AR和HGF在大腸癌組織中的表達及其與肝轉移的關系

李美琴，黃玲莎，朱 波，黃文成，趙慧柳，李佩章

（廣西醫科大學附屬腫瘤醫院 檢驗科，廣西 南寧530021）

大腸癌（colorectal cancer，CRC）是臨床最常見的惡性腫瘤之一，其發病率和死亡率呈上升趨勢，術后5年生存率在50%－55%。治療失敗的原因是術后的局部復發和轉移。肝臟是大腸癌最常見、15%－25% 患者初診時已存在肝轉移［1］，有30%－40%的患者出現晚期肝轉移。大腸癌術后約有50%在五年內出現肝轉移。而大腸癌肝轉移不經任何治療的自然生存期，平均為6－10個月。早期診斷肝轉移灶具有重要的臨床意義。雙向調節因子（Amphiregulin，AR）屬EGF家族成員，有促進細胞侵襲和遷移的作用［2］。研究表明［3］，肝細胞生長因子（hepato－eyte growth factor，HGF）及其受體（C－met）在相當一部分人類腫瘤中存在高表達。并與惡性腫瘤發生、發展及轉移密切相關。本研究旨在探討AR和HGF的表達與大腸癌的發生、發展和肝轉移的關系及AR和HGF之間有無相關性。

1 材料與方法

1.1 標本來源 廣西醫科大學附屬腫瘤醫院胃腸外科2009－01至2011－12大腸癌標本207例，男120例，女87例，年齡19－82歲，中位年齡50.5歲。直腸癌120例，結腸癌87例。根據2009年UICC TNM分期：Ⅰ期18例，Ⅱ期81例，Ⅲ期51例，Ⅳ期57例；其中淋巴結轉移75例，肝轉移60例，同時有淋巴結和肝轉移21例。肝轉移以病理診斷為標準。

1.2 試劑與方法 兔抗人AR多克隆抗體及DAB顯色劑購自長沙贏潤生物技術有限公司，兔抗人HGF單克隆抗體購自武漢博士德生物工程有限公司。采用免疫組織化學技術，按試劑盒說明書操作。

1.3 結果判定標準 AR在細胞核或胞漿中出現棕黃色顆粒為陽性，HGF在細胞膜或細胞質中出現棕黃色顆粒為陽性。結果判斷采用常用的半定量計分法：①選染色均勻的陽性表達區域，以著色細胞占視野細胞總數的多少計分：0分：≤5%；1分：6%－25% ；2 分：26%－50% ；3 分：51%－75%；4 分：＞75%。②顯色度計分：高倍鏡（×400）下取表達最強的部位，按顯色程度計分，顯色與背景相似者為0分；顯色淺，略高于背景為1分；中度顯色，明顯高于背景為2分；強染，顯色深棕色為3分。③總積分：將上述兩種積分乘積為0表示陰性（一），＞1分為陽性，其中1－2分表示弱陽性（＋），3－4分表示陽性（＋＋），≥5分表示強陽性（＋＋＋）。

1.4 統計學方法 采用SPSS16.0統計學軟件對實驗數據進行分析，計數資料用χ2檢驗和秩和檢驗，等級資料用Spearman等級相關分析，以P≤0.05為有統計學意義。

2 結果

2.1 大腸癌中AR和HGF表達水平與臨床病理因素的關系 AR和HGF的表達均與大腸癌瘤體大小、浸潤深度、TNM分期、淋巴結轉移及肝轉移有關（P＜0.05），而與患者性別、年齡、部位無關（P＞0.05）。見表1。

表1 AR、HGF表達與大腸癌臨床病理參數的關系

2.2 AR和HGF在大腸癌表達的相關性（表2）AR的表達和HGF的表達顯著相關（P＜0.01）。

表2 AR和HGF在207例大腸癌患者表達的相關性（例）

3 討論

AR又名雙向調節因子，是人乳腺癌細胞株MCF－7識別的肝素結合糖基化蛋白，通過與表皮生長因子受體（Epidermal growth factor receptor，EGFR）結合發揮生物學作用，主要作用是調控細胞擴增。在研究AR與腫瘤的惡性表型關系時，發現AR導致EGFR下調紊亂的現象，EGFR下調紊亂導致了EGFR蛋白的過度表達，這種過度表達對腫瘤細胞的擴增有明顯的促進作用。因此，AR自分泌的出現，促進了癌的進展。在惡性腫瘤侵襲方面，涉及細胞外基質（Extracellular matrix，ECM）的降解，蛋白酶是必需的，AR顯示導致了 MMP－2，MMP－9等基質金屬蛋白酶的表達［4］，由于 AR還有改變E－cadherin、cytokines的作用，故AR可能在細胞遷移和侵襲中發揮作用。本研究表明AR與大腸癌瘤體大小、浸潤深度、TNM分期、淋巴結轉移及肝轉移有關（P＜0.05），而與患者性別、年齡、部位無關（P＞0.05）。這與 Michiyo Yamada等［5］報道一致。說明大腸癌腫瘤越大，分期越晚，AR表達程度越高；AR還可促進結腸癌肝轉移。提示AR在降解破壞大腸癌腫瘤細胞外基質成分、促進腫瘤血管生成及浸潤轉移等方面具有促進作用。

HGF又名離散因子（SF），是酪氨酸激酶受體C－met的配體，在生理情況下HGF和C－met短暫結合發揮生理效應，而在腫瘤組織中可同時高表達HGF和C－met，形成正反饋，導致腫瘤的無限生長和侵襲行為，Toschi L等［6］表明HGF在腫瘤侵襲、轉移及促進血管生成中發揮重要作用。本試驗發現，HGF與大腸癌淋巴結轉移呈明顯正相關，說明其可能促進淋巴侵犯，可能是HGF表達上調、通過直接或間接途徑促進淋巴管內皮增生、淋巴管數目增多，增大了腫瘤細胞與淋巴管接觸的表面積；再加上新生淋巴管管壁薄、管腔大、通透性增加，有利于腫瘤細胞進入淋巴管，從而促進腫瘤的淋巴轉移［7］。另外，TNM分期越晚，HGF表達越多，可能是中晚期高惡性大腸癌更需要新生的淋巴管生成以促進淋巴管播散、轉移［8］。本研究還顯示HGF表達與大腸癌肝轉移有關，這與Fazekas K等［9］報道一致，說明HGF在人類大腸癌組織中的表達可以作為肝轉移潛能的標志物。我們的研究結果表明，HGF的表達與大腸癌的發生、發展密切相關，是大腸癌侵襲轉移的重要因素。

本研究還顯示AR和HGF的表達顯著相關，說明AR除了與其受體EGFR結合后促進淋巴管生成和血道轉移外，與其他的生長因子如HGF等也有協同刺激作用，共同促進腫瘤轉移。由于TNM分期、淋巴管轉移和肝轉移是大腸癌預后的重要參數，因此，AR和HGF可能是大腸癌預后不良的重要標志之一。

防治大腸癌淋巴結與肝轉移已為臨床醫師高度重視，在大腸癌的發病過程中，AR與HGF的共同高表達具有協同效應，聯合檢測能在大腸癌手術治療前，對大腸癌淋巴結及肝轉移的可能性有所了解，有利于采取有效的、綜合的和個體化的治療方案。Normanno N等［10］在研究雙調蛋白（AR）反義RNA表達對乳腺癌血管生成的抑制作用時，發現AR反義RNA表達可有效抑制乳腺癌的血管生成，在乳腺癌模型上，進一步發現AR反義重組腺病毒可有效地抑制腫瘤細胞的體外增殖及體內腫瘤生長。另外一些動物實驗也證實，HGF的特異性拮抗劑NK4可以抑制腫瘤血管和淋巴管生成［11］。因此，可以通過同時抑制AR和HGF來抑制腫瘤淋巴管、血管生成，達到控制腫瘤淋巴管轉移以及遠處轉移的目的，為腫瘤的治療提供一個新思路。

［1］Jovine E，Biolehini F，Talarico F，et al.Major hepateetomy in patients with synchronous eolorectal liver metastases：whether or not a contraindication to simultaneous coloreetal and liverresection［J］？Colorectal Dis，2007，9（3）：245.

［2］Lee SB，Huang K，Palmer R，et al.The Wilms tumor suppressor WT1encodes a transcriptional activator of amphiregulin［J］.Cell，1999，98（5）：663.

［3］Lesko E，Majka M.The biological role of HGF－MET axis in tumor growth and development of metastasis［J］.Front Bios－ci，2008，13：1271.

［4］Silvy M，Giusti C，Martin PM，et al.Differential regulation of cell proliferation and protease secretion by epidermal growth factor and amphiregulin in tumoral versus normal breast epithelial cells［J］.Br J Cancer，2001，84（7）：936.

［5］Michiyo Yamada，Yasushi Ichikawa，Shigeru Yamagishi，et al.Amphiregulin Is a Promising Prognostic Marker for Liver Metastases of Colorectal Cancer［J］.Clin Cancer Res，2008，14：2351.

［6］Toschi L，Janne PA.Single－agent and combination therapeutic strategies to inhibit hepatocyte growth factor／MET signaling in cancer［J］.C／in Cancer Res，2008，14（19）：5941.

［7］Saharinen P，Tamm ela，T Karkkain enM J，et al.Lym phatic vasculature：developm ent molecular regulation and role in tumor metastasis and in flammation［J］.Trends Immunol，2004，25（7）：387.

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［9］Fazekas K，Csuka O，Koves I，et al.Experimental and clinico－pathologic studies on the function Of the HGF receptor in human colon cancer metastasis［J］.Clin Exp metastasis，2000，18：639.

［10］Normanno N，Bianco C，De Luca A，et al.Target－based agents against ErbB receptors and their ligands：a novel approach to cancer treatment［J］.Cancer，2003，10：1.

［11］Jiang WG，Davies G，Mart in T A，et al.The potential lymph angiogenic effects of hepatocyte growth f actor／scatter factor in vitro and in vivo［J］.Int J Mol Med，2005，16（4）：723.