五味子中117種農藥多殘留氣相色譜－串聯質譜檢測方法研究

徐宜宏，蔣 施，付海濱，趙 穎，金 雁，鐘 鈺，劉 瑜，李曉東，于 麗

（沈陽出入境檢驗檢疫局 檢驗檢疫綜合技術中心，沈陽 110016）

0 引 言

五味子，俗稱山花椒、秤砣子、藥五味子等，學名：Schisandrachinensls（Turcz，）Baill。多年生落葉藤本，屬木蘭科，具有抗衰老、強身等藥理作用，具有很高的經濟價值［1］。

在實際檢測中發現，五味子作為一種中藥材基質，其中許多成分的化學結構、理化性質等與農藥極其相似，嚴重干擾農藥殘留量的測定，這對農藥殘留物的提取、凈化提出了更高的要求。其處理方法的好壞直接影響檢測結果準確性、實用性、可行性［2－3］。

本實驗選擇了有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯類、氨基甲酸酯類及其他類共117種農藥為研究對象，建立了五味子中117種農藥殘留同時檢測的GC－MS／MS確證方法，實驗結果表明，此方法對于五味子這類復雜基質中藥樣品有較好的凈化效果，大大的降低了背景對檢測的干擾，操作簡單，快捷，高效，并且采用了先進的GC－MS／MS技術，定性定量準確，完全可以滿足出口五味子中農藥殘留檢測限量的要求［4－8］。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

氣相色譜串聯質譜儀，美國Varian公司450GC－320MS；凝膠滲透色譜儀（GPC），美國J2scientific公司；旋轉蒸發系統，美國LABCONCO公司；氦氣、氬氣（純度99.999%）；臺式離心機，德國Sigma公司；農藥標準品：購置于農業部天津環保所，純度均為99%以上。無水硫酸鎂為分析純，640℃下連續烘干4h；乙酸乙酯，色譜純，美國Dikma公司；其余溶劑均為重蒸分析純。

1.2 標準溶液配置與保存

標準儲備液：稱取適量的各農藥標準物質，根據標準品的溶解性選擇丙酮稀釋成100mg／mL的標準儲備液，0～4℃冷藏保存。標準工作液：根據每種標準的靈敏度和儀器線性范圍，吸取一定量的混合標準儲備溶液，用丙酮稀釋成系列濃度的混合標準工作溶液。

1.3 樣品前處理

1.3.1 樣品制備與提取

準確稱取樣品10.0g，置于具塞塑料離心管中，加入40mL乙酸乙酯－乙腈（30∶70）混合溶液［9］，超聲40min。提取液過濾至塑料具塞離心管中，殘渣再用15mL乙酸乙酯－乙腈（30∶70）重復提取1次，合并過濾液。于40℃旋轉蒸發至近干。10mL乙酸乙酯－環己烷（1＋1）以溶解殘渣，并用0.45μm濾膜過濾，待凈化。

1.3.2 凝膠色譜凈化（GPC）

凈化條件：凈化柱填料為Bio Beads S－X3，規格250mm×25mm，；流動相乙酸乙酯－環己烷（1＋1）；流速4.7mL／min；收集時間8.0～23.0min。快速濃縮至近干，加入1.0mL色譜純乙酸乙酯溶解殘渣，離心2min，上清液用0.22μm濾膜過濾，供GC／MS／MS測定。

1.4 儀器測定條件

色譜條件：

色譜柱VF－5ms 30m×0.25mm×0.25mm，程序升溫條件：50℃保持4min，15℃／min升溫至190℃，5℃／min升溫至240℃，10℃／min升溫至290℃保持15min；載氣：氦氣，純度99.999%；恒流模式，流速：1.0mL／min；進樣口溫度：230℃，進樣量：1μL；進樣方式：不分流進樣。

質譜條件：

電離電壓：EI 70eV，燈絲電流：100μA，離子源溫度：220℃，腔體溫度：40℃；傳輸線溫度：280℃，碰撞氣：氬氣，1.8mTorr；溶劑延遲時間5.0min；MRM條件：每個農藥選擇1～2個母離子，2個子離子定性，其中1個母離子，1個子離子定量，定性及定量離子見表1。

表1 117種農藥保留時間、定性定量離子、線性回歸方程、線性范圍和相關系數（r）

續表1

續表1

2 結果與討論

2.1 提取條件的優化

該部分實驗比較了乙酸乙酯、乙腈、丙酮3種有機溶劑的提取效果。結果表明有些農藥在乙酸乙脂提取液中回收率好，有些在乙腈中提取率高，而丙酮的提取效果并不理想。為了兼顧多種農藥殘留檢測的需要，采用乙酸乙酯和乙腈的混合溶液進行樣品提取，分別考察了不同比率的乙酸乙酯－乙腈對提取效率的影響，發現乙酸乙酯－乙腈（30∶70，v／v）不僅能有效提取目標農藥，同時也減少了基質共提取物對目標農藥定性、定量的干擾。這是由于乙腈的極性強，對絕大部分農藥的溶解性更好，而少量乙酸乙酯的引入可以兼顧極性較低農藥的提取效率。

2.2 凈化條件的優化

通過凝膠色譜柱分別收集5～8min，8～16min，16～20min，20～23min，23～25min，測定回收率。通過測定發現，收集時間為8～23min的流出液中各種農藥的回收率最高，因此，確定收集時間為8～23 min的流出液，即37.6～108.1mL。

2.3 方法學數據考察

2.3.1 方法的標準曲線與線性關系

參考各國的最高農藥限量標準及儀器的靈敏度，在0.01～5.0μg／mL線性范圍內配制5個不同濃度梯度的混合標準溶液，以標準溶液中被測組分峰面積和內標物峰面積的比值為縱坐標，標準溶液中被測組分濃度與內標物濃度的比值為橫坐標繪制標準工作曲線，得到回歸方程、相關系數，列于表1。結果表明，在0.01～5.0μg／mL的濃度范圍內，各農藥均具有良好線性。

2.3.2 方法的準確度和精密度

在五味子空白樣品中添加不同含量水平的117種農藥，同時做空白對照。在0.005～0.2mg／kg范圍中分別添加3種水平，每個水平5個平行樣，按1.3中所述步驟操作，所得到的各農藥的添加回收率和相對標準偏差，五味子空白樣品及加標樣品的總離子流圖分別見圖1和圖2。

圖1 空白五味子樣品的總離子流色譜圖

圖2 空白五味子樣品中117種農藥的添加回收總離子流色譜圖

3 結 論

本文選用乙酸乙酯－乙腈（30∶70，v／v）為提取溶劑，凝膠滲透色譜技術（GPC）法為凈化方法，建立了五味子中117種農藥殘留同時檢測的（GC－MS／MS）確證方法。為中草藥類基質中多種農藥殘留檢測方法提供了理論依據。實驗結果表明，該方法準確性和重復性好、檢出限低，適用于中草藥材中多種農藥殘留的同時檢測，具有一定的應用價值。

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