氯胺嘧草醚原藥的急性毒性試驗研究

汪建良 劉 芳 徐小燕 紀 磊 岑江杰 陳杰

（浙江省化工研究院有限公司，浙江 杭州 310023）

2-嘧啶氧基-N-芳基芐胺類化合物是由浙江省化工研究院和中科院上海有機化學研究所共同發(fā)現(xiàn)的、具有我國自主知識產(chǎn)權(quán)的農(nóng)藥先導結(jié)構(gòu)。該類化合物已獲得中國發(fā)明專利ZL 00130735.5[1]，并申報了 PCT 國際發(fā)明專利[2]，目前已獲得美國 （US6,800,590 B2）、 加拿大（CA2425984）、 韓國 （KR0511489）、 墨西哥（MX 234202）、 歐 盟 （EP 1327629 B1） 和 日 本 （JP 4052942）發(fā)明專利，具有國際原創(chuàng)性。自1998年以來在國家農(nóng)藥創(chuàng)新項目的資助下，對此先導結(jié)構(gòu)進行系統(tǒng)的優(yōu)化研究，已成功開發(fā)了油菜田除草劑丙酯草醚、異丙酯草醚和溴嘧草醚（ZJ0777），以及玉米田除草活性物ZJ2528，水稻田除草活性物ZJ0862，棉花田除草活性物SIOC0426和SIOC0991等。ZJ1835是在對該先導結(jié)構(gòu)進行優(yōu)化時發(fā)現(xiàn)的棉花田除草活性化合物，化學名稱為N-苯基-2-(4,6-二甲氧基-2-嘧啶氧基)-6-氯-芐胺（Ⅰ）。該化合物除草活性較高，殺草譜較廣，施藥方法簡單且生產(chǎn)成本較低[3]。鑒于對該先導結(jié)構(gòu)不可預知的安全性問題，本文根據(jù)GB15670-1995《農(nóng)藥登記毒理學試驗方法》的規(guī)定和要求，對本公司自主研發(fā)的98%氯胺嘧草醚原藥（開發(fā)代號：ZJ1835）進行了急性經(jīng)口、經(jīng)皮、吸入毒性試驗以及眼刺激、皮膚刺激試驗研究，為該類藥的安全使用提供毒理學依據(jù)。

1 材料與方法

1．1 材料

受試物為98%氯胺嘧草醚原藥，白色顆粒，有刺激性氣味，由本公司自主研發(fā)，試驗時根據(jù)需要進行粉碎過篩或用玉米油配制成所需濃度。

1．2 實驗動物

急性經(jīng)口、經(jīng)皮、吸入毒性試驗各選用SD品系清潔級健康成年大鼠10只，雌雄各半，體重180～220 g，由浙江省實驗動物中心提供（許可證號：SCXK<浙>2008-0033）。眼刺激、皮膚刺激試驗各選用普通級健康新西蘭種家兔，體重2～3 kg，雄性。由浙江省實驗動物中心提供（許可證號：SCXK<浙>2009-0039）。試驗前檢疫觀察1周。

1．3 實驗方法

按國家標準GB15670-1995《農(nóng)藥登記毒理學試驗方法》[4]進行。

1．3．1 急性經(jīng)口毒性試驗 采用灌胃方式。按限量法設(shè)染毒劑量為5000 mg/kg·BW。

1．3．2 急性經(jīng)皮毒性試驗 采用皮膚涂藥方式，按限量法設(shè)染毒劑量為2000 mg/kg·BW，敷貼4 h。4 h后用溫水除去殘留受試物。

1．3．3 急性吸入毒性試驗 根據(jù)預試驗結(jié)果按限量法設(shè)染毒劑量為2000 mg/kg·BW，染毒2 h。采用天津合普HOPE-MED8050A/B型吸入染毒系統(tǒng)進行全身暴露式動式吸入染毒。受試物用CO型氣流粉碎機 （中日合資宜興清新粉體機械公司）粉碎后，經(jīng)粉塵發(fā)生器送入染毒柜內(nèi)噴射粉塵形成氣溶膠，連接FC-1A型大氣采樣器（北京勞動保護科學研究所）進行采樣，用濾膜質(zhì)量法監(jiān)測濃度。停止染毒后取出動物置新鮮空氣處。

1．3．4 家兔眼刺激試驗 粉狀受試物0.1 g倒入左側(cè)眼結(jié)膜囊內(nèi)，右側(cè)以蒸餾水為正常對照。

1．3．5 家兔皮膚刺激性試驗 剪去脊柱兩側(cè)被毛，皮膚無損傷。將受試物0.5 g加約0.50 mL玉米油濕潤涂布于左側(cè)皮膚去毛區(qū)，右側(cè)以玉米油為對照，敷貼4 h。4 h后用溫水洗去殘留受試物。

1．3．6 觀察指標 動物癥狀及死亡數(shù)、眼損傷程度評分、皮膚刺激反應(yīng)評分。

2 結(jié)果

2．1 大鼠急性經(jīng)口和經(jīng)皮毒性試驗

實驗期間大鼠精神和身體狀況未見異常，無死亡。實驗結(jié)束后解剖未見異常。結(jié)果顯示，雌雄大鼠經(jīng)口LD50>5000 mg/kg，經(jīng)皮LD50>2000 mg/kg。根據(jù)《農(nóng)藥登記毒理學試驗方法》的標準，受試物的急性經(jīng)口和經(jīng)皮毒性均屬于低毒。

2．2 大鼠急性吸入毒性試驗

染毒期間平均濃度為2060±125 mg/m3，濃度監(jiān)測結(jié)果（見表1）。動物染毒后1 h出現(xiàn)扎堆、活動減少及閉眼等癥狀。染毒結(jié)束，動物呼吸新鮮空氣后逐漸恢復正常。動物體重在試驗期間正常增長（見表2）。實驗結(jié)束后解剖未見異常。雌雄大鼠急性吸入LC50>2000 mg/kg。根據(jù)農(nóng)藥急性吸入毒性分級標準判定為低毒。

表1 急性吸入毒性試驗氣溶膠濃度監(jiān)測表

表2 急性吸入毒性試驗動物體重變化表

2．3 家兔眼刺激試驗

給藥1 h后家兔眼結(jié)膜輕微充血伴少量分泌物，虹膜和角膜無異常。24 h所有家兔恢復正常。1 h眼刺激積分指數(shù)（I.A.O.I.）最高為4，眼刺激的平均指數(shù)（M.I.O.I.）48 h后為0。根據(jù)農(nóng)藥眼刺激強度評價標準判斷為“無刺激性”。

2．4 家兔皮膚刺激性試驗

家兔背部皮膚試驗側(cè)與對照側(cè)皮膚均未見異常，根據(jù)農(nóng)藥皮膚刺激強度分級標準判斷為“無刺激性”。

3 討論

伴隨農(nóng)業(yè)發(fā)展水平的不斷提高，我國創(chuàng)制新農(nóng)藥品種也越來越多，農(nóng)藥的安全性問題也越為人們所關(guān)注。氯胺嘧草醚是新創(chuàng)制的對棉田主要雜草防效較高的除草劑，具有較高的市場開發(fā)潛力，該化合物的急性毒性研究未見有報道[3]。本研究顯示其急性經(jīng)口毒性、急性經(jīng)皮毒性、急性吸入毒性均屬低毒，對眼、皮膚亦無刺激性，但吸入毒性試驗和眼刺激試驗表現(xiàn)出輕微癥狀。其結(jié)果表明，氯胺嘧草醚是較為安全的除草劑，在生產(chǎn)和使用過程中應(yīng)重點加強對眼和鼻的防護，防止眼睛粘膜和鼻粘膜的接觸。

氯胺嘧草醚是2-嘧啶氧基-N-芳基芐胺類化合物。本研究結(jié)果顯示該化合物的急性毒性安全性較高，但由于急性毒性試驗只是了解了農(nóng)藥進入機體的途徑、急性中毒癥狀、有無刺激性、中毒劑量及致死量，而不能說明長期接觸微量農(nóng)藥引起的后果[5,6]。為保護生產(chǎn)者和施用者的安全，在急性毒性基礎(chǔ)上，進一步對該類化合物的遺傳毒性和長期毒性進行研究，加強對人類和環(huán)境的保護。

[1] 呂龍，吳軍，陳杰，等．2-嘧啶氧基芐基取代苯基胺類衍生物：中國，ZL00130735．5[P]．2003-11-12．

[2] 呂龍，陳杰，吳軍，等．2-嘧啶氧基芐基取代苯基胺類衍生物制備方法和應(yīng)用：世界PCT專利，WO 02/34724 A1[P]．2002-05-02．

[3] 徐小燕，臺文俊，陳杰，等．N-苯基-2-(4,6-二甲氧基-2-嘧啶氧基)-6-氯-芐胺(ZJ1835)的除草活性研究[J]．農(nóng)藥學學報，2011，13(4)：427-430．

[4]GB15670-1995．農(nóng)藥登記毒理學試驗方法[S]．

[5] 王捷，羅紅嘩，宋宏宇．農(nóng)藥工業(yè)與安全評價[J]．農(nóng)藥，1999，38(10)：25-26．

[6] 劉政．農(nóng)藥的開發(fā)與安全性評價[J]．化工勞動保護，1990，11(4)：184-186．