HPLC法測定壯心口服液中柚皮苷和橙皮苷的含量

2013-10-17 13:31:28王希東李文俊王秀琴

實用醫藥雜志 2013年1期

王希東，李文俊，王秀琴

壯心口服液是371醫院根據慢性心力衰竭發病機理及臨床特點，采用辨病與辨證相結合，用藥劑量與心衰程度相結合，組方采用君、臣、佐、使，研制出的一種口服液。壯心口服液重用人參補氣回陽、莪術活血共為君，葶藶子消腫行水為臣，枳實消痞除積為佐，茯苓健脾祛濕利水為使。具有補氣活血、祛濕利水之功，用于冠心病、高血壓性心臟病、風濕性心臟病、肺原性心臟病及心肌病等引起的心功能不全。為有效控制藥品質量，本試驗參照相關文獻，以枳實中的柚皮苷和橙皮苷為質控成分，采用HPLC法進行了含量測定方法的研究[1，2]。結果表明，該法操作簡便、快速、重現性好，為壯心口服液的質量控制提供依據。

1 儀器與試藥

島津-高效液相色譜儀，島津LC-10ATVP泵，SPD-10A VP紫外檢測器，77251自動進樣器，N2000雙通道色譜工作站；AS3120A超聲波清洗器；AL104電子分析天平（瑞士梅特勒公司）。柚皮苷對照品（含量測定用，批號110722-200309）和橙皮苷對照品（含量測定用，批號110721-200512）由中國藥品生物制品檢定所提供；壯心口服液由解放軍第371醫院制劑室提供。乙腈、甲醇為色譜純，水為超純水，其它試劑為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件色譜柱C18（2）5μ 150×4.6 mm柱；流動相：乙腈-0.05%磷酸（20∶80）；流速：1.0 ml/min；檢測波長：284 nm；柱溫：35 ℃；進樣量：20μl。

2.2 對照品溶液的制備分別取柚皮苷和橙皮苷對照品適量，精密稱定，加甲醇分別配制成含柚皮苷680μg/ml和橙皮苷 160 μg/ml的對照品母液。分別精密量取 1、3、5、7、9 ml對照品母液置10 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為 68、204、340、476、612 μg/ml的柚皮苷對照品溶液和濃度為 16、48、80、112、144 μg/ml的橙皮苷對照品溶液。

2.3 線性關系的考察分別精密吸取上述稀釋好的對照品溶液20μl，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定峰面積，以測得的峰面積積分值為縱坐標、進樣量（μg）為橫坐標，繪制標準曲線，計算回歸方程。柚皮苷回歸方程：y=3E+06x-1E+06，r=0.9998線性范圍為1.36～12.24μg；橙皮苷回歸方程：y=6.48E+05x-2.97E+05，r=0.9997線性范圍為 0.32～2.88μg，結果表明：柚皮苷和橙皮苷進樣量與峰面積具有良好的線性關系。

2.4 供試品溶液的制備精密量取壯心口服液樣品5 ml，置25 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，經0.45μm微孔濾膜濾過，取續濾液，即得供試品溶液。

2.5 陰性對照試驗取去枳實的陰性制劑，按“2.4”項下方法制備供試液，按上述色譜條件測定。結果陰性對照溶液在與橙皮苷和柚皮苷相同保留時間處，無色譜峰出現。表明陰性樣品無干擾，此方法具有專屬性。色譜圖見圖1～4。

圖 1 柚皮苷對照品圖譜

圖 2 橙皮苷對照品圖譜

圖 3 壯心口服液圖譜

圖 4 陰性樣品圖譜

2.6 精密度試驗精密吸取同一供試品溶液，按上述色譜條件重復進樣5次，20μl/次，結果柚皮苷峰面積的RSD＝0.33%（n＝5），橙皮苷峰面積的 RSD＝0.27%（n＝5）。

2.7 穩定性試驗取同一供試品溶液分別在 0、2、4、6、8 h進樣，測得柚皮苷峰面積的 RSD＝0.95%（n＝5），橙皮苷峰面積的 RSD＝1.34%（n＝5），結果表明在測定條件下，供試品溶液在8 h內基本穩定。

2.8 重復性試驗按上述“供試品溶液的制備”方法，對同一批樣品分別制備5份供試品溶液，按 “樣品含量測定”項下，各吸取20μl進樣測定，結果柚皮苷平均含量為1.93 mg/ml，RSD為 1.18%；橙皮苷平均含量為 0.39 mg/ml，RSD為1.65%。

2.9 回收率試驗精密量取已知含量的樣品2.5 ml，6份分別精密加入柚皮苷對照品溶液（680 μg/ml）8.5、7、5.5 ml；另取6份分別精密加入橙皮苷對照品溶液（160μg/ml）7、6、5 ml。按上述“供試品溶液的制備”方法制備供試品溶液，按“樣品含量測定”項下，各吸取20μl進樣測定，計算回收率，結果見表 1、2。