凝聚胺法與微柱凝聚法檢測不規則抗體的對比分析

龍華泉，陳世豪，張偉堅（南方醫科大學附屬廣東省江門市新會區人民醫院檢驗科 529100）

臨床患者輸血前進行交叉配血，紅細胞ABO血型系統相合是最重要的，但由于患者多次輸血或其他原因產生的ABO血型系統以外的不規則抗體，如漏檢也會導致受血患者嚴重的輸血反應［1］。為此作者進行凝聚胺法與微柱凝聚法兩種方法在不規則抗體檢測方面的比較，為臨床提供合適的篩檢方法。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2010～2011年本院各科室6 720例預約輸血患者，其中男4 568例，女2 152例，年齡7d至88歲，平均年齡44歲。

1.2 儀器與試劑 TD－2Y醫學檢驗多功能離心機；微柱凝膠卡由中山市生科試劑儀器有限公司提供，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ號篩選細胞、抗人球蛋白試劑和譜細胞均由上海血液生物醫藥有限公司提供。

1.3 方法

1.3.1 標本處理 抽取3mL靜脈血，均用乙二胺四乙酸二鉀（EDTA－K2）抗凝，檢測前進行離心，排除纖維蛋白干擾。

1.3.2 凝聚胺法 向已準備好（患者血漿＋5%篩選細胞）試管各加0.5%篩選細胞低離子介質懸液（LIM）0.7mL，混合均勻后，再各加凝聚胺溶液2滴，并混合均勻；用專用離心機3 400r／min離心10s，然后把上清液倒掉，不要瀝干，讓管底殘留約0.1mL液體；輕輕搖動試管，目測紅細胞有無凝集，如無凝集，則必須重作；最后加入假凝集清除液2滴，輕輕轉動試管混合并同時觀察結果。如果凝集散開，表示是由凝聚胺引起的非特異性聚集，抗體篩檢結果為陰性；如凝集不散開，則為紅細胞抗原抗體結合的特異性反應，抗體篩檢結果為陽性，應進一步作抗體鑒定。

1.3.3 微柱凝聚法 撕開微柱凝膠卡的封膜，于反應腔中依標記分別加入相應的LIM 100μL，各管再加入待檢血漿25 μL；將檢測卡37℃孵育15min取出，置離心機1 800r／min離心2min后取出，根據紅細胞沉降于管腔的部位判斷結果。

1.3.4 確證試驗 兩種方法篩查不規則抗體陽性再用特異性譜細胞在抗人球蛋白介質中進行確證。

1.4 統計學方法 采用SPSS 13.0的χ2檢驗進行統計學處理。

2 結 果

2.1 兩種方法檢測結果 對6 720例預約輸血的患者標本用凝聚胺法和微柱凝聚法篩查不規則抗體陽性率及既往情況見表1。

2.2 不規則抗體特異性鑒定 利用抗人球蛋白法對28例不規則抗體的特異性進行鑒定，其中自身抗體7例（高效價冷凝素5例，溫抗體2例），均為白血病患者；1例腫瘤化療患者推測為藥物抗體；其余20例為血型同種特異性抗體，抗－D 5例，抗－E 7例，抗－C 2例，抗－Ec 2例、抗－JK 1例、抗－Mur 2例以及ABO亞型中抗－A 1例。具體分布見表2。

表1 6 720份標本兩種方法結果（n＝6 720）

表2 不規則抗體特異性分布情況（n＝28）

3 討 論

臨床輸血安全保障日益受到重視，隨著試劑及技術的改進，過去因血型鑒定靈敏度方面的誤差所引起的嚴重輸血反應已鮮有報道。然而，人類紅細胞有29個血型系統，不規則抗體是血清中抗－A、抗－B以外的其他血型抗體，其引起的遲發型輸血反應輕者引起寒戰、發熱，影響治療效果，嚴重者危及患者生命，對孕婦而言，不規則抗體如常見的Rh系統中IgG的抗－D、抗－E／e和抗－C等會引起新生兒溶血病［2］，影響新生兒臟器的發育，并使其智力發育受到傷害，嚴重者則會危及新生兒的生命安全，所以為臨床提供合適的篩查試劑非常重要。早期的鹽水法因只能篩查出IgM抗體早已淘汰，目前應用于臨床的方法主要是凝聚胺法、微柱凝聚法、抗人球蛋白法等。凝聚胺（polymatching）法首先利用低離子介質降低溶液的離子強度，減少紅細胞周圍的陽離子云，促進血清（漿）中的抗體與紅細胞相應抗原結合，再加入帶亞電荷的高價陽離子多聚物－凝聚胺溶液，中和紅細胞表面的負電荷，縮短細胞間距，形成可逆的非特異性聚集，并使IgG型抗體直接凝集紅細胞。加入中和液后，僅由凝聚胺引起的非特異性聚集，會因電荷中和而分散，而由抗體介導的特異性凝集則不會分散。凝聚胺是一種抗肝素藥物，所以對于含肝素的血液標本要稍稍多加一些凝聚胺來中和肝素。有研究報道，凝聚胺法對Kell系統的抗體檢出不理想，所以陰性結果要轉入抗人球蛋白試驗，以免漏檢。K的抗原頻率約為7%，由于K抗原具有較強的免疫原性，所以歐美國家都將Kell作為輸血前血型檢測的必檢項目。中國人群中，Kell血型一直被認為多態性較單一，基本都為K，且K的頻率約為0.07%，因此輸血前不進行K抗原的定型。微柱凝膠技術作為一項免疫學檢測技術，它是凝膠過濾技術和抗原抗體反應的結合，已在歐美等發達國家作為常規性檢測技術應用于臨床，由于凝膠顆粒具有分子篩作用，抗原抗體反應后的紅細胞通過離心經過微柱，無IgG結合的紅細胞穿過凝膠到達底部，而紅細胞上若有IgG抗體結合則會被凝膠中的抗IgG拉住，紅細胞被阻止在凝膠柱上層或中間。本文兩種檢測方法比較差異無統計學意義（P＞0.05），對于凝聚胺法漏檢的2例的不規則抗體特異性鑒定為抗－E和抗－Jka，微柱凝膠檢測結果為陽性，經試驗分析其抗體效價分別為8和4。可見，微柱凝膠法靈敏度更高，效價較低的抗體也可檢測到，這與張晨光等［3］研究比對兩種方法檢測不規則抗體效價的差距相一致。凝聚胺因效價因素漏檢國內也曾有文獻報道［4－6］，另外，凝聚胺法也受人為操作因素影響，如加試劑量、離心機控制、振蕩觀察等等都會帶來人為的誤差而漏檢。相對而言，微柱凝膠法的反應卡操作易掌握、結果穩定、受人為因素的影響小，已成為輸血檢查的推薦方法。

本試驗檢出不規則抗體的患者中，有輸血史22例，妊娠史6例，男性患者13例，而女性患者15例，未見明顯性別傾向，與有文獻報道女性高于男性不同，這可能與研究的總樣本類型分布有關。而總體篩查不規則抗體陽性率為0.42%，與國內文獻報道（0.37%）較一致，但與本省何子毅等［7］報道不規則抗體陽性率（0.09%）有較大差距。不規則抗體大多為Rh血型系統，Rh抗原強弱順序為D＞E＞c＞C＞e，本次篩查出抗－D 3例，抗－E 5例，抗－C 2例，抗－Ec 2例，提示Rh陽性患者輸血也有機會引起溶血反應。根據我國漢族人群Rh抗原分布特點，E抗原陽性比D抗原陽性低，產生E抗體的概率高于D抗體，本次篩查出抗－E占最大比例，故Rh血型系統D抗原陽性E抗原陰性輸血者不容忽視［8］。

綜上所述，不規則抗體的篩選對于臨床輸血安全非常重要，通過比較凝聚胺和微柱凝聚法兩種方法都基本能一致地對輸血前有效把關，對于軟硬件條件較好的大醫院，選用微柱凝聚法是最好的選擇，而對于基層醫院或者急診需要，凝聚胺法以其簡便快速準確、成本低等方面的優點也可推廣使用。

［1］ 彥居，霍樹輝.輸血前后不規則抗體篩查與輸血安全［J］.臨床血液學雜志：輸血與檢驗版，2011，24（3）：357－358.

［2］ Karagol BS，Zenciroglu A，Okumus N，et al.Hemolytic Disease of the Newborn Caused by Irregular Blood Subgroup（Kell，C，c，E，and e）Incompatibilities：Report of 106Cases at a Tertiary－Care Centre［J］.Am J Perinatol，2012，29（6）：449－454.

［3］ 張晨光，張婧婧，龐桂芝，等.血型不規則抗體檢測的方法學評價［J］.檢驗醫學，2010，25（12）：929－930.

［4］ 陳晨，夏愛軍，穆士杰，等.抗－Jka，抗S抗體致溶血性輸血反應1例［J］.第四軍醫大學學報，2009，30（2）：99.

［5］ 張娜，張林偉，韓美芳.微柱凝膠與凝聚胺法檢測不規則抗體的臨床應用［J］.中國醫藥指南，2012，10（6）：38－39.

［6］ 祁琳.微柱凝膠法和凝聚胺法檢測IgG抗體效價的比較［J］.蘇州大學學報：醫學版，2011，31（1）：161－162.

［7］ 何子毅，劉赴平，李偉其，等.受血者血型鑒定準確率及不規則抗體陽性率調查研究［J］.實用醫學雜志，2011，27（5）：877－879.

［8］ 黎村艷，鄭淑娟.微術凝膠法、鹽水法和凝聚胺法在弱抗原抗體反應中的應用［J］.海南醫學，2012，21（12）：116－117.