火把花中不同部位表兒茶素的含量測定

王賢英，謝香菊，李勝容

（重慶市中藥研究院，重慶 400065）

火把花學名昆明山海棠 Tripterygium hypoglaucum Hutch(THH），又名粉背雷公藤、金剛藤等，是衛茅科雷公藤屬落葉披散或蔓狀灌木植物。火把花一名始載于《本草綱目》，《李時珍集解》曰：“生滇南者花紅，呼為火把花。”《植物名實圖考》稱昆明山海棠，《滇南本草》稱紫金皮，《中藥大辭典》《全國中草藥匯編》《中國有毒植物》等都有收載。我國昆明山海棠資源豐富，多集中于云南楚紅、紅河、玉溪、昆明、四川德昌等地。關于火把花的藥用部位還有許多爭議，但上海市藥品檢驗所1990年的調查表明，主要藥用部位為根、根皮及莖枝[1]。火把花的化學成分非常復雜，長期研究發現火把花含有生物堿類[如雷公藤堿 （wilfordie）、雷公藤次堿（wilfori）等]、二萜類[如雷公藤甲素（triptonide）等] 、苷類、糖類、有機酸類（如齊墩果酸）、多糖、β－谷甾醇、酚性物質(表兒茶素)等多種化學成分，具有抗炎、抗腫瘤、抗生育等藥理活性。火把花的功能主治為“祛風除濕，舒筋活絡，清熱解毒”，臨床常用于治療類風濕性關節炎、慢性腎炎、白血病、紅斑狼瘡、跌打勞傷、皮膚瘙癢等疾病，其療效顯著。由于當前中藥材資源越來越缺乏，為了控制藥材質量，又要充分利用好藥材資源，本試驗采用高效液相色譜法，不但對火把花的根、根皮、莖枝的主要化學成分表兒茶素含量進行了測定，而且對人們容易忽視的葉的化學成分表兒茶素含量也進行了測定。

1 儀器與試藥

LC－2010A型高效液相色譜儀，Shimadzu CLASS－VPV6.12SP4工作站（日本島津公司），色譜柱 Diamonsil（鉆石）C18柱(250mm×4.6 mm，5μm)，SK250LH型超聲儀（上海科導超聲儀器有限公司），梅特勒－托利多AB265－S型電子分析天平。乙腈為色譜純，甲醇為分析純，水為超純水，表兒茶素對照品（中國藥品生物制品檢定所提供，批號為878－200101），火把花根（去皮）、火把花根皮、火把花莖枝、火把花葉均采自四川德昌。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；0.63%冰醋酸溶液－甲醇 － 乙腈（82.5 ∶2 ∶15.5）為流動相，流速 1.0 m L ／min，檢測波長280 nm，進樣量10μL，理論塔板數按表兒茶素峰計算，應不低于2 500。

2.2 溶液制備

精密稱取干燥至恒重表兒茶素對照品適量，加甲醇制成每1 mL含 0.1 mg的溶液，即得對照品溶液。取藥材樣品適量，粉碎，過四號篩，取約2 g，精密稱定，置50mL量瓶中，加水飽和的乙酸乙酯 40 mL，超聲處理（功率 250W，頻率 50 kHz）30min，放冷，加水飽和的乙酸乙酯至刻度，搖勻，濾過，精密量取續濾液25 mL，蒸干，殘渣加甲醇適量使溶解并轉移至10mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得供試品溶液。色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.3 方法學考察

線性關系考察：精密稱取表兒茶素對照品3.8 mg于25 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，經0.45μm濾膜濾過，即得質量濃度為0.152 g／L的表兒茶素對照品溶液，分別取該溶液 2，4，6，8，10，20 μL 于高效液相色譜儀，測定各色譜峰積分面積，以峰面積為縱坐標（Y）、表兒茶素進樣量為橫坐標（X）繪制標準曲線，計算得回歸方程 Y＝791 232.6X－8 922.3(r＝0.999 96)。結果表明，表兒茶素進樣量在 0.304 ～3.04 μg范圍內呈良好的線性關系。

精密度試驗：分別精密吸取表兒茶素對照品溶液各10μL按各自的色譜條件，反復進樣6次。結果的 RSD＝0.73%，說明儀器精密度較好。

穩定性試驗：精密吸取新配制的表兒茶素對照品溶液各10μL，按上述色譜條件，分別于 1，2，4，5，6 h各進樣 1次，共進樣 5次，5次測定相對應峰的峰面積，表明對照品溶液在6 h以內穩定。精密吸取新配制的供試品溶液10μL[火把花根（去皮）]，分別于0，1，2，3，4 h進樣 1 次進行測定，計算表兒茶素含量，RSD ＝1.9% ，表明供試品溶液4 h以內穩定。

重現性試驗：取同一火把花根（去皮）各5份，分別研成細粉，按照供試品制備方法制備供試品溶液，取各供試品溶液10μL，并按上述色譜條件進行測定，其5次測定結果的 RSD為0.9%，表明其重現性較好。

加樣回收試驗：取火把花根（去皮）粉（含量為 0.200 1mg／g，過四號篩）適量，分別稱取約2 g，精密稱定9份，分別精密加入表兒茶素對照品（質量濃度為 0.152 g／L）1，3，5m L 各 3 份，按照供試品制備方法“表兒茶素”制備供試品溶液，并按上述色譜條件測定，計算回收率。結果見表1。

表1 火把花根（去皮）中表兒茶素回收率試驗測定結果

2.4 樣品含量測定

分別稱取不同部位的藥材樣品，粉碎，過四號篩，各取約2 g，精密稱定，按照樣品供試品制備方法制備供試液，采用高效液相色譜法外標一點法，分別精密吸取對照品溶液10μL與各供試品溶液10μL，依正文各自色譜條件測定，計算本品中表兒茶素的含量。

表2 火把花藥材中不同部位表兒茶素含量測定結果

3 討論

根據文獻報道[2]，選擇280 nm作為測定表兒茶素的檢測波長，流動相為 0.63% 冰醋酸溶液 － 甲醇 － 乙腈（82.5 ∶2 ∶15.5）。

火把花的化學成份非常復雜，其中有的成分與雷公藤相似，僅含量有差別，而有的僅見于火把花。從以上測定結果可以看出，同種火把花藥材中，表兒茶素含量：根＞莖＞皮＞葉。火把花植物是野生的，目前還沒有種植，為了保護火把花藥材資源，要充分利用火把花各不同藥用部位的成分含量，物盡其用。因此對該植物進行更深入的開發研究是很有必要的。

[1]楊小紅，張偉程，陳 香.火把花根的研究概況[J].中醫藥臨床雜志，2007，19（3）:315 － 317.

[2]曲銀鋒，李松武，劉乃強，等.HPLC法測定小兒瀉速停顆粒中兒茶素和表兒茶素的含量[J].食品與藥品，2009，11(5):39－41.