頂空氣相色譜法測定水楊酸甲酯乳糖苷中殘留溶劑研究

北京協和藥廠（100050）何秀峰 劉冬 夏鵬飛 沈瓏瑛 趙立敏

水楊酸甲酯苷類化合物具有解熱、鎮痛、消炎等與水楊酸相類似的作用，對水楊酸進行結構修飾，合成了新的水楊酸類衍生物—水楊酸甲酯乳糖苷（MSG）[1]，本品在二甲基亞砜中易溶，在甲醇中溶解，在水和乙醇中微溶，在乙腈、丙酮、乙酸乙酯和二氯甲烷中不溶。該產品按照其生產工藝要求，在合成反應中分別使用了甲醇、乙醇、二氯甲烷及乙酸乙酯共4種有機溶劑，其中甲醇為重結晶用溶劑。

參照國家食品藥品監督管理局藥品審評中心《化學藥物殘留溶劑研究的技術指導原則》要求及有關文獻[2][3][4]，并經大量試驗研究，建立了同時測定水楊酸甲酯乳糖苷中甲醇、二氯甲烷等上述4種殘留有機溶劑含量的頂空氣相色譜法。按照ICH及《中國藥典》2010版關于殘留溶劑的有關規定[2][4][5]，制定各溶劑的限度為：本品1g中含甲醇不得超過300μg，乙醇及乙酸乙酯不得超過500μg，二氯甲烷不得超過60μg。根據該原料的溶解特征，筆者根據其溶解特性以二甲基亞砜為溶媒，采用外標法進行試驗，經方法學考察結果表明各組分的分離度、重現性良好，試驗方法合理，簡單易行，測定結果準確可靠，可作為水楊酸甲酯乳糖苷中甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯殘留溶劑的有效測定方法。

1 儀器與試藥

Agilent 7890A氣相色譜儀、Agilent G1888頂空進樣裝置，配有Agilent MSD ChemStation 操作控制及積分軟件；METTLER TOLEDO AL-204-IC電子分析天平。

甲醇（美國Dikma公司，批號：94951），乙醇（北京化工廠，批號：20090921），二氯甲烷（北京化工廠，批號：20091011），乙酸乙酯（北京化工廠，批號：20021025），二甲基亞砜（北京化工廠，批號：20091105）。

水楊酸甲酯乳糖苷（批號：100510、100517、100524），由寧波天衡制藥有限公司提供。

1.1 對照品貯備液的制備 分別取無水乙醇、乙酸乙酯適量，精密稱定，加入二甲基亞砜制成每1mL含乙醇、乙酸乙酯各10mg溶液，作為乙醇、乙酸乙酯對照品貯備液；取甲醇適量，精密稱定，加二甲基亞砜制成每1mL含甲醇6mg溶液，作為甲醇對照品貯備液；取二氯甲烷適量，精密稱定，加二甲基亞砜制成每1mL含二氯甲烷1.2mg溶液，作為二氯甲烷對照品貯備液。

1.2 混合對照品溶液的制備 精密量取上述對照品貯備溶液各1mL，置于50mL量瓶中，加入二甲基亞砜稀釋至刻度，搖勻，作為混合對照品溶液；精密量取上述對照品貯備溶液各0.8mL、1.2mL，分別置于2個50mL量瓶中，加入二甲基亞砜稀釋至刻度，搖勻，作為80%混合對照品溶液、120%混合對照品溶液用于回收率的測定。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 采用色譜柱為DB-624交聯毛細管柱（30m×0.53 mm，i.d，3μm），以氦氣為載氣，氫火焰離子化檢測器（FID），進樣口溫度為250℃，檢測溫度250℃。柱溫采用程序升溫：80℃保持，保持5min，后以10℃/min升至220℃，保持3min；流速為2.5mL/min，分流比為1∶30。頂空條件：頂空瓶預熱溫度90℃，加熱時間30min；定量環溫度120℃，平衡時間0.5min，填充時間0.5min，進樣時間1.0min；傳輸線溫度180℃。

2.2 分離度試驗 精密量取混合對照品溶液5.0mL于20mL頂空瓶中，按上述方法進行測定，記錄色譜圖。甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯的分離度均＞1.5，取對照溶液連續進樣6次，所得待測各溶劑峰面積的相對標準偏差均小于5.0%，符合《中國藥典》2010年版二部的相關規定。

2.3 線性范圍及標準曲線 精密稱取甲醇75.0mg、乙醇、乙酸乙酯各125.0mg、二氯甲烷15.0mg，置于一個10mL量瓶中，以二甲基亞砜稀釋至刻度搖勻，作為標準曲線儲備溶液。精密量取該溶液2.0mL置于一個10mL量瓶中加二甲基亞砜稀釋至刻度，搖勻，作為標準曲線溶液。按比例精密稀釋成不同濃度標準溶液6瓶，按上述方法進行測定，以濃度為橫坐標，以各溶劑峰面積為縱坐標，進行線性回歸，結果見附表1。

附表1 線性范圍與回歸方程

附表2 水楊酸甲酯乳糖苷的平均回收率

附表3 三批水楊酸甲酯乳糖苷的殘留溶劑測定結果（%）

2.4 最小檢測限 按照信噪比3∶1，本方法溶液中甲醇、乙醇、二氯甲烷及乙酸乙酯的最小檢測限分別為0.35μg/mL、0.61μg/mL、0.52μg/mL、0.54μg/mL。

2.5 精密度試驗 精密量取對照品混合溶液各5.0mL至6個頂空瓶中，照上述方法測定，根據甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯的峰面積計算RSD%分別為3.25%、2.28%、4.27%、2.33%，均小于5.0%。

2.6 回收率試驗 分別精密稱取水楊酸甲酯乳糖苷200mg置于18個20mL頂空瓶中，其中5份分別加入80%混合對照品溶液5mL、5份加入混合對照品儲備液5mL、5份加入120%混合對照品儲備液5mL、3份加入5mL二甲基亞砜，充分混勻，作為供試品溶液；取混合對照品溶液5mL，置于頂空瓶中，封蓋、搖勻，作為對照品溶液。按照上述方法進行測定，通過積分確定其峰面積，按外標法計算試樣中甲醇、乙醇、二氯甲烷及乙酸乙酯的平均回收率，結果見附表2。

2.7 樣品測定 精密稱取水楊酸甲酯乳糖苷3批供試品各200mg（每批兩份平行），于6個頂空瓶中分別加入二甲基亞砜5.0mL，封蓋，超聲溶解，照上述方法進行測定，結果3批供試品中均未檢出乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯的有機溶劑殘留，甲醇殘留量符合規定，結果見附表3。

3 討論

3.1 預熱溫度及時間的選擇 本試驗根據樣品的熱穩定性以及溶解度分別選擇于70、90及110℃條件下預熱，經過比較在溫度相對較低的條件下，樣品的回收率較低，而過高的溫度對于樣品的穩定性以及低沸點的溶劑也會造成一定影響；筆者又對預熱時間進行了考察，分別在預熱20、30、40min后進行測定。最終筆者選擇了90℃、預熱30min作為預熱條件。

3.2 預熱條件下樣品的穩定性 本品在90℃條件下進行了熱破壞實驗，分別于30、45、90min取樣采用HPLC方法進行測定，未檢測到水楊酸乳糖苷，說明甲酯鍵在該條件下比較穩定，不會在加熱過程中發生斷裂產生甲醇。

3.3 水楊酸甲酯乳糖苷殘留溶劑的測定水楊酸甲酯乳糖苷為一個新的非甾體抗炎藥，目前筆者正在進行其質量標準及制劑處方的研究。本文建立的水楊酸甲酯乳糖苷中殘留溶劑的測定方法能夠同時測定生產工藝中涉及的4種有機溶劑的殘留，所建立的方法準確、可靠，可用于水楊酸甲酯乳糖苷中殘留溶劑的測定，保障藥品的安全、有效。