卡介苗／結核菌純蛋白衍化物治療哮喘患兒的機制研究

李慶忠，張秀瓏

（1.海南省海口市婦幼保健院兒科571000；2.河北省北方學院第一附屬醫院，河北張家界075601）

支氣管哮喘是世界公認的醫學難題，被世界衛生組織列為疾病中四大頑癥之一，以嗜酸性粒細胞、肥大細胞、T淋巴細胞浸潤為主要表征，常以多種細胞因子及炎性介質參與的氣道變態反應性炎癥［1－2］。卡介苗（BCG）接種可能會改變機體的免疫應答，早期接種BCG可以用來預防哮喘。結核菌純蛋白衍生物（PPD）作為結核桿菌的減毒活疫苗，臨床用于診斷小兒結核病和判斷小兒接種BCG的效果，有類似BCG的抗原性，且有較好的安全性［3－4］。早在1997年，Shirakawa等［5］觀察到，接種BCG后PPD陽性的患者，不僅是過敏反應的癥狀，而且哮喘的發病率及嚴重程度均較PPD陰性者明顯減少。鑒于此，作者擬用BCG／PPD聯合治療哮喘患兒，通過反復加強刺激患兒體內免疫功能來治療哮喘患兒，通過檢測患者血清白細胞介素（IL－4）、IFN－γ、IL－10水平的變化，為哮喘患兒的免疫治療方法提供新的手段。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2007年7月至2010年6月來本院兒科就診的哮喘患兒，患者年齡5～14歲，男女不限，皮內注射5個結核菌素單位的PPD試驗進行篩選，剔除哮喘外無其他疾病，剔除標準：（1）不符合上述標準的兒童；（2）PPD實驗陽性。將哮喘患兒按隨機原則分為BCG干預組（A組），平均（6.8±2.4）歲，其中輕度患兒19例，中度患兒17例，共36例和未干預組（B組），平均（6.6±2.7）歲，輕度患兒16例，中度患兒18例，共34例；另外，選擇健康兒童31名作為對照組（C組）。

1.2 方法 A組按照全球哮喘治療創議方案給予常規治療，治療的同時進行接種BCG（0.25mg／0.5mL，在上臂外側三角肌中部略下處皮內注射0.1mL）4周PPD轉陽后每月予PPD5單位皮內注射，B組按照全球哮喘治療創議方案給予常規治療。C組為對照組，未給予任何治療。

1.3 檢測指標及評估方法 評價標準控制：患兒6個月內哮喘未發作；顯效：治療后患兒哮喘未再發作或偶爾發作，但病情輕微很快即可緩解；改善：治療后發作頻率大幅度降低，癥狀、體征得到改善；無效：患兒的哮喘發作頻率及癥狀體征均無改善或加重。總有效＝控制＋顯效＋改善。

1.3.1 PPD試驗方法 采用皮內注射，以1mL注射器抽取0.1mL含5個結核菌素單位的BCG／PPD，過48～72h后觀測反應結果。

1.3.2 IL－4、IL－10、INF－γ含量檢測 分別在治療前及總療程治療6個月后，檢測患兒血IFN－γ、IL－4、IL－10水平，評估哮喘患兒臨床癥狀及哮喘控制等級。采集患者及對照組外周靜脈血3mL（避免溶血），3 000r／min離心10min，收集上層血清，置－20℃環境保存待測。用美國R＆D公司試劑盒，采用ELISA法，檢測IL－4、IFN－γ、IL－10。

1.4 統計學處理 采用SPSS13.0統計軟件進行分析，計量資料以±s表示，多組均數比較采用方差分析，計數資料采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 不同治療組之間療效比較 兩組患兒控制效果比較觀察組哮喘控制率及總有效率明顯高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 干預組及非干預組療效比較［n（%）］

2.2 3組血清細胞因子的比較 治療前干預組、未干預組在血清IFN－γ、IL－4、IL－10和IFN－γ／IL－4比值差異無統計學意義（P＞0.05）；干預組、未干預組與對照組IL－4、IFN－γ、IL－10和IFN－γ／IL－4比較，差異有統計學意義（P＜0.05）；治療后干預組、未干預組血清IFN－γ、IL－10和IFN－γ／IL－4較治療前上升、IL－4水平下降，差異有統計學意義（P＜0.05）；干預組與未干預組比較，差異有統計學意義（P＜0.05），見表2。

表2 治療前各組IFN－γ、IL－10、IL－4水平（±s）

表2 治療前各組IFN－γ、IL－10、IL－4水平（±s）

＊：P＜0.05，與C組比較；＊＊：P＜0.05，與同組比較；△：P＜0.05，與B組治療后比較。

IL－4 A組 36 治療前 135.14±12.31＊ 28.17±7.25＊＊ 16.92±4.71＊ 5.11±0.98組別 n IFN－γ（ng／L） IL－4（μg／L） IL－10（pg／mL） IFN－γ／＊治療后 204.32±16.26＊＊△ 8.71±2.95＊＊△ 31.18±4.54＊＊△ 25.32±8.75＊＊△B組 34 治療前 134.17±13.24＊ 29.21±7.13＊＊ 17.11±4.36＊ 4.92±1.13＊治療后 142.18±15.81＊＊ 23.15±5.32＊＊ 22.34±5.21＊＊ 6.17±1.61＊＊C組 31 對照組 204.29±19.43 6.91±1.42 34.21±2.41 29.52±8.54

3 討 論

目前，關于支氣管哮喘（簡稱哮喘）發病機制研究較多，但發病機制至今仍然不是很明確，可能與遺傳、免疫、神經及精神等多種因素有關，并提出了多種學說解釋哮喘的發病機制。目前廣為接受的是Th1／Th2比例失衡學說［6］。Th0向Th1、Th2細胞分化時發生偏移，而哮喘是一種Th2細胞介導的疾病。Th2型細胞因子如IL－3、IL－4、IL－5的增多及 Th1型細胞因子IL－2、IL－12及IFN－γ的減少［7－8］。免疫學上將哮喘的發病過程分成3個階段，即初級致敏階段；包括過敏原刺激，T細胞活化、IL－4產生、IE合成增多及效應細胞施放介質；第二階段及慢性過敏階段：以Th1／Th2比例降低，IL－5產生增多，嗜酸性粒細胞活化、增生及聚集為主要特征；第三階段：慢性炎癥引起氣道結構重塑［9］。可見，在上述過程中Th1／Th2比例失衡貫穿在各個階段中，Th1／Th2比例失衡對哮喘的發生及發展有重要的意義。研究Th1／Th2失衡機制，有可能闡明哮喘的發生、發展的機制。

IFN－γ和IL－4是一對相互拮抗的細胞因子，IFN－γ可以抑制IL－4mRNA轉錄水平，抑制由IL－4誘導的B細胞表達FcεRⅡ，達到抑制體內IgE合成的目的。IL－10屬于一種抗炎因子，在哮喘發病機制的調節過程中，通過抑制抗原遞呈細胞的生長，從而控制由抗原誘導的特異性免疫反應［10］。現代研究發現，當哮喘患者存在Th1細胞功能低下時，IL－10為一種抑炎而非致炎因子，可以促使Th2細胞功能亢進。這表明IL－10可以作用于自身免疫性疾病炎癥發展的多個環節，參與了哮喘的發病機制［11］。

1997年，Shirakawa等［5］觀察到，接種BCG后PPD陽性的

患者，哮喘的發病率及嚴重程度均較PPD陰性者明顯減少。隨后動物實驗證實BCG在哮喘中的預防作用［12－13］，它可使IFN－γ產生增多，上調 Th1／Th2的比例，能糾正 Th1／Th2的偏移。那么在人體中，接種BCG是否也能通過影響細胞因子的分泌，調整Th1／Th2比例，發揮治療哮喘的作用。

本實驗結果顯示，在常規治療的基礎上給予BCG／PPD干預后，哮喘的總有效率明顯上升，較常規組明顯。同時血清IFN－γ、IL－10和IFN－γ／IL－4較治療前上升、IL－4水平下降，同時較常規組也有明顯差異。說明了給予BCG／PPD干預后能明顯通過上調IFN－γ及IL－10，抑制IL－4的表達發揮作用。由于既往研究表明哮喘患者免疫系統通過IFN－γ、IL－10、IL－4抑制 Th1，而活化了 Th2細胞功能，促進疾病的發生、發展［14－15］。通過本實驗可以得出BCG／PPD促進Th1，抑制Th2的作用，可以逆轉Th1／Th2細胞比例和功能失衡，調節免疫功能，抑制哮喘的發生、發展。

總之，BCG／PPD聯合治療給藥不僅能降低哮喘患兒血清細胞因子IL－4水平，升高血清IFN－γ和IL－10水平，逆轉Th1／Th2細胞比例和功能失衡，改善哮喘患兒免疫失衡。

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