic solvents

2.4 定量限與檢測限試驗

將各對照品貯備液逐步稀釋，分別以信噪比約為10和2～3為定量限和檢測限，測得丙酮、甲醇、異丙醇、甲苯與吡啶的定量限分別為15、20、24、16、15 ng，檢測限分別為5、5、8、4、3 ng。

2.5 精密度試驗

精密量取對照品貯備液5.0 ml，置于100 ml量瓶中，精密加入內標溶液10 ml，再加DMSO稀釋至刻度，搖勻。分別精密量取1 μl，連續進樣測定，記錄色譜圖。計算得丙酮、甲醇、異丙醇、甲苯、吡啶與內標峰面積比值的RSD分別為2.16%、2.20%、2.16%、2.17%、2.14%（n＝6）。

2.6 穩定性試驗

分別精密量取“2.5”項下溶液1 μl，于0、1、2、4、6、8 h進樣測定，記錄色譜圖。計算得丙酮、甲醇、異丙醇、甲苯、吡啶與內標峰面積比值的RSD分別為2.13%、3.09%、1.11%、2.97%、2.91%。

2.7 重復性試驗

取甲磺酸伊馬替尼原料藥（批號：201001）6份，按照“2.2”項下方法，制備成供試品溶液，進樣測定，記錄色譜圖，以峰面積比值按內標法計算各有機溶劑殘留量。結果，丙酮、甲醇和甲苯在該批樣品中未檢出，異丙醇平均含量為0.1237%（RSD＝1.16%），吡啶平均含量為0.0073%（RSD＝1.45%）。

2.8 回收率試驗

精密稱取已知各溶劑含量的甲磺酸伊馬替尼原料藥（批號：201001）9份，每份1 g，置于10 ml量瓶中，第1～3份分別加入對照品貯備液0.4 ml，第4～6份分別加入對照品貯備液0.5 ml，第7～9份分別加入對照品貯備液0.6 ml，再分別精密加入內標溶液1 ml，加DMSO溶解并稀釋至刻度，搖勻。分別精密量取1 μl，進樣測定，記錄色譜圖。以峰面積比值按內標法計算得丙酮、甲醇、異丙醇、甲苯與吡啶的回收率。結果平均回收率為97.71%～102.13%，詳見表2。

表2 回收率試驗結果（n＝9）Tab 2Results of recovery test（n＝9）

2.9 樣品中有機溶劑殘留量測定

按照“2.2”項下方法，取3批原料藥樣品制備成3批供試品溶液，進樣測定，記錄色譜圖，以峰面積比值按內標法計算各有機溶劑殘留量。結果，3批原料藥中均未檢出丙酮、甲醇和甲苯，異丙醇和吡啶殘留量均低于《中國藥典》和ICH的有關限度規定，詳見表3（表中“-”表示未檢出）。

3 討論

表3 樣品測定結果（%%，n＝3）Tab 3Results of content determination of samples（%%，n＝3）

殘留溶劑多為揮發性溶劑，在原料藥中含量較低，而且由于氣相色譜法進樣量小，因此相比外標法而言，內標法可以減少儀器或操作帶來的誤差。筆者經過前期試驗篩選，選擇三氯甲烷為本試驗的內標物，其與各待測溶劑均能達到良好分離。

甲磺酸伊馬替尼易溶于水，但是水直接進樣對毛細管柱損害較大，因此考慮選用有機溶劑。本試驗中5種待測溶劑的沸點差異較大，最低的丙酮為56℃，最高的吡啶為115.3℃，而且極性差異也較大。考慮到原料藥的溶解性和溶劑之間的分離度，選擇沸點更高的DMSO（153℃）為溶劑。

本研究建立的氣相色譜法可同時測定5種有機溶劑殘留量，且方法操作簡便、重復性好，各方法學考察試驗中的RSD均小于5%，結果準確可靠。

[1]王晨.甲磺酸伊馬替尼抗腫瘤作用的研究[J].天津藥學，2005，17（4）：63.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：二部[S].2010年版.北京：中國醫藥科技出版社，2010：686、附錄61-65.

[3]陳立亞，于寶珠，趙慧芳.ICH指導原則與各國現行藥典藥品的殘留溶劑分析方法概述[J].中國藥事，2005，19（9）：542.

[4]李春燕，屠婕紅，傅應華.毛細管氣相色譜法同時檢測丙酸氯倍他索原料藥中4種有機溶劑殘留量[J].中國藥房，2011，22（29）：2756.

[5]吳春麗，雷偉，李幸，等.GC法檢測氟康唑原料藥中的有機溶劑殘留量[J].中國藥房，2011，22（25）：2390.