色診客觀化研究在STZ介導(dǎo)2型糖尿病模型大鼠皮膚相關(guān)指標(biāo)改變中的應(yīng)用＊

翟 煦，榮培晶，王宏才，孟 宏，李少源，黃 鳳，何孟冬，王 霞，宋 杰

(中國中醫(yī)科學(xué)院針灸研究所，北京 100700)

2型糖尿病(T2DM)是當(dāng)今發(fā)病率較高且可產(chǎn)生危險后果的慢性疾病，它可引起多個系統(tǒng)多重組織層次的并發(fā)癥。T2DM確診前有不少人以皮膚病就診，如認(rèn)識T2DM合并皮膚病的特點，可為早期診斷T2DM提供線索。受中醫(yī)色診啟發(fā)，本研究確定一定的皮膚客觀指標(biāo)，建立T2DM模型大鼠，應(yīng)用德國Courage+Khazaka公司產(chǎn)MPA 9無創(chuàng)性皮膚測量系統(tǒng)，測定鏈脲佐菌素(STZ)介導(dǎo)的糖尿病大鼠模型造模后不同部位皮膚皮膚含水量(Stratum Corneum Hydration，SCH)、水分散失(Transepidermal Water Loss，TEWL)、紅斑指數(shù)(Erythema Index，EI)、黑色素指數(shù) (Melanin Index，MI)、色差值(Chromatic aberration，L.a.b.)等方面指標(biāo)，旨在從動物實驗方面觀察糖尿病模型大鼠的皮膚指標(biāo)改變，探討中醫(yī)色診在診斷糖尿病方面的意義。

1 材料與方法

1.1 動物與分組

SPF級健康雄性Sprague Dawley(SD)大鼠26只(180g～220g)，購于中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物中心(合格證號SCK-(軍)2007-004)。實驗遵循科技部2006年9月頒布的《關(guān)于善待實驗動物的指導(dǎo)性意見》相關(guān)規(guī)定，所有大鼠均給予普通顆粒料飼養(yǎng)，自由飲水，每籠5只，適應(yīng)性飼養(yǎng)7d;隨機(jī)選取10只為空白對照組(Control Group)，余下為模型組(Modeling Group)16只。

1.2 主要試劑與儀器

血糖測定應(yīng)用拜安捷2型(拜耳公司Bayer，德國)快速血糖儀，皮膚測指標(biāo)試儀器采用Multi Probe Adapter 9(MPA 9，Courage+Khazaka公司，德國)皮膚測試系統(tǒng)，鏈脲佐菌素(Sigma公司)。

1.3 試驗方法

1.3.1 造模方法 參照 Schmeichel［1］的造模方法進(jìn)行改進(jìn)，整個造模觀察過程(30d)均以高脂飼料(脂肪32%，蛋白質(zhì)13%，碳水化合物55%)喂養(yǎng)，禁食12h后按照 1%濃度鏈脲佐菌素(Streptozotocin，STZ)50mg/kg腹腔注射，72h后使用快速血糖儀測尾尖血糖，＞16.7mmol/L即視為造模成功［2］。在第15天、第30天重復(fù)測量血糖，并剔除血糖小于16.7mmol/L及死亡大鼠。空白對照組給予普通飼料飼養(yǎng)。

1.3.2 指標(biāo)檢測方法 所有大鼠于造模前1d剃去腹部(胸骨劍突正下方2cm×2cm區(qū)域)、背側(cè)(L1-L6節(jié)段左右兩側(cè)2cm×2cm區(qū)域)鼠毛暴露皮膚，應(yīng)用MPA 9皮膚測量儀測量以上3處SCH、TEWL、EI、MI、L.a.b.(背部指標(biāo)左右相加取均值)。按照儀器使用說明，SCH、TEWL、EI、MI、L.a.b.5個測量探頭依次接觸于待測大鼠皮膚并保持?jǐn)?shù)秒，待機(jī)器自動記錄并發(fā)出測量成功提示音后方可離開，同時記錄系統(tǒng)軟件顯示的自校正數(shù)據(jù)。造模后第30天重復(fù)測量大鼠上述皮膚指標(biāo)。以上實驗過程均在上午8∶00～12∶00進(jìn)行，室溫23℃ ±1℃、濕度50%±60%無風(fēng)室內(nèi)進(jìn)行。

1.4 統(tǒng)計方法

2 結(jié)果

表1顯示，造模前2組大鼠(模型組16只，空白組10只)各部分皮膚指標(biāo)比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。

表1 造模前模型組與空白對照組不同部位皮膚指標(biāo)

表2 造模后模型組與空白對照組不同部位皮膚指標(biāo)

表3 造模前后模型組不同部位皮膚指標(biāo)

造模后60d剔除未成模大鼠及死亡大鼠(共3只)，空白對照組(10只)、模型組(13只)比較，模型組大鼠左右側(cè)背部及腹部皮膚造模后有一定程度的失水，與空白組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，其中腹部差異有極顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);模型組大鼠背部水分散失下降，而腹部水分散失增加;大鼠背部血紅素造模后較造模前下降，而腹部血紅素較造模前顯著升高(P＜0.05);大鼠背部黑色素造模后也較造模前降低，但腹部前后無明顯統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);大鼠背側(cè)皮膚與腹部皮膚L值則較造模前下降;大鼠背側(cè)皮膚a值較造模前降低，腹部皮膚則較造模前顯著升高(P＜0.01);大鼠背側(cè)皮膚與腹部皮膚b值則較造模前升高。

3 討論

“望色”是中醫(yī)“望診”的重要組成部分。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，皮膚色澤是臟腑氣血之外榮，因而望色能了解臟腑功能狀態(tài)和氣血盛衰情況。《素問·脈要精微論》云:“夫精明五色者，氣之華也。”五行學(xué)說和藏象理論認(rèn)為，五色(青、黃、赤、白、黑)配五臟，故五色變化能反映相應(yīng)臟腑的精血盈虧，光澤的變化能反映精氣的盛衰。還根據(jù)病人面部五色變化進(jìn)行病證的臟腑定位診斷。如《靈樞·五色》提到:“以五色命臟，青為肝，赤為心，白為肺，黃為脾，黑為腎”;還將這一方法應(yīng)用于具體病證的鑒別診斷之中，如《素問·痿論》:“肺熱者色白而毛敗，心熱者色赤而絡(luò)脈溢，肝熱者色蒼而爪枯，脾熱者色黃而肉蠕動，腎熱者色黑而齒槁。”另外，《素問》中所提到的色之善惡也是對于病理面色較早的評價與辨別。如《素問·五臟生成》的“青如翠羽”、“赤如雞冠”、“黃如蟹腹”、“白如豚膏”、“黑如烏羽”之善色，和“青如草茲”、“赤如丕血”、“黃如枳實”、“白如枯骨”、“黑如炲”之惡色。

皮膚含水量(SCH)測定即皮膚角質(zhì)層(SC)的含水量，水分散失(TEWL)是測量經(jīng)皮膚表面水分的蒸發(fā)，它們同是反映皮膚完整性的重要參數(shù)，SCH和TEWL的測量被廣泛地應(yīng)用于對皮膚屏障的描述［3～5］。皮膚的顏色主要取決于黑色素的含量和分布。對于皮膚顏色變化的判定，近年來國外普遍采用國際照明委員會(CIE，International Commission on Illumination)規(guī)定的色度系統(tǒng)(L.a.b.色度系統(tǒng))，與皮膚黑色素和血紅素測量儀測量皮膚的色度變化［6］。血紅素和黑色素的測定基于光吸收的原理，通過檢測儀探頭中發(fā)出的強(qiáng)度恒定的、波長長度為568、660、880nm的光照射在皮膚表面后根據(jù)發(fā)射回來的光計算紅斑指數(shù)(EI)和黑素指數(shù)(MI)，分別代表皮膚中血紅素和黑色素的含量。很多研究證明，皮膚屏障功能下降(TEWL增加、SCH降低)是干燥性皮膚病和其他多種皮膚病的病因［7～10］。Kim DW［11］等人發(fā)現(xiàn)，紅斑、丘疹評分與TEWL明顯相關(guān)(P＜0.05)，而干燥、苔蘚樣變評分與SCH明顯相關(guān)(P＜0.05)。Sakai S等［12］對49名 T2DM 患者進(jìn)行皮膚屏障功能測試，發(fā)現(xiàn)高空腹血糖(FPG)組小腿伸側(cè)和前臂屈側(cè)的SCH低于低FPG組，高糖化血紅蛋白(HbAlc)組前臂屈側(cè)的TEWL低于低HbAlc組，T2DM患者皮膚屏障功能的降低類似于老年性干燥性皮膚的變化。

實驗結(jié)果顯示，造模后60d模型組與空白對照組相比，背側(cè)和腹側(cè)的SCH減少，提示STZ大鼠皮膚加速老化。而TEWL在背側(cè)和腹側(cè)則體現(xiàn)出不同的趨向，顯示出不同部位皮膚保水屏障的紊亂。L值在背、腹側(cè)均較造模前低，提示造模成功后，STZ大鼠皮膚亮度顯著下降，失去皮膚原有光澤;而不同部位b值較造模前均升高顯示出皮膚變黃;a值背腹側(cè)體現(xiàn)出不同的變化，左右背側(cè)a值較造模前下降，提示皮膚紅色度降低，而腹部紅色度升高，這與EI所體現(xiàn)的相一致;MI背側(cè)與腹側(cè)也有差異，與對照組相比STZ大鼠黑色素值背側(cè)降低，而腹側(cè)組間差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，提示STZ大鼠背部皮膚變白，而腹部皮膚變化不明顯。STZ造模后引起的血糖變化，可能是是改變皮膚正常生理特點和外觀的重要因素。STZ大鼠皮膚呈現(xiàn)出干燥、晦暗以及皮色改變。“望而知之謂之神”，望診是中國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)診法的重要組成部分，而這種主觀診斷有望形成客觀精確的量化指標(biāo)，無創(chuàng)性檢測指標(biāo)也有可能成為望診的輔助檢查手段。

4 結(jié)論

色診作為中醫(yī)傳統(tǒng)望診法的一部分可以運用現(xiàn)代測量儀器進(jìn)行量化研究;STZ介導(dǎo)的T2DM大鼠出現(xiàn)皮膚屏障的紊亂和色澤的改變，這種改變可以通過無創(chuàng)性檢測進(jìn)行量化分析，指標(biāo)群的改變可能對疾病的無創(chuàng)監(jiān)測具有臨床診斷意義。無創(chuàng)性皮膚指標(biāo)檢驗可能成為望診的輔助檢查手段。

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