PLA2G2A在胰腺癌組織中的表達(dá)及其與患者術(shù)后生存期的關(guān)系

張勇 蔣堃 王春陽 崔元琴 劉冬聲 張佃良

PLA2G2A在胰腺癌組織中的表達(dá)及其與患者術(shù)后生存期的關(guān)系

張勇 蔣堃 王春陽 崔元琴 劉冬聲 張佃良

ⅡA分泌型磷脂酶A2(secretory phospholipase A2 groupⅡA, PLA2G2A)是磷脂酶A2(phospholipase A2,PLA2)家族中的一員，是花生四稀酸代謝的關(guān)鍵酶，參與體內(nèi)多種生理和病理過程[1-2]。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，PLA2G2A與胃癌、腸癌等消化系統(tǒng)腫瘤的發(fā)生、侵襲、轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān)[3-8]。本研究檢測(cè)胰腺癌組織PLA2G2A的表達(dá)，探討其與胰腺癌臨床病理特征以及患者預(yù)后間的相關(guān)性。

一、材料與方法

1．臨床資料：收集華中科技大學(xué)協(xié)和醫(yī)院和青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院2003年1月至2006年1月間手術(shù)切除的76例胰腺癌患者的臨床資料和石蠟包埋的癌組織標(biāo)本，另取23例石蠟包埋的正常胰腺組織標(biāo)本(11例來自外傷性胰腺部分切除，12例為癌旁正常胰腺組織)作為對(duì)照，所有標(biāo)本均經(jīng)病理學(xué)證實(shí)。所有患者術(shù)前、術(shù)后均未接受放、化療治療。76例胰腺癌中男性55例，女性21例，年齡31～72歲，其中≤55歲者20例，>55歲者56例，中位年齡56.3。術(shù)后進(jìn)行隨訪，隨訪截止日期為 2008年12月31日。

2．PLA2G2A蛋白檢測(cè)：采用免疫組化方法檢測(cè)PLA2G2A蛋白。濃縮型鼠抗人PLA2G2A單抗購(gòu)自福州晶泰生物技術(shù)有限公司，工作濃度1∶100。Pv-6000通用型二步法免疫組化檢測(cè)試劑盒購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，按照說明書操作。以胞質(zhì)中呈現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性表達(dá)，根據(jù)染色強(qiáng)度及陽性細(xì)胞數(shù)判斷：按染色強(qiáng)度，不著色為0分，淡黃色1分，黃色2分，棕黃色3 分；按陽性細(xì)胞百分比，陽性細(xì)胞數(shù)≤5%、6%～25%、26%～50%、51%～75%、>75%分別計(jì)0、1、2、3、4 分。兩分值相乘，0分為陰性，1～4分為弱陽性(+)，5～8為中等陽性(++)，9～12 分定為強(qiáng)陽性(+++)，陰性及弱陽性定義為陰性表達(dá)，中等陽性與強(qiáng)陽性定義為陽性表達(dá)。

3．統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：用SPSS11.0軟件包對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。陽性率的比較采用χ2檢驗(yàn)，生存情況以Kaplan-Meier曲線表示，組間生存率比較采用Log-rank檢驗(yàn)，預(yù)后危險(xiǎn)因素采用Cox風(fēng)險(xiǎn)比例模型進(jìn)行單因素和多因素分析。P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

二、結(jié)果

1．胰腺癌組織PLA2G2A的表達(dá)：76例胰腺癌組織PLA2G2A蛋白表達(dá)陽性率為64%(49/76)，23例正常胰腺組織均未見PLA2G2A蛋白表達(dá)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，圖1)。

圖1正常胰腺組織(a)和胰腺癌組織(b)PLA2G2A蛋白表達(dá) (免疫組化 ×200)

2．胰腺癌組織PLA2G2A表達(dá)與臨床病理學(xué)特征的關(guān)系：PLA2G2A蛋白的表達(dá)與患者的年齡、性別及腫瘤部位、大小無相關(guān)性，而與臨床分期、腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)(表1)。

表1 PLA2G2A表達(dá)與胰腺癌臨床病理學(xué)特征的關(guān)系

3．PLA2G2A表達(dá)與患者生存期的關(guān)系：76例患者中失訪6例。70例患者中6例生存期<3個(gè)月，11例生存3～<6個(gè)月，13例生存6～<9個(gè)月，7例生存9～<12個(gè)月，9例生存12～<15個(gè)月，8例生存15～<18個(gè)月，7例生存18～<21個(gè)月，9例生存21個(gè)月仍健在。PLA2G2A陰性表達(dá)患者的平均生存期為(9.34±1.28)個(gè)月，95%可信區(qū)間為7.46～11.48；陽性表達(dá)患者的平均生存期為(15.97±1.66)個(gè)月，95%可信區(qū)間為11.53～19.34。兩組患者術(shù)后生存期的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.016，圖2)。

圖2 PLA2G2A陽性表達(dá)及陰性表達(dá)患者的生存曲線

4．影響患者術(shù)后生存的因素分析：Cox風(fēng)險(xiǎn)比例模型行單因素及多因素生存分析結(jié)果均顯示臨床分期、PLA2G2A陰性表達(dá)是影響胰腺癌患者術(shù)后生存的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(表2、3)。

表2 影響患者預(yù)后的Cox風(fēng)險(xiǎn)比例模型單因素分析

表3 影響患者預(yù)后的Cox風(fēng)險(xiǎn)比例模型多因素分析

討論磷脂酶A2(phospholipase A2,PLA2)在生物界中分布廣泛，是一類能夠催化水解甘油磷脂sn-2位點(diǎn)的酰基酯鍵形成自由脂肪酸和溶血磷脂的酶族[9]。PLA2水解代謝產(chǎn)生的花生四稀酸通過下游環(huán)氧合酶和脂氧合酶途徑進(jìn)一步產(chǎn)生的前列腺素、白三烯和血小板活化因子等脂類活性物質(zhì)廣泛參與細(xì)胞內(nèi)多種生理和病理變化，在機(jī)體脂質(zhì)平衡、免疫防御和炎癥反應(yīng)等過程中發(fā)揮重要作用[9-10]。根據(jù)組織分布、氨基酸序列同源性及生物化學(xué)功能等特征，PLA2分為分泌型、胞漿型和非鈣離子依賴型[10-11]。

PLA2G2A是磷脂酶A2家族中的一種亞型。人類的PLA2G2A最先是從類風(fēng)濕患者的滑膜液中發(fā)現(xiàn)并分離出來，其基因定位于1號(hào)染色體的p34-36.1，編碼蛋白的分子量約為13000[12-13]。PLA2G2A在哺乳動(dòng)物天然免疫中扮演著重要角色，尤其是在抗革蘭陽性細(xì)菌感染中發(fā)揮關(guān)鍵作用。近期的研究顯示，PLA2G2A與消化系統(tǒng)腫瘤的發(fā)生及演變關(guān)系密切。Fijneman等[14]研究發(fā)現(xiàn)，PLA2G2A表達(dá)可以降低APC基因突變誘發(fā)的Muc2缺陷小鼠腸道腫瘤的發(fā)生率。Tribler等[15]檢測(cè)22例結(jié)腸腺癌患者腫瘤組織中PLA2G2A的表達(dá)，結(jié)果顯示結(jié)腸癌組織PLA2G2A蛋白的表達(dá)量顯著低于癌旁組織。Ganesan等[16]報(bào)道，抑制非侵襲性胃癌細(xì)胞PLA2G2A表達(dá)可以提高癌細(xì)胞的侵襲力，而增強(qiáng)PLA2G2A表達(dá)可以抑制侵襲性胃癌細(xì)胞的侵襲力，提示PLA2G2A可能是胃癌侵襲和轉(zhuǎn)移的重要調(diào)控因素。最近有研究發(fā)現(xiàn)，PLA2G2A可作為判斷胃癌、結(jié)腸癌、前列腺癌預(yù)后的標(biāo)志物[5,8,17]。

本研究結(jié)果顯示，胰腺癌組織表達(dá)PLA2G2A蛋白，其表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、腫瘤分化程度均呈負(fù)相關(guān)。此外，PLA2G2A高表達(dá)患者的術(shù)后生存期長(zhǎng)于低表達(dá)的患者，是影響患者術(shù)后生存期的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。因此，設(shè)法增加PLA2G2A在胰腺癌中的表達(dá)可能有效地抑制腫瘤的浸潤(rùn)生長(zhǎng)，這為胰腺癌的基因治療提供了一種新的思路。

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10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2013.05.016

265600 蓬萊，山東蓬萊市人民醫(yī)院普外科(張勇、蔣堃、崔元琴)；華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬協(xié)和醫(yī)院(王春陽、劉冬聲)；青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院普外科(劉冬聲、張佃良)

張佃良，Email：phdzdl@yahoo.com

2013-02-15)

(本文編輯：屠振興)