高效液相色譜法測定蜂膠膠囊中吡啶甲酸鉻的含量

廣西桂林食品藥品檢驗所（541002）黃海燕 鐘建理

蜂膠膠囊是以蜂膠、吡啶甲酸鉻等為主要原料制成的保健食品，具有輔助降血糖的保健功能。本文參照保健食品檢驗與評價技術規范（2003年版）保健食品中吡啶甲酸鉻的測定，采用HPLC法測定蜂膠膠囊中吡啶甲酸鉻的含量并行方法學考察，據考察結果制定檢驗操作規程。

1 試藥

吡啶甲酸鉻（Ⅲ）（含量：98.0%；Lot.4SNMF-1M）：購于上海安譜科學儀器有限公司；乙腈為色譜純，磷酸氫二鉀和磷酸二氫鉀均為分析純，水為高純水。蜂膠膠囊：A：西安某保健品有限公司，批號：20110401；B：北京某保健食品廠，批號：20110301。

2 儀器

PE-200型高效液相色譜儀；XS205DU型電子分析天平；BRANSON BUT2030-40-06超聲儀。

3 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱：phenomenex?C18（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：乙腈-磷酸鹽緩沖液（磷酸氫二鉀4.35g，磷酸二氫鉀3.40g，加水1000mL溶解）（10∶90）；檢測波長：254nm[1]；柱溫：35℃；流速：1.0mL/min；進樣量10μL。

4 溶液的配制

4.1 對照品溶液 精密稱取吡啶甲酸鉻對照品（含量98.0%）13mg，置50mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取2mL置5mL量瓶中，加甲醇0.5mL，加水至接近刻度，放冷，加水至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜過濾，即得。

4.2 供試品溶液 精密稱取本品內容物0.8g，置20mL容量瓶中，加甲醇10mL，超聲提取5min，加水至接近刻度，放冷，加水至刻度，搖勻，靜置，上清液用0.45μm微孔濾膜過濾，取續濾液，即得。

5 測試方法與結果

附圖 高效液相色譜圖

5.1 線性關系考察 精密稱取吡啶甲酸鉻對照品（含量98.0%）13.36mg，置50mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻。分別精密吸取1mL、2mL置5mL容量瓶中，加甲醇1.5mL、0.5mL，再加水至刻度，放冷，加水至刻度，搖勻，即得（52.3712μg/mL、104.7424μg/mL）；取上述（104.7424μg/mL）溶液0.2mL、0.5mL、1mL置10mL量瓶中，加甲醇-水（1∶1）至刻度，搖勻，即得（2.0948μg/mL、5.2371μg/mL、10.4742μg/mL）。按上述色譜條件進樣10μL。以峰面積為縱坐標，濃度為橫坐標并進行線性回歸得：Y＝1.307×104x-2.512×103；r＝0.9999。表明吡啶甲酸鉻在2.0948～104.7424μg/mL內線性關系良好。

5.2 重復性試驗 取同一樣品（A廠）6份，按供試品溶液的制備方法制得供試品溶液，按色譜條件測定。結果平均含量為250.0mg/100g。RSD為1.0%（n＝6）。色譜圖見附圖所示。

5.3 檢出限（LOD） 按信噪比（S/N）為3計算，對照品溶液稀釋至0.1571μg/mL，進樣10μL，本法檢出限為0.1571μg/mL。

5.4 定量限（LOQ） 按信噪比（S/N）為10計算，對照品溶液稀釋至0.5237μg/mL，進樣10μL，本法定量限為0.5237μg/mL。

5.5 回收率試驗 取已知含量的樣品0.4g置20mL量瓶中，分三個水平分別加入0.2619mg/mL的吡啶甲酸鉻對照品3mL、4mL、5 mL，加甲醇7mL、6mL、5mL，超聲處理20min，加水至接近刻度，放冷，加水至刻度，搖勻，靜置，上清液用0.45μm微孔濾膜濾過，取續濾液。以上述色譜條件測定，按外標法計算。測得平均回收率98.68%，RSD為0.6%（n＝9）。見附表1。

附表1 回收率試驗結果（n＝9）

附表2 2批樣品含量測定結果

5.6 樣品測定 取樣品，分別按供試品溶液的制備方法制得供試品溶液，測定。按外標法計算，結果見附表2。

6 討論

6.1 吡啶甲酸鉻具有防止早期動脈粥樣硬化及慢性血管疾病等多種藥理作用及生物活性。體內、外實驗及流行病學均顯示，吡啶甲酸鉻對多種腫瘤均有抑制作用[2]。

6.2 在實驗中發現，蜂膠膠囊樣品按保健食品檢驗與評價技術規范（2003年版）“保健食品中吡啶甲酸鉻的測定”直接加甲醇∶水（1∶1）超聲提取，測得含量和回收率極低，說明提取不完全，可能是樣品中所含的蜂膠遇水后對吡啶甲酸鉻的溶解有影響，而先加甲醇超聲后再加水振搖提取，回收率達到98.68%。

6.3 從實驗結果發現，有一個廠家生產的蜂膠膠囊，其標示每100g含吡啶甲酸鉻92.9mg，而測定結果為10.8mg，含量僅約為標示的11.6%。

6.4 實驗考察結果表明，應用本法對蜂膠膠囊中的吡啶甲酸鉻進行含量測定是可行的，而且筆者還對樣品提取方法進行簡化，使其更快速、簡便、準確可靠。