兩種細胞學涂片檢測并免疫組化技術聯合在肺腺癌胸腔轉移診斷中的應用價值

李軍紅

肺腺癌患者晚期常伴有胸腔轉移, 產生大量胸腔積液,結核、炎癥等病變也可導致產生大量胸腔積液。胸腔積液的性質確定尤為重要。傳統的方法是靠胸腔積液離心后的沉淀物涂片, 光鏡觀察細胞形態來診斷。由于受到涂片質量的限制加上診斷過于主觀, 使一部分病例難以獲得明確診斷。本文重點探討傳統細胞學涂片、液基細胞學檢測并免疫組化技術聯合應用在胸腔積液中的應用, 尤其是對胸腔積液中脫落的肺腺癌細胞的診斷價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取鄭州大學附屬洛陽市中心醫院病理科2010年1月至2012年3月臨床送檢的胸腔積液375例, 從中再選取查見異型增生細胞103例, 行免疫組化CEA、CK、TTF-1、CR、Desimin、Vimentin、P53、NapsinA 染色 , 篩出符合肺腺癌32例。

1.2 儀器及耗材 Thinprep 2000 System、Baiyang Centrifuge Factory、IKA Vibrax VXR basic 震蕩儀、新柏氏 TCT 專用玻片、Cytolyt 清洗液、PreservCyt保存液。

1.3 方法 用吸管吸取經自然沉淀的胸腔積液標本的底層液體 50ml置入離心管中 ；2500 r/min 離心 8～10 min, 棄去上清液；加入20ml的Cytolyt 清洗液, 將盛有標本的離心管在 IKA Vibrax VXR basic震蕩儀上震蕩 10 min ；重復 2500r/min離心8～10 min, 棄去上清液；吸取PreservCyt保存液沖洗離心管中的標本, 使之轉移至含有PreservCyt保存液的新柏氏專用標本瓶內；靜置15 min后用Thinprep 2000 System按說明自動完成制片；95%乙醇固定, HE染色, 在OLYMPUS BX51光學顯微鏡下兩名診斷醫師閱片查見異型增生細胞者再重新制片行免疫組化染色進一步診斷。

1.4 免疫組化試劑及方法 查見異型增生細胞得標本用Thinprep 2000 System 根據需要再進行制片8張, 免疫組化采用 EliVision 法 , 一 抗 CEA、、TTF-1、NapsinA.、CK 、CR、Desimin、Vimentin、P53及二抗均購自福州邁新生物技術開發有限公司(第一抗體見表1), 嚴格按照試劑盒說明書進行染色, 設陰性及陽性對照。

表1 抗體來源和濃度及表達部位

2 結果

2.1 HE染色鏡檢 375例新柏氏液基細胞學涂片背景清晰,涂片均勻, 篩出異型增生細胞103例, 閱片時發現細胞大小不一、細胞核染色質不勻、顆粒較粗、核大小為正常淋巴細胞的2倍及以上、可見小核仁、單核或多核、核漿比升高、細胞聚集成花環狀等指標均視為異型增生細胞。

2.2 免疫組化結果 103例異型增生細胞標本每例均重新 制 片 8張 , 分 別 行 CEA、CK、TTF-1、CR、Desimin、 Vimentin、P53、NapsinA染色, 結果見表2。

表2 103例異型增生細胞免疫組化結果(n)

3 討論

胸腔積液或滲出液是脫落細胞學主要組成部分之一, 是常見的臨床體征, 細胞學檢查主要用于確定有無惡性腫瘤細胞, 可伴或不伴有已知原發灶。探尋胸腔積液的性質不僅有利于明確診斷及分期, 而且在指導治療、分析預后等方面也非常重要。

早期的脫落細胞學檢查一般采用傳統的普通涂片法, 但傳統厚薄不均勻, 大多數細胞會堆積在一起, 且涂片面積大,觀察時間長, 易產生疲勞、粗心、漏診, 且送檢材料無法較長時間保管, 發現疑似腫瘤細胞也無法用原送檢材料進一步檢查。本組375例胸腔積液行傳統涂片查見異型增生細胞87例。近年來, 新柏氏液基細胞學檢測(TCT)技術在細胞學領域得到較廣泛的應用并取得了良好的效果, 其優缺點及應用前景尚在探索階段［1］。新柏氏TCT制片的標本經儀器正負壓交替對細胞進行全面收集, 使標本的質量大大提高, 特制的玻片有很好的黏附性, 使細胞分布均勻、平鋪, 不易掉片, 且背景清晰,減少了紅細胞和粘液的影響, 細胞核結構更清晰, 更有意義的是收集到的細胞成分可以保存在含有PreservCyt保存液的新柏氏專用標本瓶內, 涂片發現異型增生細胞后可以重復制片進行免疫組化標記, 進一步明確診斷。但缺點是：腫瘤特有的背景也會破壞, 且其制片工序較復雜。本組行液基細胞學檢測查見異型增生細胞79例。兩種方法各有優缺點, 但單純就提高肺腺癌在胸腔積液的檢出率而言, 兩種方法同時制片可以提高惡性細胞的陽性診斷率［2］。本組兩者聯合檢出異型增生細胞103例, 說明兩種方法可互為補充。

單純的細胞形態學因其敏感性低、經驗性強, 經常會遇到一些診斷困難的病例, 難以滿足臨床需要, 最大的鑒別診斷困難在間皮細胞、組織細胞與癌細胞之間。近代研究證實,免疫細胞化學已成為最常使用的特殊診斷手段［3］。由于肺腺癌細胞和間皮細胞表達的抗體常交叉存在, 只用一種或兩種抗體通常不能滿足診斷, 有抗體選擇組合的報道［4］, 但尚無統一的標準。筆者選用的組合是CEA、TTF-1、NapsinA.、CK 、CR、Desimin、Vimentin、P53。以上多種抗體的聯合使用并結合細胞形態學改變, 可顯著提高肺腺癌的檢出率,并有免疫組化的客觀證據, 為一些晚期腫瘤患者提供有效地治療依據, 也可為以胸腔積液為首發癥狀患者提供診斷思路。

［1］ 杜蕓, 劉鹿寧, 王珩, 等.液基細胞學在非婦科領域的應用分析 .臨床與實驗病理學雜志 , 2008,24(4)：495-496.

［2］ 王莉莉, 續薇.腫瘤細胞學診斷漿膜腔積液病變性質的臨床應用價值 .中國實驗診斷學 , 2012, 16(5)：910-911.

［3］ 宋東明, 朱安峰.免疫細胞化學染色技術在胸水、腹水診斷中的應用 .吉林醫學 , 2012,33(28)：6082-6084.

［4］ 龔建華,何麗,周茂林.細胞塊技術在肺腺癌胸腔轉移診斷中的應用價值.中國醫師進修雜志,2012,35(4)：41-43.