液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定植物油中阿維菌素和甲維鹽殘留

壽林飛，張文童，虞 淼，梁赤周

(1.浙江省農(nóng)藥檢定管理所，浙江 杭州 310021;2.南通市白蟻防治所，江蘇 南通 226001)

阿維菌素是一類具有殺蟲(chóng)、殺螨、殺線蟲(chóng)活性的十六元大環(huán)內(nèi)酯化合物，甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽(簡(jiǎn)稱甲維鹽)是以阿維菌素為原料經(jīng)過(guò)化學(xué)結(jié)構(gòu)修飾得到的一種高效生物殺蟲(chóng)劑［1］。阿維菌素和甲維鹽屬于高效廣譜殺蟲(chóng)劑，已經(jīng)廣泛應(yīng)用于蔬菜、瓜果、水稻、棉花、油菜、中藥材等各種農(nóng)作物中。

食用植物油是生活必需品，常見(jiàn)的食用油多為植物油脂，多從油菜等油料作物提取壓榨獲得，包括大豆油、花生油、菜籽油、芝麻油、棕櫚油、橄欖油、芥花籽油和葵花籽油等［2］。隨著人們消費(fèi)水平的升高，對(duì)食品安全問(wèn)題的要求也越來(lái)越高，近年來(lái)，食品安全事故頻出。2010年海南爆出轟動(dòng)全國(guó)的“毒豇豆”事件，2011年青島連現(xiàn)三起“韭菜中毒”事件，及至今年山東濰坊農(nóng)戶使用劇毒農(nóng)藥“神農(nóng)丹”進(jìn)行生姜種植，加上近年來(lái)一直熱議不斷的“地溝油”事件，這些問(wèn)題引發(fā)了社會(huì)廣泛關(guān)注，將消費(fèi)者對(duì)食品安全的質(zhì)疑推上了高潮。農(nóng)藥殘留問(wèn)題也不僅局限在蔬菜水果上，越來(lái)越多的消費(fèi)者將目光集中在了油料作物及制品上。目前我國(guó)植物油中農(nóng)藥殘留檢測(cè)、指標(biāo)的設(shè)置和檢測(cè)技術(shù)與發(fā)達(dá)國(guó)家相比差距很大［3］，對(duì)于植物油中農(nóng)藥殘留的檢測(cè)研究較少。

阿維菌素類藥物多采用以衍生化為基礎(chǔ)的熒光［4-6］或紫外［7-8］高效液相色譜方法檢測(cè)，但其前處理較復(fù)雜，檢測(cè)的特異性和靈敏度也不強(qiáng)，也有采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)阿維菌素和甲維鹽，多集中在蔬菜［9-10］、水果［11］、稻米［12］、茶葉［13］等基質(zhì)中的殘留檢測(cè)，尚未見(jiàn)采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)植物油中阿維菌素和甲維鹽殘留的相關(guān)報(bào)道。本研究采用氨基固相萃取柱(NH2)凈化液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)植物油中阿維菌素和甲維鹽殘留，方法前處理簡(jiǎn)單，檢出限低，易于操作。

1 材料與方法

1.1 儀器、試劑和材料

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜:TSQ Quantum 配Survey液相操作系統(tǒng) (美國(guó)Thermo Fisher Scientific 公司);GPC 凝膠色譜凈化裝置 (德國(guó)LCTech 公司);自動(dòng)濃縮儀(Büchi R205 型，瑞士步琪有限公司);超聲波清洗器(KQ-50 型，昆山市超聲儀器公司);旋渦混合器(QT-2 型，上海琪特分析儀器有限公司);乙腈和甲醇(色譜純，美國(guó)Merck公司);試驗(yàn)用水為去離子水;Envi-NH2固相萃取柱(500 mg，3 mL，美國(guó)Supelco 公司);有機(jī)濾膜，0.45 μm;阿維菌素(純度≥99%)和甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽(純度≥99.5%)標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)自德國(guó)Dr.Ehrenstorfer GmbH 公司。

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液:分別準(zhǔn)確稱取標(biāo)準(zhǔn)品0.010 0 g，用甲醇溶解定容至50 mL (200 mg·L-1)，-18℃保存，試驗(yàn)中按需稀釋。

1.2 試驗(yàn)方法

準(zhǔn)確稱取2 g (精確到0.01 g)植物油樣品，置于10 mL 刻度試管中，用8 mL 二氯甲烷超聲溶解，渦旋3 min，待凈化。氨基柱分別用甲醇+二氯甲烷(5 mL+95 mL)5 mL 和二氯甲烷5 mL 預(yù)淋，待預(yù)淋液到達(dá)柱吸附層表面時(shí)，加入凈化液，棄去，用甲醇+二氯甲烷(5 mL+95 mL)5 mL洗脫至5 mL 刻度試管，擠干，氮?dú)饩徛蹈桑尤爰状? mL，超聲溶解，加入甲醇定容至2 mL，過(guò)0.22 μm 有機(jī)濾膜，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定。

1.3 色譜質(zhì)譜條件

色譜柱:Phenomenex Luna C18(150 mm×2.0 mm，5 μm);柱溫:30℃。進(jìn)樣量:10 μL;流動(dòng)相:甲醇和含0.1%甲酸2 mmol·L-1乙酸胺水溶液85∶15 (V∶V);流速:0.3 mL·min-1。甲維鹽和阿維菌素保留時(shí)間分別為1.2 和3.7 min。

掃描方式:電噴霧正離子掃描;檢測(cè)方式:選擇反應(yīng)監(jiān)測(cè);噴霧電壓:4 200 V;毛細(xì)管溫度:350℃;碰撞氣氬氣:1.5 mTorr。定量離子對(duì)、定性離子對(duì)、碰撞能量等參數(shù)見(jiàn)表1。

表1 質(zhì)譜多重反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM) 條件

2 結(jié)果與討論

2.1 GPC 凈化方法

試驗(yàn)先利用GPC 凈化方法。凈化條件為:凝膠色譜柱:320 mm×25 mm;填料:Bio-Beads S-X3 凝膠填料40～80 μm (200～400 目);洗脫溶劑:環(huán)己烷-乙酸乙酯(1∶1，V∶V);流速:5 mL·min-1;洗脫程序:前600 s 流出液棄去，收集后續(xù)的洗脫液，每120 s 收集1 管，共收集10 管，棄去繼續(xù)淋洗的400 s;進(jìn)樣量:阿維菌素和甲維鹽混合標(biāo)準(zhǔn)溶液(1 mg·L-1)5 mL。收集的洗脫液(轉(zhuǎn)移至平底燒瓶)于40℃水浴中減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)近干，N2吹干，甲醇溶解定容至5 mL，過(guò)膜，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定。結(jié)果表明，阿維菌素和甲維鹽主要在第3 管，第1 管未檢出，第2，4 管有少量檢出。但當(dāng)作植物油添加回收試驗(yàn)時(shí)發(fā)現(xiàn)，對(duì)于阿維菌素和甲維鹽等大分子農(nóng)藥殘留，GPC 凈化時(shí)則隨部分油脂流出，導(dǎo)致凈化液無(wú)法吹干，達(dá)不到凈化的效果。

2.2 固相萃取柱凈化方法

固相萃取柱進(jìn)行樣品的凈化已得到廣泛應(yīng)用，張艷等［5］采用丙磺酸強(qiáng)陽(yáng)離子交換萃取柱進(jìn)行甲維鹽的測(cè)定，但對(duì)阿維菌素不合適。章虎等［4］考察了Carb-NH2復(fù)合柱和氨基固相萃取柱用于凈化阿維菌素和甲維鹽的淋洗方法，結(jié)果表明，采用Carb-NH2復(fù)合柱時(shí)甲維鹽需要45 mL，阿維菌素需要50 mL 才能有較好的回收率(＞95%)，因而復(fù)合柱作為凈化柱，試驗(yàn)可操作性不強(qiáng);采用氨基柱時(shí)，用97∶3 (二氯甲烷∶甲醇)作為洗脫液，洗脫體積為10 mL，甲維鹽和阿維菌素回收率為98%和97%。進(jìn)一步優(yōu)化洗脫溶劑，發(fā)現(xiàn)用95∶5 (二氯甲烷∶甲醇)作為洗脫液，洗脫體積為5 mL，甲維鹽和阿維菌素回收率即可達(dá)到95%以上。同時(shí)，相比GPC 凈化，采用氨基固相萃取柱時(shí)，操作簡(jiǎn)單，凈化效果更好。

2.3 線性范圍

阿維菌素和甲維鹽用甲醇稀釋得到一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，濃度分別為5，10，20，50，100 和500 μg·L-1，進(jìn)液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)。以濃度X (μg·L-1)為橫坐標(biāo)，峰面積響應(yīng)值Y 為縱坐標(biāo)，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)溶液測(cè)定值進(jìn)行線形回歸，所得回歸方程，阿維菌素為:Y=16 752 X+1 086，r=0.997 5，甲維鹽為:Y=59 204 X+2 269，r=0.998 6。可見(jiàn)本方法有著良好的穩(wěn)定性。

2.4 回收率和精密度

在未檢出阿維菌素和甲維鹽的大豆油、花生油和菜籽油樣品中分別添加不同含量水平的2種農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)液，渦旋混合2 min，靜置30 min。使添加濃度分別為0.01，0.02 和0.05 mg·kg-1，每個(gè)水平做5 次平行試驗(yàn)，按照1.2 所述步驟處理后進(jìn)樣，計(jì)算加標(biāo)回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)(表2)。

表2 方法添加回收率和精密度(n=5)

表2 顯示，回收率范圍為76.6%～93.5%，RSD為2.7%～9.0%，符合農(nóng)藥殘留分析方法的要求。

2.5 靈敏度

在試驗(yàn)色譜條件下，分析添加濃度為0.01 mg·kg-1，進(jìn)樣濃度為0.01 mg·L-1樣品中阿維菌素和甲維鹽的色譜圖，以噪音信號(hào)的3 倍和10 倍計(jì)算本方法的檢測(cè)限和定量限。阿維菌素的檢出限為0.002 mg·kg-1，定量限為0.005 mg·kg-1。甲維鹽的檢出限為0.000 3 mg · kg-1，定量限為0.001 mg·kg-1。

3 小結(jié)

采用氨基固相萃取柱凈化，建立了快速測(cè)定植物油中阿維菌素和甲維鹽殘留分析方法，具有良好的靈敏度、回收率和重復(fù)性。

［1］馬海芹，丁佩.阿維菌素的研究應(yīng)用、存在問(wèn)題及對(duì)策［J］.農(nóng)藥科學(xué)與管理，2009，30 (10):20-23.

［2］李娜.食用油安全問(wèn)題淺析［J］.中國(guó)糧食經(jīng)濟(jì)，2008，(3):17-18.

［3］宋丹陽(yáng)，宮兆晶，李培武，等.我國(guó)油料中農(nóng)藥殘留限量與檢測(cè)技術(shù)現(xiàn)狀與發(fā)展趨勢(shì)［J］.中國(guó)油料作物學(xué)報(bào)，2006，28 (3):375-379.

［4］章虎，錢(qián)鳴蓉，董程，等.液相色譜法同時(shí)測(cè)定稻米中阿維菌素和甲維鹽殘留［J］.浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010 (6):1358-1361.

［5］張艷，吳銀良，胡繼業(yè)，等.高效液相色譜熒光檢測(cè)法測(cè)定蔬菜中殘留的甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽［J］.色譜，2008，26 (1):110-112.

［6］孫明娜，萬(wàn)宇，朱傳明，等.液相色譜-熒光法測(cè)定甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽在甘藍(lán)和土壤中的殘留［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008，36 (18):7533-7534.

［7］李保同，裴春梅.阿維菌素在小白菜和土壤中的殘留分析及動(dòng)態(tài)研究［J］.現(xiàn)代農(nóng)藥，2009，8 (4):27-30.

［8］徐浩然，楊仁斌，付強(qiáng)，等.高效液相色譜法測(cè)定土壤中阿維菌素殘留［J］.環(huán)境科學(xué)與管理，2010，35 (4):35-37.

［9］柳菡，徐錦忠，丁濤，等.蔬菜中26種農(nóng)藥殘留的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定［J］.分析測(cè)試學(xué)報(bào)，2009，28(2):181-185.

［10］丁慧瑛，謝文，周召千，等.蔬菜中11種苯甲酰脲類農(nóng)藥殘留的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定［J］.分析測(cè)試學(xué)報(bào)，2009，28 (8):970-974.

［11］李增梅，鄧立剛，趙淑芳，等.超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法研究阿維菌素在蘋(píng)果和土壤中的殘留消解動(dòng)態(tài)［J］.分析化學(xué)，2010，38 (10):1505-1509.

［12］何紅梅，趙華，張春榮，等.超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定水稻基質(zhì)中阿維菌素殘留量［J］.分析化學(xué)，2012，40 (1):140-144.

［13］楊方，楊守深，林永輝，等.超高效液相色譜-電噴霧電離串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法檢測(cè)茶葉中阿維菌素類藥物殘留［J］.色譜，2009，27 (2):153-157.