化學(xué)發(fā)光檢測(cè)方法學(xué)在丙型肝炎病毒的臨床診斷價(jià)值

黃 琳 彭 杰 何錦文

1.★珠海市人民醫(yī)院／暨南大學(xué)醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東珠海 519000；2.海南醫(yī)學(xué)院理學(xué)院生物科學(xué)專業(yè)，海南?？?571199

丙型肝炎病毒顆粒直徑30~60 nm,含類脂外膜，是一種單股正鏈RNA病毒。據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì),全球丙型肝炎病毒(HCV)流行率約為3%，我國(guó)是丙肝病毒感染的高流行地區(qū)，抗-HCV流行率為3.2%[1]，比全球丙肝病毒感染率偏高。據(jù)報(bào)道，慢性丙型肝炎患者10年內(nèi)約有20%發(fā)展為肝硬化，肝硬化患者每年約3%發(fā)展為肝細(xì)胞癌。如何選擇一種靈敏、準(zhǔn)確、及時(shí)的丙型肝炎病毒檢測(cè)方法, 對(duì)于丙型肝病毒的診療具有重要意義。目前，不同方法學(xué)檢測(cè)丙型肝炎病毒的特異性和靈敏度往往存在較大的差異。本文就實(shí)驗(yàn)室對(duì)丙型肝炎病毒不同的檢測(cè)方法作對(duì)比分析。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2012年11月—2013年4月珠海市人民醫(yī)院感染科50例疑似HCV感染的血液標(biāo)本，其中男性26例，年齡23～71歲,平均42.1歲,女性24例,年齡22～69歲,平均40.1歲。

1.2 試劑和儀器

抗-HCV ELISA診斷試劑盒購(gòu)自珠海麗珠試劑股份有限公司，HCV膠體金試紙條 購(gòu)自英科新創(chuàng)（廈門）科技股份有限公司，HCVCLIA試劑購(gòu)自雅培貿(mào)易（上海）有限公司，F(xiàn)Q-PCR試劑購(gòu)自深圳凱杰生物有限公司。主要實(shí)驗(yàn)儀器：美國(guó)雅培I2000儀器，雷勃多功能酶標(biāo)儀，全自動(dòng)洗板機(jī),數(shù)字顯示三用恒溫箱，黑馬低溫高速離心機(jī)，干式恒溫箱,美國(guó)Agilent Stratagene Mx3000P PCR擴(kuò)增儀。

1.3 檢測(cè)方法

所有受檢者經(jīng)禁食8～10 h后，次日清晨空腹抽取靜脈血5 mL于促凝管，以4000r／min的速度離心10 min分離血清，血清標(biāo)本當(dāng)天放置于-80℃以下存放，所有標(biāo)本凍融不超過(guò)3次。抗HCV-抗體檢測(cè)方法有：化學(xué)發(fā)光法、ELISA法、膠體金試紙法；HCV-RNA檢測(cè)方法：FQ-PCR-HCV法；操作方法和結(jié)果判斷嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)要求。上述試劑盒及儀器均一直處于穩(wěn)定的室內(nèi)質(zhì)控，并取得良好的室間質(zhì)評(píng)成績(jī)的工作狀態(tài)下。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)原理

采用SPSS 17軟件，采用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

①50例可疑陽(yáng)性標(biāo)本中，HCV-CLIA檢測(cè)陽(yáng)性為46例，陽(yáng)性率為92%。抗HCV-ELISA法陽(yáng)性37例，陽(yáng)性率為74%。膠體金法陽(yáng)性32例，陽(yáng)性率為64%。FQ-PCR法42例，陽(yáng)性率為84%。P＜0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 50例可疑丙肝病毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法學(xué)之間檢測(cè)結(jié)果比對(duì)

②將46例HCV-CLIA法陽(yáng)性標(biāo)本按照S/CO值≤2.0，2.019.01，共分成A,B,C,D組。A組共有6例，其中膠體金法、ELISA法結(jié)果均為陰性、FQ-PCR法陽(yáng)性1例；B組共有8例，其中膠體金法共有陽(yáng)性4例，ELISA法共有陽(yáng)性6例，F(xiàn)Q-PCR法共陽(yáng)性8例；C組共有10例，其中膠體金法共有陽(yáng)性6例，ELISA法共有陽(yáng)性9例，F(xiàn)Q-PCR法共陽(yáng)性10例;D組共有22例，其中膠體金法共有陽(yáng)性22例，ELISA法共有陽(yáng)性22例，F(xiàn)Q-PCR法共陽(yáng)性22例。P＜0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 4組HCV-CLIA法S/CO值區(qū)間各方法學(xué)的陽(yáng)性率的對(duì)比

表3 4組HCV-CLIA法S/CO值區(qū)間各方法學(xué)與PCR符合率的對(duì)比

③4組HCV-CLIA法S/CO值區(qū)間各方法學(xué)與PCR符合率的對(duì)比情況是，HCV-CLIA法S/CO值≤2.0共有6例，其中膠體金法、ELISA法的符合率均為66.67%，HCV-CLIA法符合率為33.33%。HCV-CLIA法S/CO值2.019.00共有22例，膠體金法、ELISA法、HCV-CLIA法與PCR法的符合率均為100%。P＜0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，結(jié)果見(jiàn)表3。

3 討論

丙型肝炎嚴(yán)重威脅人類健康，丙型肝炎病毒（Hepatitis C virus，HCV）感染后表現(xiàn)為較為復(fù)雜的病程，由急性期、慢性期直至發(fā)展成肝硬化、肝癌，還有隱匿性HCV感染。準(zhǔn)確、可靠的HCV 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)是預(yù)防與控制疾病并進(jìn)行有效病程預(yù)后和藥物治療的前提。因此,探索一種簡(jiǎn)便快捷、重復(fù)性好且窗口期短的HCV檢測(cè)方法,可以有效地對(duì)丙型肝炎病毒進(jìn)行篩查?；瘜W(xué)發(fā)光分析法作為一種靈敏度高、線性范圍寬的檢測(cè)方法,目前已廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、生物、食品、環(huán)境和微生物等領(lǐng)域的檢驗(yàn)分析[2],特別是在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中得到了廣泛應(yīng)用[3-4]。本文結(jié)果顯示,在丙型肝炎病毒（HCV）實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)方法學(xué)中，CLIA法檢出靈敏性和特異性顯著高于ELISA法、膠體金法，但是當(dāng)其S/CO低于或等于2.00時(shí)，假陽(yáng)性率顯著增高。雖然CLIA法在低含量時(shí)假陽(yáng)性率偏高，但相比較而言HCV-CLIA法具有操作簡(jiǎn)便、快速、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn),尤其適合大批量抗-HCV的篩查[5]。

膠體金法和ELISA法檢測(cè)丙型肝炎病毒抗體相對(duì)來(lái)說(shuō)敏感性低,金標(biāo)法檢測(cè)靈敏度較ELISA法略低,兩法結(jié)果無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。在丙肝感染早期,由于大多數(shù)丙肝感染者體內(nèi)丙型肝炎抗體尚未出現(xiàn),不能通過(guò)ELISA法和膠體金法檢測(cè)HCV抗體作為臨床診斷。對(duì)于高度疑似的急性HCV感染者，如肝功能損傷，ALT水平異常升高者，而ELISA法或膠體金法檢測(cè)丙型肝炎病毒抗體陰性時(shí),需進(jìn)一步用化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行檢測(cè)，如有必要可做病毒核酸檢測(cè)。

丙肝病毒抗體檢測(cè)有助于丙肝的早期發(fā)現(xiàn)和治療。目前國(guó)內(nèi)外大多數(shù)以丙肝病毒抗體陽(yáng)性來(lái)證實(shí)丙肝病毒感染,由于病毒感染窗口期的存在,如何選擇檢測(cè)方法對(duì)丙肝病毒是否感染至關(guān)重要。丙肝病毒抗體檢測(cè)陰性不能完全排除丙肝病毒感染。有文獻(xiàn)報(bào)道丙肝抗體陰性仍有0.16%丙肝病毒核酸陽(yáng)性[6]。

隨著免疫學(xué)及免疫學(xué)技術(shù)的飛速發(fā)展，HCV 檢測(cè)不論在方法學(xué)還是在臨床應(yīng)用上，均取得了較大進(jìn)展，但每一種方法均有其各自的優(yōu)缺點(diǎn)，這直接決定了該方法的臨床使用程度和其結(jié)果的可比性。丙型肝炎病程進(jìn)展較為復(fù)雜，早期不易檢出，急性期與慢性期難以區(qū)別，很多為隱匿性感染，更不易被發(fā)現(xiàn)，慢性化進(jìn)程難以監(jiān)控。因此，選擇簡(jiǎn)便、快速、靈敏度高、特異性好的方法學(xué)對(duì)丙型肝炎早期的診斷尤其重要，以利于早期確定丙型肝炎感染，合理制定藥物治療方案。

[1] 戴志澄，祁國(guó)明.中國(guó)病毒性肝炎血清流行病學(xué)調(diào)查（上卷）,1992-1995[M].北京：科學(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社,1995:60-71.

[2] 馬明湘,郭屏,肖友益,等.地震災(zāi)后短期疾病譜的變遷及醫(yī)療預(yù)防應(yīng)對(duì)措施探討[J].中山大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)科學(xué)版,2008,29(4):372-374.

[3] 王正國(guó).實(shí)用創(chuàng)傷救治指導(dǎo)手冊(cè)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，2008:23-25.

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[5] 姚仁南,陳復(fù),興陳玲,等.化學(xué)發(fā)光免疫分析法檢測(cè)獻(xiàn)血者HCV抗體的應(yīng)用評(píng)價(jià)[J].中華全科醫(yī)學(xué),2011,9(3):450-453.

[6] 雷永良,紀(jì)勇平,吳麗雅.抗-HCV檢測(cè)陰性獻(xiàn)血者HCV-RNA流行率調(diào)查[J].中國(guó)輸血雜志,2002,15(4):264-265.