結直腸癌中血管內皮生長因子和一氧化氮表達及其臨床意義

田雅軍 王立君 趙 鵬 張 煜 范 震

1.南京軍區杭州療養院門診部，浙江杭州 310007；2.杭州市第一醫院，浙江杭州 310006

結直腸癌是消化系統的常見腫瘤，近年來發病率呈逐年上升趨勢，其發生、發展和傳播、轉移是一個多因素共同作用的復雜過程。血管內皮生長因子（VEGF）被認為是促進腫瘤血管生成最重要的調節因子，可誘導瘤內或瘤周的淋巴管及血管生成及擴張[1]。NO具有誘導腫瘤細胞凋亡的作用，在腫瘤的轉移、復發、侵襲過程中發揮重要作用。本組研究分析VEGF和NO在結直腸癌中的表達水平，并探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2010年1月～2012年1月南京軍區杭州療養院和杭州市第一醫院收治的55例結直腸癌患者，均經病理檢查確診。其中，男31例，女24例；年齡33～72歲，平均（47.3±2.8）歲；直腸癌33例，結腸癌22例；TNM分期（2009年國際抗癌聯盟標準）：Ⅰ期7例，Ⅱ期11例，Ⅲ期20例，Ⅳ期17例；低、未分化腺癌20例，高、中分化腺癌35例；無淋巴結轉移24例，有淋巴結轉移31例；術后復發14例，未復發41例。排除標準：術前接受放療或化療治療患者。選取同期正常健康人群34例，其中，男18例，女16例；年齡31～70歲，平均（44.6±2.4）歲。 將 55 例結直腸癌患者設為觀察組，34例正常健康體檢人群設為對照組。

1.2 方法

兩組患者均晨起抽取空腹靜脈血2 mL，于4℃下以3 000 r/min離心10 min，分離出血清置于-70℃冰箱中保存待測。VEGF采用酶聯免疫吸附（ELISA）法檢測，試劑盒購自美國RD公司。NO應用分光光度計法檢測，試劑盒購自上海研吉生物科技有限公司。均嚴格按試劑盒規定操作，檢測VEGF、NO水平。

1.3 統計學方法

使用SPSS 17.0軟件進行統計分析，計量資料符合正態分布以均數±標準差（±s）表示，組間均數比較采用成組設計的t檢驗，計數資料比較采用χ2檢驗。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組VEGF、NO水平比較

觀察組VEGF、NO水平均顯著低于對照組，兩組比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組血管內皮生長因子和一氧化氮水平比較（±s）

表1 兩組血管內皮生長因子和一氧化氮水平比較（±s）

組別 例數 VEGF（ng/L） NO（μmol/L）觀察組對照組55 34 t值 P值384.6±42.4 137.2±26.1 2.163＜0.05 77.9±11.7 40.5±9.3 2.085＜0.05

2.2 VEGF、NO陽性表達與腫瘤大小、部位、分期、復發比較

VEGF、NO陽性表達與腫瘤大小、部位比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。腫瘤分期、復發與VEGF、NO陽性表達比較，差異有統計學意義（P ＜ 0.05，P ＜ 0.01）。

表2 血管內皮生長因子和一氧化氮陽性表達與腫瘤大小、部位、分期、復發比較[n（%）]

3 討論

結直腸癌是臨床常見的消化系統腫瘤，其最顯著的生物學特征是侵襲與轉移，癌癥的傳播、轉移、復發嚴重影響結直腸癌患者的生存期，術后生存率較低，嚴重威脅人類的健康。結直腸癌是一個多因素、多步驟、多途徑的復雜過程，包括細胞的增殖、凋亡的抑制、腫瘤基質和腫瘤周圍血管的形成等多個方面，此過程又受到多種因素的調控。近年屢有報道VEGF的異常表達與結直腸癌的發病相關，但是關于NO與結直腸癌的關系相關的研究較少，本組研究分析了VEGF和NO表達與結直腸癌的關系。

VEGF特異性作用于血管內皮細胞，為內皮細胞特異的有絲分裂源，在內皮細胞的增殖、遷移和血管構建中起著重要的作用，是一種血管滲透劑。惡性腫瘤增殖擴散的各個階段均有新生血管生成。VEGF阻止血管內皮細胞管腔網狀結構退化和細胞凋亡，促進血管內皮細胞變形、移動、分裂和增殖，增強血管通透性和血管新生，形成新的腫瘤供血血管網，是一種明確的血管形成及血管通透性誘導因子，在許多新生血管形成中起關鍵作用，與腫瘤轉移及預后相關。許多體液因子及腫瘤基因都是通過調節VEGF而促進或抑制腫瘤血管生成。VEGF在刺激血管生成的同時，還具有增加微小血管通透性、促進內皮細胞增殖遷移、促進基質降解等機制促進腫瘤最終導致腫瘤病灶新生血管形成，病灶浸潤、增殖和轉移，與直腸癌淋巴結轉移關系密切[2-3]，是目前發現的最重要的腫瘤血管生長因子。近年不僅應用于臨床腫瘤發生、發展的檢測，同時也可作為放療效果預測指標[4]。

NO是神經元釋放的血管活性因子，也可由胃腸、腦、心、肝、腎等臟器的組織細胞產生，具有舒張血管的作用，可以松弛血管平滑肌抑制其細胞增殖，改善血管緊張度，調節血流、抑制血小板的聚集和白細胞的激活[5]，其水平可反映臟器血液循環狀態和生理功能情況。腫瘤患者本身存在缺血、缺氧、免疫力低下狀態。NO在組織中的濃度異常降低后，可介導活化的巨噬細胞殺傷腫瘤細胞，促進內皮細胞的黏附，導致細胞凋亡及DNA損傷，增加血管通透性，促進腫瘤血管形成，在機體正常組織免疫力低下、缺氧、缺血的狀態下加速腫瘤的生長和轉移。結直腸癌患者血清中NO含量發生異常改變，可能與腫瘤細胞大量增殖，代償性產生大量代謝產物釋放入血有關，導致機體抗腫瘤能力降低，誘導腫瘤細胞凋亡，同時對腫瘤的侵襲、復發、轉移起到一定的作用[6]。

本組研究表明在結直腸癌中VEGF、NO均為高表達，認為二者可以作為結腸癌檢測時的預測因子，而且VEGF、NO陽性率可以反映腫瘤分期與復發情況。本組研究表明TNM分期Ⅳ期時，VEGF、NO陽性率的表達均最低，其機制有待于進一步研究。術后復發組織中，其陽性率顯著升高，表明VEGF、NO陽性率表達有可能作為是否復發的指標。本組沒有考察VEGF、NO兩個因子在結直腸癌表達的相關性。但臨床研究表明VEGF可通過細胞內鈣調蛋白及磷酸肌醇途徑影響NO的形成[7]，而NO參與VEGF誘導的腫瘤血管形成的內皮細胞移動、溶解基質和復發。因此，二者可能在結直腸癌組織中表達具有一定的相關性，尚需下一步研究與探討。

[1]Boere IA，Hamberg P，Sleijfer S.It takes two to tango：combinations of conventional cytotoxics with compounds targeting the vascular endothelial growth factor-vascular endothelial growth factor receptor pathway inpatients with solid malignancies[J].Cancer Sci，2010，101（1）：7-15.

[2]劉濤，張超，呂偉，等.VEGF-C在直腸癌中的表達及其意義[J].重慶醫學，2009，38（5）：509-511.

[3]Kerbel RS.Tumor angiogenesis[J].NEJM，2008，358（19）：2039-2049.

[4]鄭青平，倪秉強，伍美娟，等.肝癌放療前后血漿VEGF表達的臨床意義[J].重慶醫學，2010，39（3）：288-289.

[5]Luo HT，Chen HC.Sufentanil target controlled infusion of laparoscopiccholecystectomy in patients with endogenous nitric oxideand endothelin[J].Strait of Pharmacy，2008，20（8）：125-127.

[6]林偉鵬，曾光.結直腸癌患者手術前后血清中IL-6和NO水平的臨床意義[J].結直腸肛門外科，2010，（16）4：221-223.

[7]Singh RP，Agarwal R.Inducible nitric oxide synthase-vascular endothelial growth factor axis：a potential target to inhibit tumor angiogenesis bydietary agents[J].Curr Cancer Drug Targets，2007，7（5）：475-483.