兩種方法檢測(cè)乙型肝炎病毒的對(duì)比分析

鄧 俊

（湖南省第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，長(zhǎng)沙 410007）

乙型肝炎（下稱乙肝）是世界性傳染病，在我國(guó)乙肝患者和無(wú)癥狀攜帶者估計(jì)在1.2億人以上［1］。臨床上對(duì)乙肝標(biāo)志物的檢測(cè)是乙肝流行病學(xué)調(diào)查、預(yù)防和治療監(jiān)測(cè)的重要指標(biāo)。臨床上多采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）對(duì)乙肝標(biāo)志物進(jìn)行定性檢測(cè)。隨著科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展和方法學(xué)的不斷改進(jìn)，乙型肝炎的鑒定有了更多快速、簡(jiǎn)便和靈敏的檢測(cè)方法，如化學(xué)發(fā)光、聚合酶鏈反應(yīng)已逐步應(yīng)用于臨床，這些方法將乙肝標(biāo)志物的檢測(cè)提升到了定量水平。本院檢驗(yàn)科已經(jīng)采用了ELISA和磁微粒化學(xué)發(fā)光酶免疫法兩種方法對(duì)本院門診及住院患者的血清標(biāo)本進(jìn)行乙肝標(biāo)志物的定性和定量檢測(cè)。本文通過應(yīng)用這兩種方法對(duì)相同臨床血清標(biāo)本的乙肝病毒（HBV）標(biāo)志物進(jìn)行檢測(cè)，從而比較兩種方法所測(cè)結(jié)果是否存在差別，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 血清標(biāo)本 選取2011年7月在本院檢測(cè)HBV項(xiàng)目的門診和住院患者的血清標(biāo)本44例。

1.1.2 儀器 日本東曹株式會(huì)AIA-1800ST化學(xué)發(fā)光免疫分析儀、上海雷勃全自動(dòng)酶標(biāo)儀MK3、深圳匯松科技PW-960全自動(dòng)酶標(biāo)洗版機(jī)。

1.1.3 試劑 ELISA試劑采用北京萬(wàn)泰生物藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)的乙型肝炎酶免測(cè)定試劑、化學(xué)發(fā)光免疫分析儀試劑采用儀式配套的乙型肝炎血清標(biāo)志物檢測(cè)試劑。

1.2 方法

1.2.1 ELISA法檢測(cè)乙型肝炎表面抗原（HBsAg）和乙型肝炎表面抗體（抗-HBs）嚴(yán)格參照試劑說(shuō)明書操作；結(jié)果判斷：樣品A值小于臨界值（cut off）者為陰性，樣品A值大于或等于臨界值為陽(yáng)性。本試驗(yàn)選取cut off＝0.105時(shí)的檢測(cè)結(jié)果為分析數(shù)據(jù)。

1.2.2 日本東曹株式會(huì)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀使用磁微粒化學(xué)發(fā)光酶免疫法定量檢測(cè)HBsAg和抗-HBs。HBsAg≥0.05U／mL為陽(yáng)性，抗-HBs≥6.4mU／mL為陽(yáng)性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS13.0軟件，對(duì)比ELISA法和磁微粒化學(xué)發(fā)光酶免疫法檢測(cè)的HBsAg和抗-HBs結(jié)果，運(yùn)用配對(duì)四格表資料的χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

磁微粒化學(xué)發(fā)光酶免疫法檢測(cè)HBsAg陽(yáng)性為5例，占總數(shù)的11.36%，ELISA檢測(cè) HBsAg陽(yáng)性為6例，占總數(shù)的13.64%，兩種方法檢測(cè)HBsAg結(jié)果的符合率為97.73%（43／44）。配對(duì)卡方檢驗(yàn)（McNemar Test）P 值為1.000＞0.05，顯示兩種方法所測(cè)結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果見表1。

表1 兩種方法檢測(cè)HBsAg的結(jié)果［n（%）］

磁微粒化學(xué)發(fā)光酶免疫法檢測(cè)抗-HBs陽(yáng)性為29例，占總數(shù)的65.91%，ELISA檢測(cè)抗-HBs陽(yáng)性為24例，占總數(shù)的54.55%，兩種方法檢測(cè)抗-HBs結(jié)果的符合率為88.64%（39／44）。配對(duì)χ2檢驗(yàn)（McNemar Test）P值為0.063＞0.05，顯示兩種方法所測(cè)結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果見表2。

表2 兩種方法檢測(cè)抗-HBs的結(jié)果［n（%）］

3 討 論

HBsAg是HBV感染后第一個(gè)出現(xiàn)的血清學(xué)標(biāo)志物，提示機(jī)體感染HBV，常見于急性肝炎、慢性肝炎或無(wú)癥狀攜帶者。是乙型肝炎感染的重要指標(biāo)之一。抗-HBs是一種保護(hù)型抗體，意味著機(jī)體對(duì)HBV有免疫力，常出現(xiàn)在乙型肝炎急性感染恢復(fù)期或者HBsAg疫苗免疫成功以后。文獻(xiàn)［2-4］認(rèn)為：抗-HBs＞10mU／mL時(shí)，機(jī)體才具有抵御HBV入侵的能力。HBV血清標(biāo)志物的準(zhǔn)確檢測(cè)對(duì)于乙肝的流行病學(xué)監(jiān)測(cè)和診斷有著十分重要的作用。所以好的檢測(cè)方法非常重要。

ELISA操作簡(jiǎn)單，價(jià)格便宜，靈敏度好，適用于大批量標(biāo)本的檢測(cè)，但因受到試劑、標(biāo)本、人工操作和環(huán)境等各方面因素的影響［5－6］以及定性的檢測(cè)水平，已不能滿足臨床對(duì)乙肝標(biāo)志物準(zhǔn)確定量檢測(cè)的要求。而磁微粒化學(xué)發(fā)光酶免疫法采用全自動(dòng)酶免化學(xué)發(fā)光技術(shù)，避免了人工操作帶來(lái)的誤差，并能精準(zhǔn)的進(jìn)行定量檢測(cè)，很好地填補(bǔ)了ELISA方法的不足。然而，不同檢測(cè)方法結(jié)果的差異會(huì)明顯地影響HBV感染篩查和臨床診斷的準(zhǔn)確性［7］。

通過對(duì)比兩種方法所測(cè)結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)，二者所測(cè)HBsAg結(jié)果符合率很高，44例標(biāo)本中，只有1例標(biāo)本結(jié)果不同，ELISA所測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性，而磁微粒化學(xué)發(fā)光法所測(cè)結(jié)果為陰性。通過對(duì)方法學(xué)的分析，ELISA為陽(yáng)性可能是由于洗板不干凈或其他人工操作誤差而導(dǎo)致了吸光值偏高，為假陽(yáng)性結(jié)果。抗-HBs雖然符合率相對(duì)較低，但比較兩種方法所得結(jié)果的差異時(shí)，可發(fā)現(xiàn)ELISA法判為陰性的5個(gè)標(biāo)本，其磁微粒化學(xué)發(fā)光酶免疫法所測(cè)抗-HBs的值分別為9.6mU／mL、8.10 mU／mL、10.50mU／mL、10.50mU／mL和12.30mU／mL，都在10mU／mL左右，數(shù)值不是很高。說(shuō)明兩種方法檢出差異主要集中在低濃度區(qū)。該結(jié)論與朱火星［8］的結(jié)論相符合。

雖然χ2檢驗(yàn)所得結(jié)論認(rèn)為兩種方法在檢測(cè)HBV標(biāo)志物方面無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但在個(gè)別樣本中還是存在結(jié)果的不同，如對(duì)低濃度抗-HBs檢測(cè)時(shí)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。所以在實(shí)際工作中，醫(yī)務(wù)工作者需要對(duì)有差異的結(jié)果進(jìn)行綜合性分析，除進(jìn)行重復(fù)檢測(cè)以外，為確保結(jié)果的準(zhǔn)確性，可以通過其他方法如膠體金法、聚合酶鏈反應(yīng)法等方法給予輔助判斷，從而得到可靠的結(jié)果，這樣才能更好地為臨床服務(wù)。

［1］ 藺承艷，鈕瓊.HBV血清標(biāo)志物ELISA檢測(cè)法中的鉤狀效應(yīng)［J］.海南醫(yī)學(xué)，2010，21（5）：114-115.

［2］ 譚璐.化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析法與酶聯(lián)免疫法測(cè)定乙肝標(biāo)志物的比較［J］.實(shí)用醫(yī)技雜志，2008，15（3）：294-295.

［3］ 洪俊，繞永彩.全自動(dòng)發(fā)光免疫分析儀在HBV血清標(biāo)志物檢查中的應(yīng)用［J］.職業(yè)與健康，2010，26（3）：276-278.

［4］ 黃道連.ELISA法檢測(cè)乙型肝炎兩對(duì)半影響因素分析與對(duì)策［J］.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2007，4（8）：758-759.

［5］ 謝璟，崔江龍，王宏碧，等.ELISA法對(duì)乙肝六項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果的影響及處理對(duì)策［J］.實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2011，29（1）：83-84.

［6］ 王璐.ELISA法檢驗(yàn)乙肝標(biāo)志物影響因素的探討［J］.醫(yī)學(xué)理論與實(shí)踐，2012，25（4）：451-452.

［7］ Chen Y，WuW，Li LJ，et al.Comparison of the results for three automated immunoassay systems in determining serum HBV markers［J］.Clin Chim Acta，2006，372（1／2）：129-133.

［8］ 朱火星.化學(xué)發(fā)光法和酶聯(lián)免疫法應(yīng)用于乙肝病毒血清學(xué)效果比較［J］.當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2010，16（16）：89-90.