全自動血紅蛋白分析儀在地中海貧血篩查診斷中的應用

馬升俊 肖永君 韋子斌 許成良

南寧市第二人民醫院檢驗科，廣西南寧 530031

地中海貧血簡稱地貧，是一種常染色體顯性遺傳性疾病，是由于珠蛋白基因缺失或突變導致珠蛋白肽鏈合成障礙引起的溶血性貧血。本病以地中海沿岸國家和東南亞各國多見，在我國以廣東、廣西、海南等省區發病率較高，被世界衛生組織列為危害人類健康的6種常見病之一[1]。目前，采用高效液相色譜法（HPLC）的全自動血紅蛋白分析儀已越來越多地應用于地貧篩查診斷[2]，為了解該儀器在地中海貧血篩查診斷中的臨床應用價值，本研究對5738例受檢樣本進行檢測分析，并對篩查異常者進行地貧基因檢測，其分析結果如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2011年1月～2012年6月在南寧市第二人民醫院生殖醫療中心就診，并接受地貧篩查診斷的育齡人群5738例，其中，男2498例，女3240例，年齡23～48歲。對篩查異常者進行地貧基因檢測。所有受檢對象用EDTA-K2真空抗凝管采集靜脈血2 mL。

1.2 儀器與試劑

美國BIO-RAD 公司生產的VARIANTⅡ全自動血紅蛋白分析儀及配套試劑；美國應用生物系統公司提供的ABI9700 核酸擴增儀；珠海黑馬醫學儀器公司的GSG-2000 核酸凝膠圖像分析系統；廣州達安基因公司提供的α、β地中海貧血基因診斷試劑盒；深圳亞能公司提供的α地中海貧血點突變試劑盒。

1.3 方法

樣本采集后用VARIANTⅡ全自動血紅蛋白分析儀進行地貧篩查；將篩查結果異常的樣本，采用多重聚合酶鏈反應（PCR）和反向斑點雜交法（RDB）進行地貧基因檢測，檢測 6 種常見的 α 地貧 （--SEA、-α3.7、-α4.2缺失及 CS、QS、WS點突變）和 14種常見 β 地貧（-29M、-28M、17M、βEM、41-42M、43M、71-72M、654M、31M、IVSI-5M、IVSI-1M、27-28M、14-15M、IntM）。

1.4 判斷標準

HbA2降低和（或）出現快速區帶初診為α地貧，HbA2和HbF 一項或兩項增高初診為β地貧；HbA2 和HbF 正常參考范圍為2.5%～3.5%和＜1.5%；以上任意一項或多項異常則判斷為地貧篩查異常。

2 結果

2.1 血紅蛋白分析篩查結果

5738例受檢者中，共篩查出830例異常，篩查檢出率為14.46%（830/5738）。按診斷標準，篩查擬診α地貧480例，占 57.83%（480/830），篩查檢出率為 8.37%（480/5738）。擬診β 地貧316例，占38.07%（316/830），篩查檢出率為5.51%（316/5738）。擬診 β 復合 α 地貧 11例，占 1.33%（11/830），篩查檢出率為0.19%（11/5738）。此外，檢出異常區帶HbH 13例，HbE 8例，HbQ 2例，分別占1.57%、0.96%和0.24%。830例地中海貧血篩查異常分布特點見表1。

2.2 地貧基因檢測結果

830例篩查異常者經地貧基因分析，確診743例，確診率為89.52%（743/830）。基因診斷為 α 地貧的有413例，占55.59%（413/743），符合率為 86.04%（413/480）；診斷為 β 地貧313例，占 42.13%（313/743），符合率為 99.05%（313/316），有4例診斷為β復合α地貧；診斷為β復合α地貧17例，占2.29%（17/743），在初診的11例中有10例相符合，符合率為90.91%（10/11），1例基因診斷為β地貧；在13例出現HbH 區帶病例中基因診斷均為中間型α地貧；8例出現HbE 區帶經基因診斷5例為βEM/N 地貧，3例為β復合α地貧；2例出現HbQ 區帶基因檢測均為-α4.2/αα。743例地貧基因型分布特點見表2。

3 討論

地中海貧血是屬于珠蛋白基因缺失或突變所造成的遺傳性疾病，按其受累基因分為α地貧和β地貧。地貧的篩查常用血紅蛋白電泳、紅細胞指數、紅細胞脆性試驗等方法，雖操作要求低，成本低廉，但又因其敏感性和特異性較低，人為影響因素較大，存在較多的漏診和誤診現象。臨床上對地貧的診斷和鑒別主要依靠血紅蛋白分析，但最后的確診和類型判斷常需要采用基因診斷[3]。本次研究用的全自動血紅蛋白分析儀應用HPLC 對人血紅蛋白HbA2 及HbF 進行自動化定量的測定，可將地貧初步分類為α地貧和 β 地貧，同時還可檢測出HbS、HbE、HbQ、HbJ 等異常血紅蛋白，是一個介于篩查與確診的試驗；HPLC 法與堿性電泳法相比，具有快速高效、自動化程序高、準確性和重復性良好等優點[4]。

表2 743例地貧基因型分布特點

本次研究，以基因分析作為參考方法，采用HPLC 技術的全自動血紅蛋白分析儀對5738例育齡人群進行地貧篩查，共篩查出830例異常，篩查檢出率為14.46%，與盧秋維[5]報道的14.27%相近。其中，α地貧篩查檢出率為8.37%，經地貧基因診斷符合率為86.04%，以輕型--SEA/αα地貧為主，其次為靜止型 -α3.7/αα地貧。對13例篩查出現HbH 區帶的樣本進行基因檢測，結果均為中間型α地貧（-α3.7/--SEA 8例，-α4.2/--SEA2例，αCSα/--SEA2例，αWSα/--SEA1例）。研究結果表明，HPLC 法檢測血紅蛋白對中間型α地貧有較高的符合率，而對輕型和靜止型α地貧有較高漏診率；由于臨床上α地貧常表現為HbA2含量偏低或正常[6]，因此，通過HbA2結果降低對α地貧篩查起一定提示作用[7]。而HPLC法檢測血紅蛋白對β地貧是介于篩查與診斷之間的一個比較理想的方法，已被國際地貧協會推存為β地貧的常規篩查方法[8]。本次研究，β地貧篩查檢出率為5.51%，經地貧基因診斷符合率為99.05%，篩查結果與基因診斷有良好的符合性。由于β地貧復合α地貧時，多表現為β地貧的特征[9]，本次研究，有4例基因診斷為β復合α地貧其篩查初診為β地貧；在8例篩查出HbE 區帶病例中，有3例診斷為 β 復合 α 地貧（βEM/N 復合-α3.7/αα 2例，βEM/N 復合--SEA/αα 1例），因此，對篩查出的β地貧在做基因診斷時應同時進行α地貧基因檢測，以避免漏診。

本次研究結果表明，應用HPLC 法的全自動血紅蛋白分析儀對β地貧的診斷有良好的符合性，對α地貧有一定的提示作用，在沒有條件進行地貧基因檢測的地區，該方法結合臨床資料、常規檢查，可用于地貧的篩查診斷。

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[6]胡翊群.臨床血液學檢驗[M].北京：中國醫藥科技出版社，2004：260-277.

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