氧氟沙星滴眼液無菌檢查方法的建立

趙雪衛 王紅然 張西果(石家莊格瑞藥業有限公司)

氧氟沙星滴眼液具有抗菌譜廣、抗菌活性強的特點，對革蘭氏陰性菌、陽性菌群均有較強的抗菌作用。 對葡萄球菌、化膿性鏈球菌、溶血性鏈球菌、腸球菌、肺炎球菌、大腸桿菌、檸檬酸細菌屬、肺炎桿菌、腸菌屬、沙雷氏菌屬、變形桿菌屬、銅綠假單胞菌、流感嗜血桿菌、不動桿菌屬、彎曲桿菌屬、衣原體屬敏感性菌種等感染有效。 因此被用于治療細菌性結膜炎、角膜炎、角膜潰瘍、淚囊炎、術后感染等外眼感染。 《中國藥典》2010 年版二部將滴眼液的微生物限度檢查項目修訂為無菌檢查項目。 根據《中國藥典》2010 年版二部的規定當建立藥品的無菌檢查方法時，應進行方法的驗證，以證明所采用的方法適用于該藥品的無菌檢查。針對氧氟沙星滴眼液的抑菌性質采用適宜的方法消除其抑菌活性，建立了該品種的無菌檢查方法。

表1 陽性對照試驗菌不同沖洗量的結果

一、 樣品與菌種

1.1 樣品：氧氟沙星滴眼液。 規格：5ml∶15mg；批號：121101、121102、121103

1.2 驗證試驗用菌種：大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉六種陽性對照試驗菌，菌種來源于中檢所。

二、 實驗與結果

2.1 菌液制備：按《中國藥典》2010 年版二部附錄XI H 進行。

2.2 供試品制備：取樣品原液作為供試品，每筒過濾供試品10 支。

2.3 薄膜過濾法：取一次性全封閉集菌三聯培養器，先用含0.5%聚山梨酯80 的PH7.0 無

菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液少量潤濕濾膜。 將供試品30 支通過培養器， 供試品全部過濾完畢后， 用含0.5%聚山梨酯80 的PH7.0 無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液沖洗， 細菌每筒分別沖洗400ml、500ml、600ml，真菌每筒分別沖洗300ml、400ml、500ml，每次沖洗100ml， 在最后一次沖洗液中加入小于100cfu 的各陽性對照試驗菌，過濾，每筒培養器中加入100ml 含0.2mol/L 硫酸鎂5ml 的硫乙醇酸鹽流體培養基或改良馬丁培養基， 作為試驗組筒。 另取已潤濕的全封閉培養器加入陽性對照試驗菌和相應培養基，作為陽性對照筒，再取已潤濕的二聯全封閉培養器，加入相應培養基，作為陰性對照筒。 按規定溫度培養3～5 天，觀察不同沖洗量對六種陽性對照試驗菌的影響，結果見表1。

三、討論

3.1 氧氟沙星滴眼液是喹諾酮類藥物，抗菌譜廣，抗菌性強，薄膜過濾時易吸附殘留于濾膜上，沖洗不干凈，即使濃度低，也抑制部分陽性試驗菌的生長。 因此在樣品過濾沖洗后與培養基中加入含Fe+2、Mn+2、Mg+2 等離子的化合物， 這些離子與喹諾酮類藥物絡合，能形成穩定的六元環絡合物。 掩蓋氟喹諾酮類藥物的抗菌活性基團。使其抗菌活性消失。本文采用的是含0.5%聚山梨酯80 的PH7.0 無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液作為沖洗液，沖洗后加培養基， 于100ml 硫乙醇酸鹽流體培養基中加5ml 滅菌的0.2mol/L 硫酸鎂溶液，大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌均生長良好。 5ml 滅菌的0.2mol/L 硫酸鎂溶液對這四種菌的生長也幾無影響。 培養基中加滅活劑硫酸鎂，可減少沖洗量。

3.2 氧氟沙星滴眼液對真菌也幾無抑制作用，但滴眼液中含羥苯乙酯等防腐劑，因此白色念珠菌、黑曲霉驗證也要進行適當的沖洗，才能保證對其無抑菌作用。

[1]國家藥典委員會；中華人民共和國藥典（二部）；北京：中國醫藥科技出版社，2010 年版，附錄：103-107。

[2]高紅 李凱 朱慧琴；鹽酸左氧氟沙星滴眼液無菌檢查方法的建立；中國科技縱橫雜志，2011, 21（6）：357-357。