Dubin-Johnson 綜合征肝細胞色素和脂褐素的超微結構特征

孟祥慈 黃曉峰 韓 英 王文勇 李永強 亢君君

1.第四軍醫大學基礎醫學院中心實驗室，陜西西安 710032；2.安徽省蕭縣人民醫院普外科，安徽蕭縣 235200；3.第四軍醫大學西京消化病醫院，陜西西安 710032；4.第四軍醫大學基礎醫學院病理學與病理生理學教研室，陜西西安 710032

家族性結合型高膽紅素血癥有2種類型：Rotor 綜合征和Dubin-Johnson 綜合征。Dubin-Johnson 綜合征于1954年由Dubin 和Johnson 首先報道，是一種慢性、良性、間歇性黃疸[1]，主要為結合型高膽紅素（直接膽紅素）血癥。由于肝細胞內性質未明色素的沉積使肝臟呈黑色[2]。研究發現沉積的色素顆粒不是黑色素[3]，而溶酶體在某些肝臟疾病中起重要作用，尤其是某些代謝紊亂[4-7]。脂褐素是溶酶體消化后殘留的成分，是人類肝臟常見的色素，推測肝細胞脂褐素與這些色素可能有關。本研究主要觀察了該綜合征肝細胞內顆粒的超微結構特點并與脂褐素顆粒進行了比較。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇第四軍醫大學西京消化病醫院2009年1月～2011年11月門診和住院的患者18例，其中，男11例，年齡 14～46 歲，平均（26.7±10.3）歲；女7例，年齡 17～48 歲，平均 （34.0±12.5）歲。其中10例患者有典型的 Dubin-Johnson 綜合征的表現，如持續性結合型高膽紅素血癥（直接膽紅素升高）、總膽紅素為28.2～59.6 μmol/L，直接膽紅素為15.3～35.8 μmol/L。肝穿刺組織肉眼呈黑色、肝臟組織學檢查正常，肝細胞內有色素沉積、Bromsulphale 清除異常。3例患者只發現黃褐色色素沉積。色素用Gmelin 和鐵染色陰性。HE 染色、消化后PAS 染色、Hueck 反應、氨銀染色和Schmorl 反應都顯示與脂褐素相同。1例入院時有輕度黃疸、惡心、嘔吐。在入院前1年出現類似發作。體檢發現脫水和輕度黃疸。入院第2天，嘔吐停止，4 d 后鞏膜黃染消退。4例患者以黃疸入院，體檢發現肝臟位于右肋緣下1 cm，無鞏膜黃染。所有病例均進行了經皮肝穿刺活檢，病理檢查確診為Dubin-Johnson 綜合征。

1.2 方法

為進行比較研究，對18例患者的肝臟活檢標本進行了透射電鏡檢查。用于電鏡檢查的活檢標本固定于25 g/L 戊二醛4 h，用10 g/L 鋨酸后固定1 h，PBS 洗滌后、梯度酒精脫水、Epon 812 包埋。玻璃刀切半薄切片甲苯胺藍染色光鏡觀察定位后，進行70 nm 超薄切片；醋酸鈾、檸檬酸鉛染色后，JEM-2000EX 透射電鏡（日本電子光學有限公司）觀察。

2 結果

半薄切片甲苯胺藍染色發現，肝細胞內有明顯色素沉積，主要見于肝細胞毛細膽管周圍（圖1A）。定位切取含色素顆粒部位肝組織進行超薄切片，鈾、鉛染色后發現肝細胞內有特征性的單層膜包裹顆粒。大小為0.2～1.0 μm。顆粒大多聚集于毛細膽管周圍區域的肝細胞內 （圖1B），也可散在分布于肝細胞質內（圖1C）。顆粒通常包括3種成分：沉積有鐵蛋白樣的基質、電子致密體和脂樣小滴（圖1D）。這些顆粒缺少典型脂褐素顆粒的分葉結構，每個溶酶體部分為多形性，電子密度不一。常存在許多與脂滴相關非常致密的小體，而溶酶體的其余部分由中等電子密度的均一性顆粒物組成，表現為點彩狀外觀。與脂褐素相比，它們相對富含顆粒狀基質，而脂滴樣結構少見（圖1E），這些顆粒可互相融合，形成更大的不規則結構（圖1F）。肝小葉中央區可發現大量無定形顆粒（圖1B），這些顆粒缺少脂滴樣結構。相反，在肝小葉周圍的肝細胞內電子致密小體豐富（圖1E）。在某些方面，它們類似脂褐素，但與脂褐素不同的是，某些顆粒內含有明顯的致密核心結構。

3 討論

通常Dubin-Johnson 綜合征觀察到的顆粒與脂褐素一樣由3種成分組成：沉積有鐵蛋白樣顆粒的基質、電子致密小體和脂滴樣結構。肝小葉中央區，顆粒幾乎全由基質組成，有時為無定形結構。這些顆粒可能是黑肝的原因。需要強調的是在Dubin-Johnson 綜合征肝小葉中央區未發現脂褐素樣顆粒，在周圍區有些顆粒類似脂褐素。肝細胞脂褐素常在老年人或疾病狀態出現。在代謝性障礙、Gilbert綜合征[8]、濫用止痛劑、胃潰瘍、不明原因肝大患者也曾發現脂褐素顆粒。不同個體，Dubin-Johnson 綜合征顆粒的微細結構變化較大，甚至在典型的Dubin-Johnson 綜合征病例也是如此。文獻中至少有3 類Dubin-Johnson 綜合征變型：無黃疸脂色素肝功能障礙、體質性高膽紅素血癥伴血清非結合膽紅素和肝臟脂色素樣色素，介于Rotor 和Dubin-Johnson 綜合征之間的中間綜合征。在某些大家族的Dubin-Johnson 綜合征，研究發現色素沉積程度與膽紅素血清濃度無關。

綜上所述，脂褐素沉積可出現在多種病理情況下，包括體質性高膽紅素血癥。一般組織化學方法不容易鑒別Dubin-Johnson 綜合征的色素以及脂褐素。肝小葉中央脂褐素樣色素沉積是Dubin-Johnson 綜合征的診斷指標之一，但不具有特異性。正如本研究所發現沉積有鐵蛋白樣顆粒的基質是Dubin-Johnson 綜合征的特點之一，而且顆粒可互相融合，顆粒內還可出現致密核心。這些具有致密核心結構的特殊色素顆粒是其他任何高膽紅素血癥患者肝活檢都沒有發現的，可作為Dubin-Johnson 綜合征的超微結構特征，具有特殊的診斷價值。這些顆粒與肝臟變色之間的關系以及這些顆粒與高膽紅素血癥之間的關系還有待研究。

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