PTEN在宮頸癌組織中的表達及對宮頸癌發生、發展的作用

呂汕群 姚婷婷 黃諾潔 莊 敏

1.廣東省汕頭市中心醫院婦產科，廣東汕頭 515041；2.中山大學第二附屬醫院婦產科，廣東廣州 510000

宮頸癌是全球婦女第二高發惡性腫瘤，僅次于乳腺癌，在發展中國家其發病率居第一位[1]。近年來，宮頸癌的發病率有明顯上升趨勢，尤其是年輕宮頸癌患者。第10染色體同源丟失磷酸酶-張力蛋白基因（phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten，PTEN）是一種腫瘤抑制基因，在細胞生長、凋亡、黏附、遷移、浸潤等方面有重要作用。近年來發現PTEN基因變化與人類多種惡性腫瘤的發生發展密切相關[2]，而PTEN與宮頸癌病變的關系目前尚無定論，所以PTEN的研究對宮頸癌的診斷和治療有重要價值。本研究采用一抗+生物素化二抗+辣根酶標記鏈霉卵白素酶標親和素-生物素技術（labelled streptavidinbiotin technique，SP）檢測宮頸癌及正常宮頸組織中PTEN的表達水平，結合臨床病例的分期、腫瘤分級、淋巴結是否轉移進行統計學分析來探討PTEN對宮頸癌發生、發展的作用。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取廣東省汕頭市中心醫院病理科2009年6月～2010年6月保存的宮頸石蠟包埋組織90例，包括正常宮頸組織20例（從因子宮肌瘤全宮切除的石蠟包埋組織中選取），宮頸癌組織70例；患者年齡23～70歲，平均35.8歲，所有患者取標本前均未接受放、化療及免疫治療，所有的組織標本均由兩名職稱、年資相當的病理醫師診斷。宮頸癌的臨床分期采用國際婦產科聯盟（FIGO）2009年修訂的臨床分期，其中Ⅰ期41例，Ⅱ期29例，中高分化60例，低分化10例，淋巴結轉移17例。

1.2 實驗方法

標本制好后免疫組化染色采用SP法，具體實驗操作步驟如下：抗原修復后的組織切片用磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗，5 min×3次；3%過氧化氫甲醇溶液，孵育10 min；PBS沖洗，5 min×3次；每張切片加50 μL非免疫性動物血清，室溫下孵育10 min后吸去多余的液體；每張切片加50 μL的一抗，置于4℃冰箱過夜；PBS沖洗，5 min×3次；每張切片加50 μL生物素標記的二抗，室溫下孵育10 min；PBS沖洗，5 min×3次；每張切片加50 μL鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶溶液，室溫下孵育10 min；PBS沖洗，5 min×3次；二氨基聯苯胺（DAB）顯色蘇木精復染，中性樹膠封固。用PBS代替一抗作陰性對照。以細胞核著色為PTEN蛋白陽性反應。

1.3 統計學方法

采用統計軟件SPSS 13.0對數據進行分析，計數資料以率表示，采用χ2檢驗。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 PTEN在正常宮頸組織及宮頸癌組織中的表達

正常宮頸組織中表達呈黃褐色或棕黃色，主要表達于細胞核中；宮頸癌中表達呈不著色或淺黃色，主要表達于細胞核中。見圖1～4。

PTEN在正常宮頸組織陽性表達率為100%（20/20），PTEN在宮頸癌組織中的陽性表達率為70%（49/70），宮頸癌中PTEN的表達明顯低于正常宮頸組織，差異有高度統計學意義（χ2=7.83，P ＜ 0.01）。 見表1。

表1 第10染色體同源丟失磷酸酶-張力蛋白基因在正常宮頸、宮頸癌組織中的表達

2.2 PTEN表達與宮頸癌臨床病理指標的關系

PTEN在宮頸癌臨床分期Ⅰ期的陽性表達率為75.6%（31/41），PTEN在宮頸癌臨床分期Ⅱ期的陽性表達率為62.1%（18/29），PTEN在宮頸癌臨床分期Ⅱ期組與宮頸癌臨床分期Ⅰ期組中的表達差異無統計學意義（χ2=1.48，P＞0.05）；PTEN在中高分化宮頸癌的陽性表達率為71.7%（43/60），PTEN在低分化宮頸癌的陽性表達率為60.0%（6/10），PTEN在宮頸癌低分化組與中高分化組中的表達差異無統計學意義（χ2=0.56，P＞0.05）；PTEN在無淋巴結轉移的宮頸癌的陽性表達率為73.6%（39/53），PTEN在有淋巴結轉移的宮頸癌的陽性表達率為58.8%（10/17），PTEN在無淋巴結轉移組與有淋巴結轉移組中的表達差異無統計學意義（χ2=1.34，P＞0.05）。PTEN的表達量與宮頸癌的病理分級、臨床分期、淋巴結有無轉移無關。見表2。

表2 第10染色體同源丟失磷酸酶-張力蛋白基因表達與宮頸癌臨床病理指標的關系

3 討論

PTEN是第10染色體同源丟失磷酸酶-張力蛋白基因，又名MMACI，是1997年發現的一種腫瘤抑制基因，是迄今發現的第一具有雙特異性磷酸酶活性的抑癌基因，可通過基因突變、DNA甲基化等方式失活，主要表現為基因缺失、蛋白表達減少[2]。PTEN定位于人類染色體10q23.3上，含9個外顯子，8個內含子。cDNA序列包含由1209個核苷酸組成的開放閱讀框架，編碼403個氨基酸組成的蛋白質。PTEN在細胞生長、凋亡、黏附、遷移、浸潤等方面有重要作用。目前發現PTEN主要有以下功能：①抑制細胞周期，誘導細胞凋亡。②抑制腫瘤血管形成。③抑制腫瘤細胞的轉移和侵襲。PTEN基因在腫瘤細胞浸潤、血管發生和腫瘤惡性轉化中起重要作用[3]。近年來研究發現，PTEN蛋白變化與人類多種惡性腫瘤的發生發展密切相關[4-5]。PTEN基因功能異常主要有等位基因缺失、基因突變、基因沉默和轉錄后翻譯等機制，以突變最為常見。PTEN基因突變使其蛋白表達的突變，如錯構瘤綜合征、膠質瘤、乳腺癌、肝癌、消化道腫瘤等[6]。

本研究顯示，PTEN在宮頸癌組織、正常宮頸組織均有表達，且依次升高，宮頸癌組織與正常宮頸組織差異有統計學差異，提示PTEN蛋白表達下降與宮頸癌的發生有關，這可能是由于PTEN基因的功能缺失使其對腫瘤細胞生長抑制及對細胞黏附的控制減弱，有助于宮頸癌的發生[7]。PTEN的表達量與宮頸癌的病理分級、臨床分期、淋巴結有無轉移無關。

PTEN基因有可能作為早期篩查宮頸癌的指標應用于臨床，來篩查宮頸癌的高危人群，為宮頸癌的早期診斷提供幫助[8]。PTEN基因可作為評價宮頸癌預后的指標。PTEN基因有可能作為宮頸癌基因治療的靶基因應用于臨床。

[1]劉穎，徐建平，黎清.抑癌基因PTEN在宮頸鱗癌中的表達及其意義[J].廣東醫學，2010，31（10）：1293-1294.

[2]Haas KD，Shalev N，Wong M，et al.Protein Kinase B（PKB/Akt）activity is elevated in glioblastoma cells due tomutation of the tumor suppressor PTEN/MMAC[J].Curr Biol，1998，8（21）：1195-1198.

[3]Hriai Y，Tanaka N，Furuta R，et al.Somatic mutations of the PTEN/MMAC1 gene associated with frequent chromosomal loss detected using comparative genomic hybridization in endometrial cancer[J].Gynecol Onocol，2001，83（1）：81-83.

[4]Hamilton JA，Stewart LM，Ajayi L，et al.The expression profile for the tumour suppressor gene PTEN and associated polymorphic markers[J].Br J Cancer，2000，82（10）：1671-1676.

[5]冀靜，顧婷婷，鄭鵬生.mTOR/P70S6K信號通路在宮頸癌組織中的表達及其臨床意義[J].西安交通大學學報：醫學版，2010，31（1）：10-13.

[6]Schondorf T，Gohring UJ，Roth G，et al.Time to progression is dependent on the expression of the tumour suppressor PTEN in ovarian cancer patients[J].Eur J Clin Invest，2003，33（3）：256-260.

[7]Rizvi MM，Alam MS，Mehdi SJ，et al.Allelic loss of 10q23.3,the PTEN gene locus in cervical carcinoma from Northern Indian population[J].Pathol Oncol Res，2012，18（2）：309-313.

[8]胡鴻飛，汪峰，夏世金，等.老年宮頸癌E2-EPF表達與腫瘤深肌層浸潤及盆腔淋巴結轉移關系的研究[J].成都醫學院學報，2012，7（3）：371-374.

[9]楊忠明，丁顯平，龐博，等.人乳頭瘤病毒DNA聯合液基薄層細胞學檢測在宮頸癌篩查診斷中的研究[J].成都醫學院學報，2011，6（4）：320-323.

[10]陳漢明.宮頸癌危險因素調查分析[J].現代醫院，2011，11（1）：44-45.

[11]魏永志，周琰，陳瑞敏，等.抑癌基因PTEN在宮頸癌變過程的表達及意義[J].河北醫藥，2009，31（1）：55-56.