涼·山·皮·寒·藥·藥·效·初·探

邵秋紅，劉 娟，2，馬萬盛，彭 詩

（1.西南大學(xué)榮昌校區(qū) 動(dòng)物醫(yī)學(xué)系，重慶 榮昌402460；2.重慶市藥效評(píng)價(jià)工程技術(shù)研究中心，重慶 榮昌402460）

涼山皮寒藥，也叫冕寧皮寒藥、雞大腿，此藥性寒，味辛苦，全草皆可以入藥，四季都可采集，有歌云：“米口袋，寒辛苦，清熱解毒黃疸除，外感發(fā)燒和痢疾，鼻血疔瘡與癰腫［1］”；涼山州一個(gè)藥農(nóng)在采藥過程發(fā)現(xiàn)后，當(dāng)?shù)厝擞脕碇委煾忻昂途弥尾挥目人裕?］，在2003年前后“非典”時(shí)期也被當(dāng)?shù)赜米鲱A(yù)防之藥。但涼山皮寒藥現(xiàn)為民間用藥未被記錄到《中藥藥典》內(nèi)，其藥效研究還未完善。

由于本藥屬于豆科的米口袋屬植物，而米口袋屬植物有很好的抑菌和抗炎效果［3－5］，又根據(jù)其多用于預(yù)防及治療感冒，特設(shè)了牛津杯法抑菌試驗(yàn)、二甲苯致小鼠耳廓腫脹法抗炎試驗(yàn)、免疫相關(guān)試驗(yàn)（T細(xì)胞百分含量及免疫器官增重指數(shù)）、負(fù)重游泳試驗(yàn)作為“皮寒藥”的藥效初探，為深入研究開發(fā)利用這一藥物資源奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 昆明系小鼠，體重20±2g，雄鼠，由瀘州醫(yī)學(xué)院提供。

1.1.2 試驗(yàn)用菌種 巴氏桿菌、白色念珠菌、鴨疫里默氏菌、大腸桿菌K88、金黃色葡萄球菌、A型魏氏梭菌（中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所）。

1.1.3 主要藥品 涼山皮寒藥水針劑，參照文獻(xiàn)［6］制成，藥液濃度為生藥1g/mL（西南大學(xué)榮昌校區(qū)中藥研究與開發(fā)室研發(fā)制備）；地塞米松磷酸鈉注射液（西安康華制藥廠，批號(hào)：20110108）；α－醋酸萘酯（上海信然生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：20110906）；副品紅（重慶川東化工有限公司，批號(hào)：20101011）；甲基綠（重慶東方試劑廠，批號(hào)：20100513）。其他所用試劑均為分析純。

1.2 涼山皮寒藥抑菌試驗(yàn) 制備適量肉湯培養(yǎng)基［7］及瓊脂培養(yǎng)基，滅菌備用；制備菌液，置于37℃恒溫培養(yǎng)24h，擴(kuò)菌備用。

將涼山皮寒藥水針劑采用二倍稀釋法稀釋為：1/20、1/21、1/22……1/28，每個(gè)梯度做3個(gè)重復(fù)。用牛津杯法［7］分別作巴氏桿菌、白色念珠菌、鴨里默氏菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、魏氏梭菌6種細(xì)菌的抑菌試驗(yàn)，測量抑菌圈，計(jì)算平均值［8－10］確定抑菌效果。

1.3 小鼠耳廓腫脹試驗(yàn) 參考文獻(xiàn)［6，11－12］，將50只健康小鼠隨機(jī)分為5組，分別為高劑量組、中劑量組、低劑量組、空白對(duì)照組、陽性藥物對(duì)照組（地塞米松磷酸鈉注射液組），每組10只。在每只小鼠右耳兩面涂二甲苯0.1mL/只致腫，左耳不涂為正常耳。30min后高、中、低劑量組分別腹腔注射0.75g/mL、0.5g/mL、0.25g/mL涼山皮寒藥水針劑0.5mL/只，空白對(duì)照組腹腔注射等量生理鹽水，陽性藥物組腹腔注射等體積含0.1mg地塞米松磷酸鈉注射液的生理鹽水，30min后將小鼠處死，用直徑9mm打孔器在相同位置取左右耳片，立即用電子天平稱重，計(jì)算左耳片和右耳片重量的差值（腫脹度）及抑制率［13］。

腫脹度＝右耳片重－左耳片重

抑制率（%）＝（空白對(duì)照組平均腫脹度－給藥組平均腫脹度）/空白對(duì)照組平均腫脹度×100%

1.4 小鼠免疫相關(guān)試驗(yàn)

1.4.1 T淋巴細(xì)胞百分含量的測定 將小鼠隨機(jī)分成4個(gè)組，分別為高劑量組、中劑量組、低劑量組、空白對(duì)照組，每組10只，每日分別按體重灌喂0.75 g/mL、0.5g/mL、0.25g/mL的涼山皮寒藥水針劑藥液及生理鹽水，給藥量均為0.1mL/10g體重，連續(xù)給藥7d。各組末次給藥1h后采血，做全血涂片，按酯酶染色法［14－15］進(jìn)行染色，置油鏡下觀察。

1.4.2 免疫器官指數(shù)測定 小鼠分組與處理同1.4.1，各組末次給藥1h后脫頸處死，取脾臟，用濾紙吸干血后稱重。按公式計(jì)算免疫器官指數(shù)：免疫器官指數(shù)＝脾臟重量mg/體重g［16］。

1.5 抗疲勞試驗(yàn) 小鼠分組與處理同1.4.1，各組末次給藥1h后，在小鼠尾部按體重的5%負(fù)重游泳（水溫25℃～30℃，水深0.3m），記錄游泳時(shí)間。判斷標(biāo)準(zhǔn)：以小鼠沉入水底時(shí)間超過10s時(shí)為力竭［17］。

1.6 統(tǒng)計(jì)方法 用SPSS19.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，單因素方差分析組間差異，數(shù)據(jù)以±SD表示。

2 結(jié)果

2.1 抑菌試驗(yàn)結(jié)果 從表1中可以看出，涼山皮寒藥水針劑對(duì)巴氏桿菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、A型魏氏梭菌、鴨疫里默氏菌有一定抑制作用。

表1 涼山皮寒藥各濃度抑菌直徑 （mm）

2.2 涼山皮寒藥對(duì)小鼠耳廓腫脹的影響 由表2可見，各給藥組均降低小鼠耳廓腫脹率，與空白對(duì)照組比較，高、中劑量組均差異極顯著（P＜0.01），低劑量組差異顯著（P＜0.05）；高、中劑量組抗炎作用優(yōu)于陽性藥物對(duì)照組，差異極顯著（P＜0.01）。涼山皮寒藥水針劑對(duì)小鼠耳腫脹抑制率的結(jié)果為：中劑量組＞高劑量組＞陽性藥物對(duì)照組＞低劑量組。

2.3 T淋巴細(xì)胞百分含量及免疫器官指數(shù)測定結(jié)果 由表3結(jié)果可知，各濃度的涼山皮寒藥對(duì)T淋巴細(xì)胞百分比、小鼠的脾臟指數(shù)均有不同程度提高，但與空白對(duì)照組比，差異不顯著（P＞0.05）。

表2 涼山皮寒藥對(duì)二甲苯誘導(dǎo)的小鼠耳廓腫脹的影響

表3 不同濃度涼山皮寒藥對(duì)小鼠T淋巴細(xì)胞酯酶染色率及小鼠的免疫器官指數(shù)的影響

2.4 抗疲勞試驗(yàn)結(jié)果 由表4結(jié)果可知，各濃度的涼山皮寒藥均能增加小鼠游泳的時(shí)間，與空白對(duì)照組比較，高濃度組差異極顯著（P＜0.01）、中濃度組差異顯著（P＜0.05）。

表4 不同濃度涼山皮寒藥對(duì)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間測定

3 分析與討論

涼山皮寒藥首載于1972年四川西昌地區(qū)衛(wèi)生局出版的《西昌中草藥》一書中，現(xiàn)今，只有在民間臨床中應(yīng)用此藥，有學(xué)者對(duì)其進(jìn)行了形態(tài)學(xué)、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、解熱鎮(zhèn)痛及安全性的初步研究［18－20］，但藥效方面的研究還有待完善，因此根據(jù)其臨床用藥情況對(duì)其進(jìn)行可能的藥效研究是很有必要的。

抑菌試驗(yàn)檢驗(yàn)藥物是否對(duì)某種細(xì)菌具有抑制作用、最適抑菌濃度范圍，對(duì)革蘭陽性菌的抑制作用強(qiáng)還是對(duì)革蘭陰性菌的抑制效果強(qiáng)，從而對(duì)其進(jìn)一步的研究提供方向。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，涼山皮寒藥對(duì)革蘭陽性菌與陰性菌均有一定抑制作用。

炎癥是機(jī)體對(duì)損傷所產(chǎn)生的防御反應(yīng)，發(fā)生發(fā)展過程一般被認(rèn)為分為3期，早期以毛細(xì)血管擴(kuò)張、通透性亢進(jìn)為主，中期為血小板吸附及白細(xì)胞游走，晚期為肉芽組織增生［21］。二甲苯致小鼠耳腫脹模型屬于炎癥反應(yīng)的早期［22］。目前藥物抗炎的機(jī)理主要分為兩類：通過抑制磷脂酶而使花生四烯酸生成減少而起抗炎作用，以及通過抑制環(huán)加氧酶最終使前列腺素等炎性介質(zhì)生成減少［23］。本試驗(yàn)表明，涼山皮寒藥二甲苯所致的炎癥有一定抑制作用。

機(jī)體免疫系統(tǒng)中淋巴細(xì)胞增殖是機(jī)體對(duì)非己抗原刺激產(chǎn)生免疫應(yīng)答過程中的重要事件，淋巴細(xì)胞增殖效果決定效應(yīng)淋巴細(xì)胞的數(shù)量，反映機(jī)體的免疫狀態(tài)［24］。T淋巴細(xì)胞主要參與機(jī)體細(xì)胞免疫反應(yīng)，其含量的檢測對(duì)多種疾病的診斷具有極為重要的意義。脾臟是體內(nèi)最大的淋巴器官，免疫細(xì)胞中以B淋巴細(xì)胞為主（約占50%～60%），而B淋巴細(xì)胞是參與體液免疫的主要細(xì)胞。免疫器官的重量在一定程度上可反映免疫器官內(nèi)淋巴細(xì)胞的數(shù)量，從而間接了解體內(nèi)淋巴細(xì)胞總體水平，脾臟指數(shù)增加，說明到達(dá)脾臟的藥物可促進(jìn)脾臟白細(xì)胞活化增殖［25］。本試驗(yàn)結(jié)果表明，涼山皮寒藥對(duì)T淋巴細(xì)胞有增值的趨勢(shì)，對(duì)細(xì)胞免疫有一定的增強(qiáng)作用。

疲勞是機(jī)體生理過程不能維持其機(jī)能的特定水平，不能維持預(yù)定的運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度的一種生理或病理現(xiàn)象［26－27］；游泳時(shí)間長短可以反應(yīng)動(dòng)物運(yùn)動(dòng)疲勞的程度［28］，游泳時(shí)間的延長，表明機(jī)體抗疲勞作用的增強(qiáng)，從而降低發(fā)病率，也能間接反映了機(jī)體組織、臟器的健康狀況。本試驗(yàn)結(jié)果表明，涼山皮寒藥對(duì)機(jī)體的抗疲勞有顯著的增強(qiáng)作用。

4 結(jié)論

涼山皮寒藥對(duì)部分革蘭陽性菌和革蘭陰性菌有一定的抑制作用，對(duì)小鼠耳廓腫脹有明顯的抑制作用，對(duì)小鼠增強(qiáng)免疫力與抗疲勞有一定效果。

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