黑龍江某豬場繁殖障礙性疾病病原分析

許云龍，佟海山，周玉龍，徐 闖，張澤才，蔣東平，許鐵男，樸范澤

（1.黑龍江八一農墾大學 動物科技學院，黑龍江 大慶163319；2.杜爾伯特蒙古族自治縣畜牧獸醫局，黑龍江 杜爾伯特166200）

種豬繁殖障礙性疾病主要以妊娠母豬發生流產、死胎、木乃伊胎、產出無活力的弱仔、畸形仔、少仔和公、母豬的不育等為特征，給養豬業帶來了巨大的經濟損失。能夠引起母豬繁殖障礙的病因比較復雜，既包括病原因素，又包括非病原因素。危害最嚴重的主要是病毒感染，如豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）、豬偽狂犬病病毒（PRV）、豬細小病毒（PPV）、豬日本乙型腦炎病毒（JEB）和豬瘟病毒（CSFV），另外豬圓環病毒（PCV）感染引起的母豬繁殖障礙也引起了人們的關注［1］。對于發生母豬繁殖障礙性疾病的豬場，只有弄清發病主要原因，采取相應的措施才能有效地控制該病的流行。

1 發病情況

黑龍江省某大型豬場的一個分場具有基礎母豬和后備母豬3 000頭，自2011年3月，該場母豬發生繁殖障礙性疾病，經調查發生繁殖障礙的母豬90%是初產。豬群中出現死胎和木乃伊胎的母豬平均每個月占33.6%（84/250），流產母豬平均每個月占1.2%（3/250）。個別胎次中伴有弱仔，出生后不久死亡。豬群其他類型的豬相對比較穩定。

2 主要癥狀及病理變化

一般初產母豬上產床后就表現為喘，高燒，厭食，產完仔以后癥狀立即消失。可見母豬產出不同發育階段的死胎和木乃伊胎。不同的流產胎兒表現的病理變化差別較大，通過剖檢觀察結果總體可見如下病理變化，有的胎兒可見皮下水腫，皮下或者內臟器官黃染，腹腔積液有纖維素性滲出物，肺水腫，腎臟有出血點，膀胱黏膜有出血點等。

3 實驗室診斷

為確診病因及進一步防控該病，本研究通過PCR方法對能夠引起豬繁殖障礙的主要病毒性病原PRRSV、CSFV、PRV、PPV 和PCV2進行了檢測，同時對相應樣本進行了細菌分離鑒定。

3.1 常見病毒檢測 根據文獻［2－3］報道設計 CSFV、PRV、PPV和PRRSV的PCR檢測引物，并進行上述病毒的PCR檢測。參照PCV2REP基因序列（GenBank登錄號：HM038020），應用 DNAStar軟件設計一對特異性引物，上游引物：5′－CGCGGGCTGGCTGAACT－3′492～508bp，下游引 物：5′－CGGGGTCTGATTGCTGGTAA－3′808～827bp，目的基因336bp（由上海生工生物工程技術服務有限公司合成）。PCV的PCR檢測如下：反應體系（25μL）：以提取的組織DNA為模板，Buffer 2.5μL，dNTPs 2.0μL，上下游引物各1.0μL（25 μmol/mL），模板1.0μL，TaqDNA 聚合酶0.65 U，MgCl22.0μL。反應程序為：94℃10min，30個循環（94℃ 40s、55℃ 40s、72℃ 1min），72℃ 10 min。為進一步證實PCR擴增得到的PPV和PCV目的基因是正確的，各隨機選擇一個樣本的目的基因進行克隆測序分析。

18頭胎兒樣本經PCR檢測結果，未檢測到CSFV、PRV和PRRSV的目的基因，檢測到了PCV和PPV目的基因，見圖1，2。PCV和PPV目的基因測序結果，經BLAST分析表明，最高同源性分別達到（PCV GenBank登 錄 號：JQ955679.1）99% 和 （PPV GenBank登錄號：DQ675456.1）100%，證明擴增得到的PCR產物為特異性的目的基因。結果PCV陽性率100%（18/18），PPV陽性率50%（9/18）。

圖1 PCV－2PCR擴增結果

3.2 細菌的分離鑒定 將無菌采集的流產胎兒肝臟、脾臟和肺臟分別接種到含有新鮮的5%綿羊血液營養瓊脂培養基和TSA培養基，進行常規細菌分離培養（需氧培養和厭氧培養），生化鑒定。結果在需氧和厭氧條件下，從流產胎兒的肝臟、脾臟和肺臟內分離到一種革蘭陽性鏈狀球菌，在血液營養瓊脂培養基上呈透明小菌落，有α溶血特征。分離菌株菊糖、棉子糖和蜜二糖陽性，甘露醇和山梨醇陰性，馬尿酸鹽陽性，精氨酸陽性，透明質酸酶試驗陰性，在6.2%NaCl中不生長等，以上生化結果基本符合豬鏈球菌生化指標［4］。經上述方法最終確定豬鏈球菌感染率17%（3/18）。

圖2 PPV PCR擴增

4 防治措施

通過上述病毒和細菌檢測結果最終確定，病死胎兒樣本中PCV2感染率100%（18/18），PPV感染率50%（9/18），豬鏈球菌感染率17%（3/18），上述病原可能是引起該豬場母豬繁殖障礙的主要病原因素。針對上述情況，我們除了采取改善營養、增強母畜抗病力、加強環境衛生條件以外，母豬在配種前增加了2次圓環病毒滅活疫苗免疫，將原來使用的PPV滅活疫苗產品進行了更換，并進一步加大在免疫環節中的監督力度，盡量避免漏免和免疫不確實等問題。針對豬鏈球菌感染，在母豬配種后每間隔30d使用高度敏感的壯觀霉素或新霉素原粉進行預防。通過上述方法的實施，顯著降低了該豬場的母豬繁殖障礙發病率。

在本次病原檢測結果中，存在PCV2、PPV和豬鏈球菌混合感染的情況，是否上述3種病原同時參與致病還有待于進一步研究，但是可以說明三者均可以垂直感染。18個胎兒樣本中PCV2陽性率100%，可見我們在關注傳統的繁殖障礙性疾病的同時，應該對PCV2引起的繁殖障礙加以重視。據不完全統計，繁殖障礙性疫病發病率達20%～40%以上，平均在30%以上給養豬業帶來很大的經濟損失。因此，應該加大對豬繁殖障礙性疾病的研究力度，保障養豬業的持續健康發展。

［1］ （美）斯特勞.豬病學［M］.9版.趙德明，張仲秋，沈建忠，主譯.北京：中國農業出版社，2008.

［2］ 劉建柱，于立權，樸范澤，等.豬瘟病毒豬細小病毒豬偽狂犬病病毒PCR檢測方法的建立［J］.中國獸醫雜志，2005，41（10）：17－19.

［3］ 劉輝，熊金鳳，鄒浩勇，等.豬瘟病毒、豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒和乙型腦炎病毒多重RT－PCR檢測方法的建立［J］.華中農業大學學報，2008，27（1）：12－18.

［4］ 李一經.獸醫微生物［M］.北京：高等教育出版社，2011：150.